全 文 ：发表)。值得注意的是, 单味药和组合药提取物有刺
激 DNA 掺入的作用, 但 SN T 提取物却没有此作
用。提示组方后药物成分的化学性质可能发生了变
化, 这种变化尚需深入探讨。
本实验 B rdU 2EL ISA 法测定结果提示, SN T
并不提高V SM C 的DNA 掺入水平, 而单味药和组
合药提取物及 NA , Phe 均可以提高 V SM C 的
DNA 掺入水平。结果提示, SN T 组方后可能是通过
促进 V SM C 代谢活性, 起到刺激平滑肌收缩的作
用。而组方前的单味药和组合药刺激 V SM C 的
DNA 合成也许是一种副作用。同时, 对V SM C 增殖
抑制的 ED 50也反映了组方后 SN T 的毒性下降。本
实验进一步表明, SN T 组方用药与单味药及组合药
的药理作用不尽相同, 这可能是组方用药“减毒增
效”的作用机制之一。
References:
[ 1 ]　L i P, H uang Q F, L i A F, et a l. Effects of X inm ailing
(XM L ) on pu lmonary m icrovascu lar perm eab ility and lipo2
perox ides in endo toxem ia rats [J ]1 Ch in J P a thop hy siol (中
国病理生理杂志) , 1995, 11 (3) : 22622291
[ 2 ]　Sun H L , W u W K. Studies on p ro tective effect of S IN I
TAN G comp rising active componen ts com bined at differen t
do sage on m yocardial ischem ia reperfusion in ju ry in m ice [J ]1
Ch in T rad it H erb D rug s (中草药) , 2002, 33 (4) : 33323361
[ 3 ]　W u W K, Su J W , L in S G, et a l. C lin ical study on effect of
S IN I D ecoction on ischem iaöreperfusion in ju ry by Ho lter
monito ring in patien ts w ith acu te m yocardial infarction treat2
ed w ith th rom bo lytic therapy [J ]1 Ch in J In teg ra ted T rad it
Ch in W est M ed (中国中西医结合杂志) , 2001, 21 (10) : 7442
7461
[ 4 ]　T an H M , W u W K, L uo H C, et a l. Effect of Sin i D ecoc2
t ion on GST exp ression in the ischem ic m yocardium [J ]1
Ch in J P a thop hy siol (中国病理生理杂志) , 2002, 18 (4) :
41324141
[ 5 ]　Hong H S, Chen F R , Zhu Y B, et a l. A ssay of p ro liferation
and m etabo lic of vascu lar smoo th m uscle cells [J ]1 Ch in J
Cell B iol (细胞生物学杂志) , 2001, 23 (1) : 362391
[ 6 ]　Parm en tier J H , Sm elcer P, Pavicevic Z, et a l. PKC2zeta
m ediates no rep ineph rine2induced pho spho lipase D activation
and cell p ro liferation in V SM C [J ]1 H yp ertension, 2003, 41
(3 P t 2) : 79428001
[ 7 ]　Sato M , Kaw atan i M 1 Effects of no radrenaline on cyto so lic
concen trations of Ca2+ in cu ltu red co rpus caverno sum smoo th
m uscle cells of the rabb it [J ]1 N eu rosci L ett, 2002, 324 (2) :
892921
[ 8 ]　L iu P, Ge Y C, L i C Y, et a l. Effect of ex tracts from D ecoc2
t ion fo r Resuscitation and its componen t drugs on p ro stacy2
clin release from at vascu lar endo thelial cells under acu te hy2
pox ia [J ]1 Ch in T rad it H erb D rug s (中草药) , 2001, 32
(Supp l) : 12621281
不同产地冬虫夏草清除羟自由基作用的研究
蔡仲军, 陈仕江, 尹定华, 张　艳Ξ
(重庆市中药研究院, 重庆　400065)
摘　要: 目的　比较不同产地冬虫夏草对羟自由基的清除作用。方法　采用邻二氮菲2Fe2+ 氧化法检测不同产地冬
虫夏草水提液对 H 2O 2öFe2+ 体系产生的羟自由基的清除作用。结果　来自西藏那曲地区、云南滇西北地区和四川
川西北地区的冬虫夏草均对 Fenton 反应产生的羟自由基有显著或极显著的清除作用, 且来自不同微生态环境的
样品之间的清除作用差异比来自不同主产区样品之间的清除作用差异更明显。结论　冬虫夏草水提液有明显地清
除羟自由基的作用, 且微生态环境对该作用有较大的影响。
关键词: 冬虫夏草; 羟自由基; 微生态环境; 相互变异率
中图分类号: R 28515　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 01 0057 03
Scaveng ing effect of Cordycep s grow ing in d ifferen t env ironm en t on hydroxyl rad ica l
CA I Zhong2jun, CH EN Sh i2jiang, Y IN D ing2hua, ZHAN G Yan
(Chongqing Inst itu te of Ch inese M ateria M edica, Chongqing 400065, Ch ina)
Abstract: Object　To invest iga te and compare the scavenging effect of Cordy cep s grow ing in differen t
environm en t on hydroxyl rad ica l. M ethods　102Phennan th ro line2Fe2+ ox idat ive assay w as u sed to ob serve
the effect of scavenging hydroxyl rad ica l from H 2O 2öFe2+ system by the aquenou s ex tracts of Cordy cep s.
Results　Cordy cep s from N aqu of X izang, no rthw est Yunnan, and no rthw est Sichuan all show ed u s the
sign if ican t effect on scavenging of hydroxyl rad ica l p roduced from Fen ton R eact ion. T he b iggest values of
M DR among Cordy cep s specim en s from variou s m icroeco logica l environm en t su rpassed that among speci2
m en s of N aqu of X izang, no rthw est Yunnan, and no rthw est of Sichuan. Conclusion　T he aquenou s ex2
t racts of Cordy cep s cou ld scavenge the hydroxyl rad ica l from Fen ton R eact ion. T he m icroeco logica l envi2
·75·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2003205227
基金项目: 国家自然科学基金项目 (30240067)
作者简介: 蔡仲军 (1957—) , 男, 重庆市人, 硕士, 助理研究员, 从事中药研究及开发工作。
ronm en t fo r Cordy cep s grow ing has an sign if ican t effect on its scavenging act ion.
Key words: Cordy cep s; hydroxyl rad ica l; m icroeco logica l effect; m u tual d ifferen t ra te (M DR )
　　冬虫夏草系由冬虫夏草菌 Cordy cep s sinensis
(Berk. ) Sacc. 寄生于蝙蝠蛾幼虫形成的虫菌复合
体[1 ] , 性味甘平, 归肺、肾经, 具有补肺益肾、止血化
痰的功能。由于产地不同, 冬虫夏草细分为藏草 (产
于西藏腹地)、川草 (产于川西北高原) 和滇草 (产
于滇西北高原) , 即使在川草内, 又可再细分为泸草
(产于四川巴塘康定一带) 和灌草 (产于四川小金
松番一带)。来自不同产地的冬虫夏草, 其外部形态
和内在品质均有明显差异[2 ]。冬虫夏草含有丰富的
D 2甘露醇, 研究表明甘露醇能有效地清除机体内强
毒性羟自由基, 据此, 本实验研究了冬虫夏草对羟自
由基的清除作用及产地对该作用的影响。
1　材料
111　药品: 藏草样品 6 个, 来自西藏那曲地区; 滇
草样品 6 个, 来自云南迪庆和丽江地区; 川草由泸
草和灌草构成, 其中泸草样品 6 个, 来自四川康定
地区; 灌草样品 6 个, 来自四川小金和马尔康地区。
藏草、滇草、泸草和灌草内, 各取样点相距 30～ 200
km , 相互间地理位置呈不规则分布。药材经尹定华
研究员鉴定为冬虫夏草 C. sinensis (Berk. ) Sacc.
112　仪器和试剂: FZ102 微型植物试样粉碎机,
CS101 型电热鼓风干燥箱, 自制超级恒温水浴箱,
80—2 型离心沉淀器, 721 型分光光度计。pH 7140
磷酸缓冲液 (PBS) 用 KH 2PO 4和N aOH 配制, 其余
试剂均为国产分析纯。
2　方法
211　样品制备: 将虫草样品 65 ℃ 烘干, 粉碎, 过
20 目筛。精密称取 210 g 虫草粉, 置 50 mL 三角瓶
中, 加 25 mL 蒸馏水, 置 80 ℃ 水浴中, 浸提 30
m in, 离心沉淀, 浸出液转入 50 mL 量瓶中, 残渣用
水洗涤 2 次, 离心沉淀后均转入量瓶中, 定容, 得到
浓度为 40 m gömL (按原生药计) 样品液, 置 4 ℃
冰箱存放备用。
212　羟自由基的生成及清除率的测定: 参考文献方
法[3 ] , 采用 H 2O 2öFe2+ 体系, 通过 Fen ton 反应生成
羟自由基, 促使邻二氮菲2Fe2+ 被氧化为邻二氮菲2
Fe3+ , 造成其水溶液在波长 536 nm 处最大吸收消
失, 来测算其清除率。考虑样品参比标准的不同, 略
作修改, 增设了样品参比和空白参比两个对照, 以消
除不同样品本身带来的差异。具体步骤是: 精密量取
510 mL PBS (150 mmo löL , 下同) 和 510 mL 蒸馏
水于试管中, 混匀作空白参比管; 精密量取 510 mL
PBS、110 mL 邻二氮菲 (7150 mmo löL , 下同)、110
mL FeSO 4 (7150 mmo löL , 下同) 和 310 mL 蒸馏水
于试管中, 混匀作未损伤管; 精密量取 510 mL
PBS, 110 mL 邻二氮菲, 110 mL FeSO 4, 210 mL 蒸
馏水和 110 mL H 2O 2 (011% ) 于试管中, 混匀作损
伤管; 精密量取 510 mL PBS, 210 mL 冬虫夏草样
品液和 310 mL 蒸馏水于试管中, 混匀作样品参比
管; 精密量取 510 mL PBS、110 mL 邻二氮菲, 110
mL FeSO 4, 210 mL 冬虫夏草样品液和 110 mL
H 2O 2于试管中, 混匀作样品管。将上述试管同时置
于恒温水槽中, 37 ℃ 保温 60 m in, 于波长 536 nm
处测吸光度 (A ) 值, 每处理重复 5 次, 用其平均值
按下式计算羟自由基清除率。
羟自由基清除率= [ (A 样品 - A 样参) - (A 损伤 - A 空参) ]ö
(A 未损- A 损伤)×100%
3　结果
　　本实验条件下, 观察藏草、滇草、泸草和灌草样
品对羟自由基的清除效应, 测得对羟自由基的平均
清 除 率 分 别 为 12114%、15176%、12136% 和
9189%。将泸草和灌草综合, 算出川草对羟自由基的
平均清除率为 11113% , 见表 1～ 4。
表 1　西藏那曲地区冬虫夏草对羟自由基
的清除作用 (x±s, n= 5)
Table 1　Scaveng ing effect of Cordycep s from Naqu
of X izang on hydroxyl rad ica l (x±s, n= 5)
组　别 产　地 羟自由基清除率ö%
损伤对照 - 　　　　-
样品 1 泥玛珑 　　　131043 3
样品 2 曲仲山 7118
样品 3 白嘎　 151423 3
样品 4 吾龙沟 201633 3
样品 5 嘉黎　 101623
样品 6 棉滩山 5197
　　与损伤对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs in ju ried con tro l group
4　讨论
411　本实验以损伤为对照, 用 t 检验检测来自不同
产地的 24 个冬虫夏草样品对羟自由基清除作用的显
著性, 共有 13 个样品达到极显著水平 (P < 0101) ,
4 个样品达显著水平 (P < 0105)。总体平均, 藏草、
滇草和川草及川草内的泸草、灌草均了显著或极显
著水平, 表明冬虫夏草确有清除羟自由基的作用。
·85· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
表 2　云南滇西北地区冬虫夏草对羟自由基
的清除作用 (x±s, n= 5)
Table 2　Scaveng ing effect of Cordycep s from northwest
of Y unnan on hydroxyl rad ica l (x±s, n= 5)
组　别 产　地 羟自由基清除率ö%
损伤对照 - 　　　　-
样品 1 　德钦羊拉乡　 　　　181273 3
样品 2 　玉龙虫草坪　 101103
样品 3 　中甸东旺乡　 191743 3
样品 4 　白马雪山　　 211403 3
样品 5 　中甸热旺雪山 171923 3
样品 6 　玉龙小索道　 7112
　　与损伤对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs in ju ried con tro l group
表 3　四川康定地区冬虫夏草对羟自由基
的清除作用 (x±s, n= 5)
Table 3　Scaveng ing effect of Cordycep s from Kangding
of Sichuan on hydroxyl rad ica l (x±s, n= 5)
组　别 产　地 羟自由基清除率ö%
损伤对照 - 　　　　-
样品 1 白海子 　　　111433
样品 2 九海子 7174
样品 3 雅家埂 131503 3
样品 4 汪家沟 131753 3
样品 5 色海子 161083 3
样品 6 折多塘 111683
　　与损伤对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs in ju ried con tro l group
表 4　四川阿坝地区冬虫夏草对羟自由基
的清除作用 (x±s, n= 5)
Table 4　Scaveng ing effect of Cordycep s from Aba
of Sichuan on hydroxyl rad ica l (x±s, n= 5)
组　别 产　地 羟自由基清除率ö%
损伤对照 - 　　　　-
样品 1 马尔康木尔宗乡 　　　121393 3
样品 2 日隆石梯沟　　 4175
样品 3 梦笔山大水沟　 151773 3
样品 4 小金崇德乡　　 8124
样品 5 巴郎山干海子　 3159
样品 6 小金沙龙乡　　 141613 3
　　与损伤对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs in ju ried con tro l group
412 　运用相互变异率 M DR [m u tual d ifferen t
ra te, M DR = û x 1 - x 2 ûö015 (x 1+ x 2) , 其中 x 1 和 x 2
为相互比较两个样本的平均值 ]分析, 显示藏草样本
之间的 M DR 为 0116～ 1110, 滇草样本之间的
M DR 为 01019～ 1100, 泸草样本之间的 M DR 为
01018～ 0170, 灌草样本之间的 M DR 为 01076～
1107, 而藏草与滇草之间的M DR 是 0126, 藏草与
川草之间的 M DR 是 01087, 滇草与川草之间的
M DR 是 0134, 泸草和灌草之间的M DR 是 0122,
说明藏草、滇草和川草之间以及川草内部泸草和灌
草之间, 对羟自由基的清除作用差异并不很大, 而在
这些大宗药材内部, 来自不同微生态环境的样品之
间, 有的差异却十分明显, 表明冬虫夏草对羟自由基
清除作用, 受微生态环境的影响超过受大的地域气
候的影响。
413　结合我们前期对冬虫夏草样品D 2甘露醇含量
测定结果[4 ]分析来看, 冬虫夏草对羟自由基的清除
率与其 D 2甘露醇含量呈正相关, 相关系数为
019023, 说明冬虫夏草对羟自由基的清除能力, 主要
来自其药效成分D 2甘露醇的作用。
414　随着自由基研究不断深入, 已明确羟自由基是
最活泼的氧自由基之一, 可介导机体组织脂质过氧
化, 蛋白质解聚、聚合、核酸断裂和多糖裂解等生化
过程, 引发组织细胞病变而导致各种疾病发生和加
速机体衰老。适量补充外源性清除羟自由基药物, 可
预防这类损伤和病变的发生与发展。研究结果表明:
来自不同产地的冬虫夏草, 对采用 H 2O 2öFe2+ 体系
通过 Fen ton 反应产生的羟自由基, 有明显清除作
用, 而 Fen ton 反应是生物体内产生羟自由基的重
要机制, 预示冬虫夏草对羟自由基的清除作用, 可能
是它作为中国传统滋补保健药物的原因之一。
References:
[ 1 ]　Zhu H F1 H ep ialus armo ricanus is the ho st insect of Cordy 2
cep s [J ]1 A cta E n tom ol S in (昆虫学报) , 1965, 14 (6) : 6201
[ 2 ]　Cai Z J , Yin D H , L iL , et a l. Investigation on quality differ2
ence betw een Cordy cep s of Sichuan and tho se of X izang [J ]1
Ch ina J Ch in M ater M ed (中国中药杂志) , 2001, 26 (7) :
4501
[ 3 ]　J in M , Cai Y X, L i J R , et a l. 102Phennan th ro line2Fe2+ ox i2
dative assay of hydroxyl radical p roduced by H 2O 2öFe2+ [J ]1
P rog B iochem B iop hy s (生物化学与生物物理进展) , 1996,
23 (6) : 5531
[ 4 ]　Zai Z J , Yin D H , H uang T F, et a l. Comparison of the m an2
n ito l con ten t in Cordy cep s from differen t grow ing areas [J ]1
Ch in P harm (中国药房) , 2003, 14 (8) : 5531
敬　告　读　者
　　《中草药》杂志编辑部尚存部分过刊合订本, 包括: 197421975 年, 1976 年, 1979 年, 1985～ 1994 年 (80 元ö年) ;
1995～ 1997 年 (110 元ö年) , 1998 年 (120 元) , 1999 年 (135 元) , 2000 年 (180 元) , 2001 年 (200 元) ; 2002 年 (200
元) ; 1996 年增刊 (50 元) , 1997 年增刊 (45 元) , 1998 年增刊 (55 元) , 1999 年增刊 (70 元) , 2000 年增刊 (70 元) , 2001
年增刊 (70 元) , 2002 年增刊 (65 元) , 2003 年增刑 (65 元)。欢迎订购, 电话: 022227474913; 022223006821 (传真)。
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