全 文 :3 讨论
311 由于银杏中内酯类成分在紫外光区吸收小, 检
测灵敏度低, 因此本实验采用H PL C2EL SD 法进行
测定。但 EL SD 的信号响应不同于紫外检测器, 其
信号与浓度间的关系不是直接成线性, 而是成对数
线性关系, 本实验的结果也证实了该理论。
312 从实验结果可以看出, 同一提取物不同批号之
间银杏内酯类成分的含量有比较大的差别, 说明对
原料必须有更严格的控制, 从药材的采集到原料的
提取, 都需制定严格统一的标准, 以保证质量。
313 EL SD 的使用应注意所用流动相的蒸发残渣
及载气的含水量, 其中四氢呋喃对内酯类成分的分
离起了很好的作用, 但其量的增加会使检测器噪音
增大, 检测灵敏度降低。
314 方法学考察结果显示该方法准确度高、专属性
强、灵敏度及稳定性均较好, 测定方法可靠, 测定结
果能客观反映银杏提取物的内在质量。
References:
[ 1 ] W ang H , Chen S Z, Zhao G B, et a l1 A nalysis of the facto rs
that affected active ingredien ts from G inkg o leaves [J ]1 Ch in
T rad it H erb D rug s (中草药) , 1999, 30 (8) : 63126331
[ 2 ] L i C Y1 Research developm ent of G inkg o [J ]1 W orld P hy 2
tom ed (国外医药·植物药分册) , 1993, 14 (5) : 27022721
[ 3 ] L u F S, Chen W , Feng F, et a l1 T he con ten ts of ter2penelac2
tones in the G inkg o in jection [J ]1 J Ch ina P harm U niv (中国
药科大学学报) , 2001, 32 (1) : 342361
毛细管气相色谱法测定枳实及其提取物中有机氯农药残留量
惠玉虎, 王让成Ξ
(西安皓天生物工程技术有限责任公司, 陕西 西安 710075)
枳实为芸香科植物酸橙 C itrus au ran tium L 1
的幼果。其中主要含有生物碱、黄酮、挥发油。枳实
及其提取物中的生物碱辛弗林、N 2甲基酪胺等成分
具有强心、升压及对外周血管等多种功能与作用[1 ]。
有机氯农药在我国已禁用多年, 但由于它性质稳定,
在环境中可以存在几年甚至几十年。因此, 测定枳实
及其提取物中的有机氯农药残留量具有十分重要的
意义。本实验对枳实及其提取物中有机氯农药残留
测定方法进行了研究[2, 3 ]。结果表明, 该方法易于操
作、重现性好, 可用于枳实及其提取物中的有机氯农
药残留量测定。
1 材料与仪器
试剂均为分析纯, 水为二次重蒸馏水。Α2BHC、Β2BHC、Χ2BHC、∆2BHC、PP′2DD E、PP′2DDD、O P′2
DD T、PP′2DD T、PCNB (纯度大于 99% ) 由国家标
准物质研究中心提供。枳实为广西、湖南产, 由西安
天诚医药生物工程有限公司崔树玉博士鉴定, 提取
物由西安天诚医药生物工程有限公司生产。
GC—14B 带 ECD 电子捕获检测器的气相色谱
仪 (日本岛津) , KQ —250 型超声波清洗器 (江苏昆
山超声仪器公司)。
2 方法与结果
211 色谱条件: 毛细管色谱柱 Supelco PT E25 (30 m ×0125 mm ×0125 mm , 美国 Supelco 公司) ; 汽化室温度: 230 ℃; 检测器温度: 290 ℃; 柱温为程序升温, 初始 100 ℃, 保持 015 m in, 25 ℃öm in 升至 270℃, 保持 5 m in; 进样量: 2 ΛL ; 进样方式为不分流进样; 载气为高纯氮, 体积流量为 2 mL öm in; 尾吹气为高纯氮, 体积流量为 20 mL öm in。在上述色谱条件下, 理论塔板数按 Α2BHC 峰计算不低于 5×105两个相邻色谱峰分离良好。212 对照品储备液的制备: 分别精密称取 Α2BHC、Β2BHC、Χ2BHC、∆2BHC、PP′2DD E、PP′2DDD、O P′2DD T、PP′2DD T、PCNB 对照品适量于 100 mL 量瓶中, 加入少量苯溶解后, 用石油醚配制成质量浓度分别 为 1106、1100、1116、1112、1106、1109、0199、0195、1107 m gömL 的对照品储备液。213 混合对照品溶液的制备: 分别精密量取 Α2BHC、Β2BHC、Χ2BHC、∆2BHC、PP′2DD E、PP′2DDD、O P′2DD T、PP′2DD T、PCNB 对照品储备液适量于100 mL 量瓶中, 加石油醚至刻度, 制成质量浓度分别 为 0179、1149、0186、0183、1158、1162、1148、1142、0180 ΛgömL 的混合对照品溶液。214 标准曲线的绘制: 分别精密量取混合对照品溶液 0110、0115、0120、0150、1100 mL 于 10 mL 量瓶中, 加石油醚至刻度, 进样测定, 进样量 1 ΛL , 分别以
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Ξ 收稿日期: 2004203204
各组份峰面积为纵坐标, 质量浓度为横坐标绘制标准 曲线, 计算标准曲线方程和相关系数, 结果见表 1。
表 1 标准曲线试验结果
Table 1 Results of standard curve test
组 份 标准曲线 r 线性范围ö(Λg·mL - 1)Α2BHC Y = 11162 3×105 X - 01424 3×10- 3 01999 9 719×10- 4~ 719×10- 3Β2BHC Y = 11235 7×105 X - 11310 0×10- 3 01999 8 1149×10- 3~ 1149×10- 2Χ2BHC Y = 11004 4×105 X - 31154 8×10- 3 01999 9 816×10- 4~ 816×10- 3∆2BHC Y = 11060 7×106 X - 51671 6×10- 3 01999 5 813×10- 4~ 813×10- 3
PCNB Y = 41703 6×106 X - 41392 6×10- 3 01999 1 1158×10- 3~ 1158×10- 2
PP′2DD E Y = 71869 8×105 X - 01136 9×10- 2 01997 0 1162×10- 3~ 1162×10- 2
PP′2DDD Y = 11341 4×105 X - 11664 0×10- 2 01998 4 1148×10- 3~ 1148×10- 2
O P′2DD T Y = 71730 4×106 X - 01367 1×10- 2 01999 1 1142×10- 3~ 1142×10- 2
PP′2DD T Y = 11207 9×105 X - 51310 8×10- 3 01999 0 810×10- 4~ 810×10- 3
215 供试品溶液的制备: 精密称取粉碎混匀的样品
210 g, 置于 100 mL 具塞三角瓶中, 加入 40 mL 丙
酮2石油醚 (2∶8) , 超声提取 30 m in, 抽滤, 并用 60
mL 石油醚分 3 次淋洗, 合并提取液, 将滤液转入干
燥的 250 mL 分液漏斗中, 再用 20 mL 石油醚分 3
次洗涤抽滤瓶, 洗涤液合并于上述分液漏斗中, 使总
体积约为 120 mL。于上述分液漏斗提取液中加入
12 mL 浓硫酸, 振摇数次后静置分层, 弃去下层酸
液, 重复 2 次, 然后用 2% 硫酸钠水溶液洗涤石油醚
两次, 每次 100 mL , 振摇 015 m in, 静置分层后弃去
水层。将石油醚层通过无水硫酸钠脱水, 用少量石油
醚洗涤分液漏斗和无水硫酸钠 3 次, 收集于具刻度
的旋转浓缩瓶中, 在 40 ℃下减压浓缩至 110 mL ,
即得。
216 精密度试验: 精密吸取混合对照品溶液, 重复
进样测定 5 次, 每次进样 2 ΛL , 按上述色谱条件测
定 峰 面 积, R SD 分 别 为 Α2BHC 214%、Β2BHC
118%、Χ2BHC 312%、∆2BHC 315%、PCNB 212%、
PP′2DD E 312%、 PP′2DDD 318%、 O P′2DD T
311%、PP′2DD T 318%。
217 重现性试验: 按供试品溶液制备项下操作步
骤, 制得枳实及其提取物样品溶液各 5 份, 分别进样
2 ΛL , 测定。除 Α2BHC、Β2BHC、Χ2BHC、∆2BHC、PP′2
DD T、PCNB 均未检出外, PP′2DD E、O P′2DDD、
PP′2DD T 检测结果见表 2。
218 回收率试验: 在枳实及其提取物中分别加入一
定量的 Α2BHC、Β2BHC、Χ2BHC、∆2BHC、PP′2DD E、
PP′2DDD、O P′2DD T、PP′2DD T、PCNB 对照品溶
液, 按样品测定项下操作步骤测定, 计算回收率, 结
果见表 3。
219 样品测定: 取枳实及其提取物供试品溶液, 每
份进样两次, 每次进样 2 ΛL , 外标法测定。除 Α2
BHC、Β2BHC、Χ2BHC、∆2BHC、PP′2DD T、PCNB 均
未检出外, PP′2DD E、PP′2DDD、O P′2DD T 检测结果
见表 4。
表 2 重现性试验结果 (n= 5)
Table 2 Results of repetion test (n= 5)
组 份
枳 实
平均值ö(m g·kg- 1) RSDö% 提 取 物平均值ö(m g·kg- 1) RSDö%
PP′2DD E 0103 3114 0101 3101
PP′2DDD 0101 3156 0101 3112
O P′2DD T 0102 2178 0101 3107
表 3 回收率试验结果 (n= 5)
Table 3 Results of recovery test (n= 5)
组
份
枳 实
回收率ö% RSD ö% 提 取 物回收率ö% RSD ö%Α2BHC 97162 2119 98178 3151Β2BHC 98177 3108 99119 2191Χ2BHC 95140 4120 98174 3107∆2BHC 97110 2158 99166 3116
PP′2DD E 96172 3115 99134 2162
PP′2DDD 99148 4126 98162 4108
O P′2DD T 99151 2102 98179 4156
PP′2DD T 98193 3131 99195 2148
PCNB 99166 2189 98185 3142
表 4 样品测定结果
Table 4 Results of sample determ ination
批
号
枳 实ö(m g·kg- 1)
PP′2DDE PP′2DDD O P′2DDT 总DDT 提取物ö(m g·kg- 1)PP′2DDE PP′2DDD O P′2DDT 总DDT
1 0101 0102 - 0103 - 0101 - 0101
2 - 0101 - 0101 - - - -
3 0102 0102 0101 0105 0101 - - 0101
4 0103 - 0101 0104 0101 - - 0101
5 0101 0103 0102 0106 - 0101 0101 0102
3 讨论
本试验曾采用OV 2101、OV 21701 为固定液的
弹性石英毛细管色谱柱试验, 9 种有机氯农药分离
效果不好。选用固定液相当于 SE252, SE254 的 Su2
pelco PT E25 (30 m ×0125 mm ×0125 mm ) 弹性石
英毛细管色谱柱, 在上述色谱条件下, 对 9 种有机氯
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农药分离较好, 在 12 m in 内就能完成分离。
有机氯农药净化多采用磺化法。曾采用在线提
取法, 但存在样品提取液中加浓硫酸磺化时, 分层不
明显的问题。经选用分液漏斗萃取后, 分层明显, 结
果重现性好。
经对 5 批枳实原料及其提取物中分析, 发现除Α2BHC、Β2BHC、Χ2BHC、∆2BHC、PP′2DD T、PCNB 均
未检出外, PP′2DD E、PP′2DDD、O P′2DD T 有检出,
总DD T 枳实原料中质量分数为 0101~ 0106 m gö
kg, 枳实提取物中质量分数为 0101~ 0102 m gökg。
说明DD T 对枳实原料有污染现象, 枳实原料虽经
工艺提取, 但其提取物中仍有少量残留。但无论枳实
原料还是提取物中的残留量符合我国外经贸行业
《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》中DD T 小
于 011 m gökg 的要求。
References:
[ 1 ] Zheng H Z, Dong Z H , She J1M od ern R esearch A pp lica tion of
T rad itiona l Ch inese M ed icine (中药现代研究与应用) [M ]1
Beijing: Xueyuan P ress, 19931
[ 2 ] S tand ard s of the P eop le’s R ep ublic of Ch ina (中华人民共和国
国家标准) [S ]1 GBöT 50091 19219961
[ 3 ] W ang H L , Cheng J M , Zhang S M 1 Study on determ ination
of o rganoch lo rine pesticides residues by gas ch rom atography
[J ]1 Ch in T rad it H erb D rug s (中草药) , 1998, 29 (6) : 3812
3831
HPLC 法测定玉屏风口服液中升麻苷的含量
刘素香1, 万 军2Ξ
(11 天津药物研究院 中药现代研究部, 天津 300193; 21 天津达仁堂达二药业有限公司, 天津 300122)
玉屏风口服液收载于《中华人民共和国药典》
2000 年版一部, 由黄芪, 白术、防风组成, 具有益气,
固表, 止汗的功效, 用于表虚不固, 自汗恶风, 体虚易
感风邪者。原标准中未建立含量测定项。防风解表
祛风, 具有解热、镇痛, 提高机体免疫功能的作用, 升
麻苷为其主要有效成分之一, 故本实验选择升麻苷
作为控制本品质量的指标成分, 并采用H PL C 法测
定升麻苷含量, 建立了该产品的质量标准定量控制
方法, 结果该方法分离效果好, 灵敏, 准确。
1 仪器与试药
W aters 液相色谱仪,M 510 泵, RA IN IN 紫外检
测器, 岛津C—R 6A 数据处理机。升麻苷对照品购
自中国药品生物制品检定所 (批号: 15222200202, 含
量测定用)。乙腈为色谱纯, 去离子水, 甲醇、冰醋酸
等均为分析纯。
2 方法与结果
211 色谱条件: 色谱柱: K rom asil 不锈钢柱 (200
mm ×416 mm , 5 Λm ) (天和色谱实验室填装) ; 流动
相: 乙腈2水2醋酸 (13∶88∶0103) ; 体积流量: 110
mL öm in; 柱温: 室温; 检测波长: 291 nm。
212 对照品溶液的制备: 精密称取升麻苷对照品
5124 m g, 置 50 mL 棕色量瓶中, 加甲醇溶解并稀释
至刻度, 摇匀, 作为对照品储备液。精密吸取对照品
储备液 2 mL , 置 25 mL 棕色量瓶中, 加 70% 甲醇稀
释至刻度, 摇匀, 作为对照品溶液。
213 供试品溶液的制备: 取本品, 精密量取 2 mL ,
置 50 mL 量瓶中, 加甲醇约 45 mL , 超声 10 m in, 放
至室温, 加甲醇至刻度, 摇匀。取上清液滤过, 续滤液
作为供试品溶液。
214 阴性供试品溶液的制备: 按处方制备缺防风样
品, 照供试品溶液的制备处理, 制备阴性供试品
溶液。
215 系统适应性试验: 在选定的条件下, 分别取供
试品溶液、对照品溶液、阴性供试品溶液各 20 ΛL ,
注入液相色谱仪, 记录色谱图。结果表明阴性供试品
溶液在升麻苷色谱峰位置处无相应峰出现, 表明其
他药味对含量测定无影响, 见图 1。理论板数按升麻
苷峰计算应不低于 3 000。
216 标准曲线的制备: 分别精密量取对照品储备液
(01104 8 m gömL ) 012、110、210、310、410 mL , 置
10 mL 量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀。分别进样
20 ΛL , 记录色谱图, 读取峰面积。以进样量为横坐
标, 峰面积为纵坐标回归, 计算得回归方程 Y =
109 27316 X - 54111, r= 11000 0。结果表明升麻苷
在 01041 92~ 01838 4 Λg 与峰面积呈良好的线性
关系。
217 精密度试验: 精密量取供试品溶液 20 ΛL , 重
复进样 6 次, 记录升麻苷峰面积值, 结果 R SD 为
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