全 文 ：导致 CM EC 损伤的保护作用, 从中发现不同配比的
药效变化并寻找两者的最佳比例和各自作用的靶
点。Sal B 由三分子丹参素和一分子咖啡酸组成, 由
于含有酚羟基, 有很强的抗氧化作用[9 ]。T anÊ A 为
樱红色针状结晶, 体外研究表明, T an Ê A 有较强的
抗炎、抗氧化能力, 可降低 TN F2Α诱导的升高的人
脐静脉内皮细胞 ICAM 21 表达; 抑制低密度脂蛋白
的氧化[10, 11 ]。在 TN F2Α 损伤条件下, Sa l B 与
T anÊ A 各配比组均可提高 CM EC 活力, 降低 LDH
释放, 但单用的作用不如二者配伍后明显。T anÊ A
增加NO 合成、减少 ET 释放的作用最显著。各配比
组均有增强 SOD 活性, 减少M DA 产生的趋势, 但
以 T anÊ A 抗氧化的能力最强。提示不同中药组份的
不同配比产生不同效应。
本实验重点研究组份的配比, 从中分析方剂多组
份配比与方剂配伍的相关性, 揭示主要药效组份对主
要靶点的影响规律及整体综合调节的生物学机制。这
为在明确主靶点, 强化主效应, 降低负效应的基础上,
建立以组份配伍研制现代复方中药的新模式, 寻求高
效可控的现代复方中药提供实验依据。
致谢: 天津市南开医院同位素室王民宪主任协
助检测 ET。
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甘遂醇提物中 4 种二萜类化合物的体内抗病毒活性研究
郑维发Ξ
(江苏省药用植物生物技术重点实验室, 江苏 徐州　221116)
摘　要: 目的　阐明甘遂醇提物中 4 种化合物: 甘遂大戟萜酯 A (É ) , 132十一酰基232(2, 42二甲基丁酰基) 巨大戟
萜酯 (Ê ) , 32(癸22, 42二烯酰基) 巨大戟萜酯 (Ë ) 及甘遂萜酯A (Ì ) 的体内抗病毒活性。方法　采用鼻吸入法以
流感病毒亚甲型小鼠肺炎适应株 FM 1对小鼠造模, 对病毒感染小鼠分别 ig 4 种二萜类化合物, 以对小鼠病毒感染
肺指数的抑制率为体内抗病毒活性指标。以3H 2T dR 渗入法测定 4 种二萜类化合物对小鼠淋巴细胞增殖反应的影
响。结果　4 种化合物都表现出一定的体内抗病毒活性, É～ Ì 分别在 20, 40, 50, 30 m gö(kg·d) 以下, 抗病毒活
性随剂量增加而增强; 3 种具有四环结构的 Ingeno l 衍生物其体内抗病毒活性呈现出明显的构效关系, 在适当剂量
下, C213, C220 有长链酰基的É 和Ê 表现出较强的体内抗病毒活性, 而这两个位点没有长链酰基的Ë 仅表现出弱
的抗病毒活性。在低浓度 (01025～ 7185×10- 4 ΛgömL ) 下, 4 种二萜类化合物对 Con A 诱导的淋巴细胞增殖有显
著的增强作用。结论　甘遂二萜类化合物中, C213, C220 有长链酰基的 Ingeno l 衍生物有显著的体内抗病毒活性,
其抗病毒的机制可能主要是通过提高机体的细胞免疫来实现的。
关键词: 甘遂; 二萜类化合物; 抗病毒活性; 淋巴细胞增殖
中图分类号: R 28515　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 01 0065 04
·56·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2003204227
基金项目: 江苏省政府青年科学基金资助项目 (BQ 98040) ; 江苏省教育厅自然科学基金重点项目 (98KJBZ300001)。
作者简介: 郑维发 (1962—) , 男, 博士后, 硕士生导师, 教授, 主要从事天然产物成分化学和药理学研究。
T el: (0516) 3403179　E2m ail: yyzw @xznu. edu. cn
Study on in vivo an tiv ira l activ ity of four d iterpeno ids
from ethanol extracts of E up horbia kansu i
ZH EN G W ei2fa
(L abo rato ry fo r B io techno logy on M edicinal P lan ts of J iangsu P rovince, Xuzhou 221116, Ch ina)
Key words: E up horbia kansu i L iou; d iterpeno ids; an t ivira l act ivity; lymphocyte p ro lifera t ion
　　甘遂 E up horbia kansu i L iou 为大戟科植物, 广
泛分布于我国西北及华北地区, 根部入药, 毒性大,
药性峻猛。传统医学用来治疗腹水和癌症[1 ]。研究表
明, 甘遂醇提物中含有镇痛作用的甘遂萜酯 A、
B [2, 3 ] , 抗白血病作用的甘遂大戟萜酯 A、B [1 ] , 细胞
毒作用的甘遂大戟萜酯 C, D [4 ]及其衍生物和三萜
类化合物。近年研究还表明, 甘遂醇提物对肝炎病
毒、流感病毒等有显著抑制作用[5 ]。Zheng 等[6 ]从甘
遂提取物中筛选出 8 种对鸡新城疫病毒 F48 有体
外抑制作用化合物, 其中甘遂大戟萜酯A (É )、132
十一酰基232( 2, 42二甲基丁酰基) 巨大戟萜酯
(Ê )、32(癸22, 42二烯酰基) 巨大戟萜酯 (Ë ) 以及
甘遂萜酯A (Ì ) 对所试病毒有显著抑制活性。为
证实甘遂二萜类化合物体内抗病毒活性, 本实验以
流感病毒亚甲型小鼠肺炎适应株感染小鼠, 以对小
鼠病毒感染肺指数抑制率为指标, 开展了这 4 种化
合物体内抗病毒活性研究, 并以 3H 2T dR 渗入法测
定其对小鼠淋巴细胞增殖的影响。
1　材料
　　甘遂 E. kansu i L iou 购于南京市药材公司, 由
叶定江教授鉴定。流感病毒亚甲型小鼠肺炎适应株
(FM 1) 由南京中医药大学微生物教研室提供。昆明
种小鼠由徐州医学院实验动物中心提供。 3H 2T dR
由上海核工业研究所提供。阳性对照采用抗病毒化
合物 Stauvdine (斯他呋啶) 购自 Sigm a 公司。
2　方法
211　化合物的制备: 甘遂根 5 kg 粉碎后室温乙醇
浸泡 72 h, 减压蒸馏回收乙醇, 最后得浸膏 293 g。
用硅胶柱色谱 (石油醚2丙酮) 分离, 得 9 个不同极
性段组份。TL C 检测表明, 甘遂二萜类化合物主要
集中在组份 6 (石油醚2丙酮 10∶1, 1 500～ 2 600
mL )。该组份以 Sephadex L H 220 柱色谱, 甲醇洗脱
(流速为 6 滴öm in) , 得组份 62É (35～ 41 mL )、62Ê (42～ 48 mL ) 和组份 62Ë (50～ 108 mL )。组份
62É 经 60 型硅胶 GF 254 (青岛海洋化工厂) 制备薄
层 (石油醚2丙酮 5∶1) , 得甘遂大戟萜酯 A [1 ] (É ,
R f= 0. 41, 493. 45 m g, [Α]26D : - 27. 8°in CHC l3) 和
132十一酰基232(2, 42二甲基丁酰基) 巨大戟萜酯[7 ]
( Ê , R f = 0. 341, 997. 79 m g, [Α]26D : - 27. 9°
in CHC l3) ; 组份 62Ê 经制备薄层 (石油醚2丙酮
5∶1) 得 32(癸22, 42二烯酰基) 巨大戟萜酯[8 ] (Ë ,
R f= 0. 31, 971. 18 m g, [ Α]26D : - 3419°in CHC l3) ;
组份 62Ë 经制备薄层 (氯仿2甲醇 200∶1) 得甘遂
萜酯 A [2 ] (Ì , R f= 0. 38, 1 209, 3 m g, [ Α]26D : + 28°
in M eOH )。根据B rucker 400 FT—NM R 核磁共振
仪和 ZAB—H S 质谱仪测定图谱与文献比较确定上
述化合物结构。
212　体内抗病毒活性测定: 定量称取上述 4 种化
合物, 以聚山梨酯 80 和少许色拉油研磨, 加适量生
理盐水充分震荡后定容。各化合物体内抗病毒活性
以对病毒感染小鼠肺指数抑制率为指标。选 14～ 16
g 小鼠, 雌雄兼用, 按体重随机分 7 组: 正常对照组,
病毒感染模型组, stauvdine 组及 4 个化合物给药
组, 每组 20 只。除正常对照组, 其余各组用鼻吸入
法染毒, 每鼠 50 ΛL 种毒液 (效价为 640∶1)。各组
于染毒的前 1 d 小鼠 ig 给药, 各化合物均按 10～ 70
m gö(kg·d) 7 个梯度连续给药至感染后的第 3
天。正常对照组及病毒感染模型组 ig 等量生理盐
水, Stauvdine 组 ig Stauvdine 10 m gö(kg·d)。第 4
天禁食、禁水 8 h 以上, 按文献方法[9 ]剖杀小鼠, 计
算肺指数和肺指数抑制率。
肺指数= 小鼠肺质量ö小鼠体重×100%
肺指数抑制率= (病毒感染模型组平均肺指数- 病毒感
染给药组平均肺指数) ö病毒感染模型组平均肺指数×100%
213　对淋巴细胞增殖的作用: 4 种化合物分别用
DM SO 配置成 20 m gömL 溶液, 再以 10% 胎牛血
清 R PM I21640 培养基稀释成 1 m gömL 溶液, 置 4
℃ 冰箱保存备用。小鼠淋巴细胞按文献方法[9 ]制
备, 用 10% 胎牛血清 R PM I21640 培养基将淋巴细
胞稀释至 1×107ömL , 加入 96 孔板中, 每孔 200ΛL。药物的起始浓度为 011 ΛgömL , 二倍体积稀释
成 11 个梯度, 每个浓度梯度重复 5 次。每孔加入 10ΛgömL 刀豆蛋白A (Con A , Sigm a) 20 ΛL。对照孔
加入等量 ConA , 在 37 ℃, 5% CO 2细胞培养箱中培
养 66 h 后, 加入 3H 2T dR 20 ΛL , 使每孔放射量为
5155×105 BqömL , 继续培养 6 h。按文献方法[9 ]用
·66· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
液体闪烁计数仪 (西安国营二六二厂) 测定每孔的
脉冲次数 cpm (放射强度) , 观察 4 种化合物对小鼠
淋巴细胞放射量的影响。
3　结果
311　体内抗病毒活性: 4 种化合物都表现出一定的
体内抗病毒活性, É～ Ì 分别在 20, 40, 50, 30 m gö
(kg·d) 以下, 抗病毒活性随剂量增加而增强; 分别
在 30, 50, 60, 40 m gö(kg·d) 以上时, 抗病毒活性 随剂量增加而降低; 到 70 m gö(kg·d) 时, É 和Ì对小鼠病毒感染肺指数抑制率出现负值, 表明这两种化合物在此剂量下对小鼠病毒性肺炎不仅没有治疗作用, 而且加剧了染毒小鼠肺的肝样性病变。在适当剂量下, É 和Ê 表现出较强的体内抗病毒活性, 对小鼠病毒感染肺指数的抑制率与 Stauvdine 相当,化合物Ë 次之, Ì 仅表现出弱的抗病毒活性, 见表 1。
表 1　É～ Ì 对流感病毒 FM 1感染小鼠肺指数的抑制作用 (x±s, n= 20)
Table 1　Inh ibitory effect of É —Ì on lung index of m ice infected by f lu-v irus FM 1 (x±s, n= 20)
组　别 剂量ö(m g·kg- 1) 肺指数 肺指数抑制率ö%
正常对照 - 　0199±0151 　　　　-
病毒感染模型 - 1156±0157 　　　　-É 10 1131±0121 　　　16102
20 1117±01393 25114
30 1130±0119 16160
40 1136±0144 12182
50 1141±0145 9161
60 1154±0167 1128
70 1169±0163 - 8133Ê 10 1145±0153 7105
20 1139±0129 10189
30 1133±0134 14174
40 1123±01303 21115
50 1138±0127 11153
60 1149±0159 4148
70 1152±0138 2156 组　别 剂量ö(m g·kg- 1) 肺指数 肺指数抑制率ö%Ë 10 1149±0161 　　　414820 1148±0133 511230 1143±0119 813340 1139±0138 1018950 1128±01173 1719460 1137±0134 1616670 1142±0116 6141Ì 10 1151±0146 312120 1145±0116 710530 1137±0151 1211740 1148±0137 511250 1148±0154 511260 1153±0139 119670 1158±0144 - 1128Stauvdine 10 1117±01273 25100
　　　　与模型组比较: 3 P < 0105
　　　　3 P < 0105 vs model group
312　对淋巴细胞增殖的作用: 4 种化合物对小鼠淋
巴细胞增殖的影响程度随其结构和浓度的不同而表
现出一定的差异。在浓度高于 0105 ΛgömL 时, É ,Ê , Ì 对淋巴细胞表现出细胞毒性, 即对淋巴细胞
增殖表现出抑制作用 (cpm 小于正常对照组) ; 在
01025 ΛgömL 时, 4 种化合物使增殖的小鼠淋巴细
胞增殖强度大幅度增加, É～ Ì 分别在 3113× 10- 3, 3113×10- 3, 6125×10- 3, 3113×10- 3 ΛgömL时达峰值。随浓度的进一步稀释, 在低于 3197×10- 4 ΛgömL 时, 4 种化合物对淋巴细胞增殖没有显著影响, 见表 2。4　讨论　　4 种化合物在适当剂量下都具有一定的体内抗病毒活性。剂量为 20 m gö(kg·d) 以下, É , Ê , Ë
表 2　É～ Ì 对小鼠淋巴细胞增殖的影响 (x±s, n= 5) cpm
Table 2　Effect of É —Ì on lymphocyte prol iferation of m ice (x±s, n= 5) cpm
浓度ö(Λg·mL - 1) É Ê Ë Ì 对　照
011 588112± 39 798114± 229 1 289174± 99 793112±243 3368111±375
0105 890174±101 2 017198± 316 3 348135± 567 1 897165±291
01025 6 219178±3373 3 4 768199± 786 4 878122± 792 3 087167±433
010125 7 134189±5943 3 6 134155± 9813 3 5 787166± 993 4 432180±349
6125×10- 3 7 215178±3993 3 6 577148±1 0023 3 6 914130±1 2003 3 4 057183±776
3113×10- 3 7 387133±3373 3 6 997117± 3473 3 6 079191±1 0013 3 5 348190±544
1156×10- 3 7 259183±5893 3 6 123147± 8363 3 5 879134± 761 4 084119±671
7185×10- 4 5 009166±195 5 978113± 4793 3 4 913130± 799 3 879179±897
3197×10- 4 4 329188±755 3 845197± 435 3 519177± 279 3 644177±411
1189×10- 4 3 547181±377 3 378176± 388 3 449176± 395 3 412113±347
9142×10- 5 3 378167±354 3 565119± 431 3 388198± 377 3 498150±388
　　　与对照组比较: 3 3 P < 0101
　　　3 3 P < 0101 vs con tro l group
·76·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
( ingeno l 衍生物) 呈现出明显构效关系, 即 C213,
C220 位有长链酰基的É 对小鼠病毒感染肺指数抑
制率最大, C213 位有长链酰基的Ê 次之, 而这两个
位点无长链酰基的Ë 对小鼠病毒感染肺指数仅有很
小的抑制作用。随剂量增加, É 对小鼠病毒感染肺指
数抑制率逐渐减小, 70 m gö(kg·d) 时, 不表现出体
内抗病毒活性。这说明 C213、C220 位长链酰基的存
在提高体内抗病毒活性的同时, 也增加了毒性。
　　流感病毒进入肺部, 首先感染肺部支气管黏膜
和肺泡壁上皮细胞, 触发机体细胞免疫, 引发 T 淋
巴细胞和N K 细胞增殖反应。其中细胞毒淋巴细胞
(CTL ) 在外来抗原和被抗原激活的 CD + 4 T 细胞
分泌的细胞因子作用下开始增殖与分化, 并对感染
病毒的细胞进行杀伤, N K 细胞分泌的细胞因子如
IFN 2Χ能有效地增强巨噬细胞增殖和提高其对病毒
感染细胞吞噬能力[10 ]。实验结果表明 4 种化合物在
适当浓度下, 对 Con A 诱导的 T 淋巴细胞增殖有
十分显著的增强作用, 增强的幅度是对照组的 1～ 2
倍。推测 4 种化合物对小鼠病毒性肺炎的防治作用
可能主要是通过提升机体细胞免疫来实现的。
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(11 中国药科大学 药理教研室, 江苏 南京　210009; 21 东南大学医学院 病理生理教研室, 江苏 南京　210009;
31 南京师范大学生命科学院, 江苏 南京　210097; 41 东南大学附属中大医院 心血管内科, 江苏 南京　210009)
摘　要: 目的　观察西红花酸对 H 2O 2诱发培养心肌细胞 [Ca2+ ] i 改变的效应, 并探讨其机制。方法　应用 F luo23ö
AM 荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜 (L SCM ) 检测不同因素处理的单个培养心肌细胞 [Ca2+ ] i。结果
H 2O 2呈浓度依赖性地使单个培养心肌细胞 [Ca2+ ] i 增加, 并不受细胞外环境是否存在 Ca2+ 的影响, L 2型 Ca2+ 通道
阻滞剂维拉帕米也不能完全中止 [Ca2+ ] i 的增加; 不同剂量的西红花酸则能减低 H 2O 2引发的单个培养心肌细胞
[Ca2+ ] i 增高的幅度。结论　西红花酸能明显抑制 H 2O 2诱发培养心肌细胞 [Ca2+ ] i 增加的作用, 可能与调整胞内钙
库 Ca2+ 的释放和摄取、Ca2+ 内流等机制有关。
关键词: 西红花酸; 过氧化氢; 心肌细胞; 钙离子
中图分类号: R 28612　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 01 0068 04
Effects of crocetin on [Ca2+ ] i change in m yocard ium cell induced by H2O 2
YU W ei2p ing1, 2, Q IAN Zh i2yu1, XU Guang2lin3, SH EN Cheng2x ing4
(11D epartm ent of Pharm aco logy, Ch ina Pharm aceu tical U niversity, N an jing 210009, Ch ina; 2. D epartm ent of
Pathophysio logy, M edical Schoo l of Sou theast U niversity, N an jing 210009, Ch ina; 3. Schoo l of L ife
Science, N an jing N o rm al U niversity, N an jing 210097, Ch ina; 4. D epartm ent of Cardiovascu lar D isease
Zhongda Ho sp ita l of Sou theast U niversity, N an jing 210009, Ch ina)
·86· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2003206219
基金项目: 江苏省基础研究计划 (自然科学基金) 项目 (BJ198124)
作者简介: 余卫平 (1960—) , 男, 蒙古族, 江苏省镇江人, 东南大学医学院副教授, 药理学博士, 1997 年赴美国哥伦比亚大学研究, 研究方
向为生化药理学。3 通讯作者　T el: (025) 3271322　E2m ail: wpy@ jlon line. com