全 文 ：kg· d,全身各主要组织未见病理改变 ,血液指标也
无明显变化 [11 ]。本实验应用行为畸胎学方法对豆腐
果苷进行神经行为毒性效应评价 ,结果表明: Wis-
tar大鼠在妊娠第 6～ 15天给予人日用剂量及其 10
倍、 50倍的豆腐果苷 ig后 ,未出现母体毒性 ;仔代
大鼠出生后体重增长、早期生理发育和神经行为发
育指标 3个剂量组与对照组相比均无显著性差异 ,
仔鼠操作行为测试也未出现学习记忆的障碍:无论
是 DRH与 DRL的成绩 ,还是明暗分辨成绩 ,各剂
量组和对照组之间的成绩均无显著性差异 ;各剂量
组仔鼠的脑重、脑组织切片、脑组织单胺类神经递质
的含量与对照组相比差异无显著性。
本研究表明 ,大鼠妊娠期给予大剂量豆腐果苷
未观察到对仔代的神经行为致畸效应和脑组织学效
应 ,与其它镇静安眠类药物相比 ,豆腐果苷具有天然
低毒 ,应用比较安全的优点。
致谢: 本研究得到舒晔教授、刘汉钧教授、黄翠
仙老师、刘兴良和甘献文先生的帮助。
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喘宁软胶囊对嗜酸性粒细胞和肥大细胞的抑制作用
金赛红1 ,谢强敏1 ,沈文会1 ,陈季强 1 ,赵余庆 2 ,徐有信 2
( 1. 浙江大学医学院 呼吸药物研究重点实验室 ,浙江 杭州　 310031;　 2. 沈阳东宇天然药物研究院 ,辽宁 沈阳　
110015)
摘　要: 目的　初步探讨喘宁软胶囊的平喘作用机制。 方法　采用整体试验观察致敏小鼠抗原攻击后肺灌洗液和
周围血中的嗜酸性粒细胞聚集反应 ,采用离体试验观察致敏大鼠抗原攻击后腹腔肥大细胞脱颗粒反应。 结果　喘
宁软胶囊 2, 4, 8 g /kg和对照药地塞米松 2 mg /kg ig给药显著减少肺灌洗液和周围血中嗜酸性粒细胞的浸润。喘
宁软胶囊 33. 3, 66. 7 mg /L和对照药酮替芬 0. 333 mg /L明显抑制致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒反应。 结论　初
步证明喘宁软胶囊的平喘作用可能与其抑制嗜酸性粒细胞浸润和稳定肥大细胞膜有关。
关键词: 喘宁软胶囊 ;酮替芬 ;地塞米松 ;嗜酸性粒细胞 ;肥大细胞
中图分类号: R286. 43　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 03 0242 03
Inhibitory effect of CHUANNING SOFT CAPSULE
*
on eosinophils and mast cells
JIN Sai-hong1 , X IE Qiang-min1 , SHEN Wen-hui1 , CHEN Ji-qiang1 , ZHAO Yu-qing2 , X U You-xin2
( 1. Key Labora to ry o f Respira to ry Drug s Resea rch, Medical Co lleg e, Zhejiang Univ er sity , Hang zhou Zhejiang 310031, China;
2. Shenyang Dongyu Institute of Natur al Drug , Shenyang Lia oning 110015, China )
Abstract: Object　 To explo re the antiasthma mechanism of CHUANNING SOFT CAPSU LE
( CN SC) . Methods　 The eosinophils accumulation in bronchoalv eolar lav age fluid ( BALF) and peripheral
blood in the ovalbumin-sensi ti zed mice af ter challenged wi th antig en in v ivo was examined and the g ranula-
·242· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期
收稿日期: 2001-08-10基金项目:国家重点科技 (攻关 )项目 ( 96-901-05-213)作者简介:金赛红 ( 1965-) ,女 ,浙江籍 ,杭州师范学院医学院讲师。 1988年在浙江中医学院获学士学位 ,目前在浙江大学医学院攻读药理学硕士学位。 Tel and Fax: 0571-87217380　 E-mai l: xieqm@ zju. ed u. cn
tion o f the peri toneal mast cells in the ovalbumin-sensi tized rats af ter challenge o f antig en in v itro was ob-
serv ed. Results　 CN SC 2, 4, 8 g /kg ( ig ) and dexamethasone 2 mg /kg ( ig ) signi ficant ly reduced the
eosinophi ls infil t ra tion in BALF and peripheral blo od. CN SC 33. 3, 66. 7 mg /L and keto tifen 0. 333 mg /L
signi ficant ly inhibited g ranula tion o f mast cells. Conclusion　 Th e antiasthma mechanism o f CN SC proba-
bly co rrela tes wi th suppressing eo sinophils infi lt ration in lung and stabi li zing mast cell membranes.
Key words: CHU ANN ING SOFT CAPSULE ( CNSC) ; keto tifen; dexamethasone; eo sinophils; mast
cells
* CHUANN ING SO FT CAPSU LE is composed o f insatiable fat ty acid, such as oleic acid, suboleic
acid, and linenic acid. It has the function o f antiasthma.
　　喘宁软胶囊主要含油酸、亚油酸、亚麻酸等不饱
和脂肪酸类成分。 许多实验已证明亚麻酸等不饱和
脂肪酸对过敏反应及炎症有抑制作用 [1 ]。为初步探
讨喘宁软胶囊的平喘作用机制 ,我们观察了该药对
小鼠嗜酸性细胞聚集反应和大鼠肥大细胞脱颗粒反
应的影响。
1　材料与方法
1. 1　动物: 昆明种小鼠 ,普通级 ,雌雄各半 ,体重
20～ 28 g ,由浙江省药品检验所实验动物中心提供 ,
合格证号:医动字第 22-9601017。 SD大鼠 ,清洁级 ,
雄性 ,体重 180～ 200 g,浙江大学医学院实验动物
中心提供 ,合格证号:医动字第 22-9601018。
1. 2　药品与试剂:喘宁软胶囊由沈阳东宇天然药物
研究院提供 ,呈油状 ,应用时以 1% 吐温 -80配制成
适当浓度备用 ;卵白蛋白 Ovalbumin ( O A, V级 )
为 Sigma公司产品 ;富马酸酮替芬为上海第十六制
药厂产品。肝素钠注射液为徐州万邦生化制药有限
公司产品。地塞米松磷酸钠注射液为江苏高邮市制
药厂产品。
1. 3　仪器: 日本 Olympus BX 51显微镜 ;德国 Ep-
pendo rf 5804R冷冻离心机 ;德国 PARI ( Master )
雾化器 ; Sigma Sta t统计软件。
1. 4　分组与造模: 将 78只昆明种小鼠随机分 6
组 ,即对照组、模型组、喘宁软胶囊 2, 4, 8 g /kg组、
地塞米松 2 mg /kg 阳性对照组。 用 0. 2% OA
( 10% 氢氧化铝凝胶为佐剂 ) 每只小鼠 1 mg脚掌
sc致敏。从第 2天开始 ,各组分别每天 1次等容 ig ,
共 ig 22 d,从第 15天开始 ,对照组除外 ,每天用 1%
OA密闭钟罩下雾化 30 min,到第 22天。
1. 5　肺灌洗液 ( BALF)和周围血中嗜酸性粒细胞
测定 [ 2]: 末次 ig 1 h 后 ,尾静脉取周围血 ,涂片 ,
W right-Giemsa染色 ,高倍镜下白细胞分类计数。用
25% 乌拉坦 1 mL /kg麻醉小鼠 ,分离气管 ,气管插
管 ,用注射器吸取 1 mL含 5 U /mL肝素钠的 Han-
ks液注入气道 ,来回灌洗 2次 ,回收率为 80% 以
上。用计数板计数白细胞数目 ,其余 BALF在 1 500
r /min离心 10 min,弃去上清液 ,取沉淀部分涂片 ,
用嗜酸性粒细胞特殊染色法染色 [ 3] ,在显微镜油镜
下分类计数 200个细胞 ,嗜酸性粒细胞呈伊红色 ,
其余部分按单核淋巴细胞计数 (中性粒细胞极少 ,
忽略不计 )。
1. 6　腹腔肥大细胞脱颗粒测定 [ 4]: 用 2% OA
( 10% 氢氧化铝凝胶为佐剂 )每只大鼠 1 mg脚掌
sc致敏 , 3周后股动脉放血处死大鼠 , ip Hanks液
10 mL,轻揉腹部 1 min,剖腹收集腹腔内的液体 ,置
10 mL塑料试管内 ,室温 1 200 r /min离心 10 min,
去上清液 ,加适量 Hanks液悬浮细胞 ,分装于 1. 0
mL塑料试管内 ,每管 0. 2 mL,随即分 6组 ,对照组
和模型组分别加 0. 4和 0. 2 mL Hanks液 ,酮替芬
组和喘宁软胶囊组分别加 1. 0 mg /L酮替芬溶液和
0. 08, 0. 1, 0. 2 g /L喘宁软胶囊 0. 2 mL。37℃水浴
孵育 5 min,对照组除外 ,其余各组加 0. 01 g /L OA
0. 2 mL抗原攻击 , 37℃ 水浴孵育 10 min,取出置
于冰浴中。肥大细胞脱颗粒计数:将中性红染色液滴
于载玻片上 ,待玻片干燥 ,分别取各管细胞悬液 2～
3滴于片上 ,在显微镜高倍镜下观察肥大细胞脱颗
粒的情况 ,计数 200个细胞 ,计算出净脱颗粒%和
抑制%。 净脱颗粒% = 模型组脱颗粒% -对照组脱
颗粒% ;抑制% = [(模型组净脱颗粒% - 用药组净
脱颗粒% ) /模型组净脱颗粒% ]× 100%
1. 7　统计学处理: 所有计量资料均以 x± s表示 ,组
间差异的显著性用 t检验和 Mann-Whitney Rank
Sum检验。
2　结果
2. 1　喘宁软胶囊对致敏小鼠抗原攻击后 BALF中
炎症细胞的影响: 如表 1所示 ,模型组致敏小鼠抗原
攻击后 BALF中的白细胞总数较对照组升高 7. 5
倍;分类计数中 ,模型组的嗜酸性粒细胞比率高于对
照组 150倍 ,相反淋巴单核细胞比率明显低于对照
组。中性粒细胞的比率极低 ( < 5% ) ,故忽略不计。喘
·243·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期
宁软胶囊 2, 4, 8 g /kg 呈剂量依赖抑制 BALF中白
细胞总数的增加 ;虽然 3组均可明显减少嗜酸性粒细
胞比率 ,增加淋巴单核细胞比率 ,但无明显量效关系。
表 1　喘宁软胶囊对致敏小鼠抗原攻击后 BALF
中炎症细胞的影响 ( n= 13, x± s)
组　别 剂　量
( g /kg)
白细胞总数
( 1× 108 /L)
嗜酸性粒细胞
(% )
淋巴单核细胞
(% )
对照组 - 0. 95± 0. 27 0. 41± 0. 24 99. 59± 0. 24
模型组 - 7. 51± 2. 58# # # 61. 52± 18. 72# # # 38. 48± 18. 72# # #
地塞米松 0. 002 1. 02± 0. 48* * * 23. 51± 13. 53* * * 76. 49± 13. 53* * *
喘宁软胶囊 2 6. 90± 3. 72 42. 80± 23. 13* 57. 20± 23. 13*
4 4. 94± 2. 01* 44. 53± 15. 45* 55. 47± 15. 45*
8 4. 54± 2. 34* 40. 62± 22. 32* 59. 38± 22. 32*
　　与对照组比较: # # # P < 0. 001
　　与模型组比较: * P < 0. 05　* * * P < 0. 001
2. 2　喘宁软胶囊对致敏小鼠抗原攻击后周围血白
细胞分类的影响: 如表 2所示 ,模型组致敏小鼠抗
原攻击后周围血嗜酸性粒细胞比对照组升高 5. 38
倍 ,中性粒细胞和淋巴单核细胞无明显影响。喘宁软
胶囊 2, 4, 8 g /kg和地塞米松 2 mg /kg均能明显抑
制周围血嗜酸性粒细胞升高反应。
表 2　喘宁软胶囊对致敏小鼠抗原攻击后
周围血白细胞分类的影响 ( n= 13, x± s)
组　别 剂　量
( g /kg)
嗜酸性粒细胞
(% )
中性粒细胞
(% )
淋巴单核细胞
(% )
对照组 - 0. 50± 0. 21 15. 10± 9. 24 84. 40± 11. 52
模型组 - 2. 69± 2. 55# 23. 46± 19. 05 73. 78± 19. 53
地塞米松 0. 002 0. 29± 0. 63* * 26. 92± 18. 87 72. 79± 18. 96
喘宁软胶囊 2 0. 62± 0. 87* 35. 82± 12. 36 63. 74± 12. 30
4 0. 33± 0. 66* 29. 93± 13. 36 67. 75± 13. 33
8 0. 45± 0. 51* 30. 69± 13. 68 68. 69± 13. 56
　　与对照组比较: # P < 0. 05
　　与模型组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
2. 3　喘宁软胶囊对致敏大鼠抗原攻击后腹腔肥大
细胞脱颗粒的影响: 如表 3所示 ,致敏大鼠腹腔肥
大细胞无抗原攻击时脱颗粒数目仅占 13. 80% ,抗
原攻击后脱颗粒数目明显增加到 52. 71% 喘宁软
胶囊 33. 3, 66. 7 mg /L和酮替芬 0. 333 mg /L明显
抑制肥大细胞脱颗粒反应。
3　讨论
众所周知 ,肥大细胞、嗜酸性粒细胞是支气管哮
喘发病的主要效应细胞 ,在哮喘慢性气道炎症的病
理变化中起重要作用。 哮喘的主要表现为肥大细胞
表 3　喘宁软胶囊对致敏大鼠抗原攻击后
腹腔肥大细胞颗粒的影响 (n= 6, x± s)
组　别 剂　量
( mg /L)
脱颗粒肥大细胞
(% )
净脱颗粒
(% )
抑制
(% )
对照组 - 13. 80± 7. 38
模型组 - 52. 71± 3. 36# # 38. 91
酮替芬 0. 333 25. 54± 3. 69* * 11. 74 69. 82
喘宁软胶囊 26. 7 38. 53± 20. 37 24. 73 36. 44
33. 3 36. 32± 6. 21* 22. 52 42. 12
66. 7 33. 51± 4. 02* * 19. 71 49. 34
　　与对照组比较: # # P < 0. 01
　　与模型组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
脱颗粒反应和嗜酸性粒细胞炎症浸润。 肥大细胞作
为始动效应细胞 ,在抗原刺激下发生脱颗粒反应 ,释
放炎症介质 (组胺、白三烯、过氧化物酶等 ) ,引起平
滑肌收缩 ,粘液分泌亢进 ,血管通透性增加 ,慢性炎
症反应及气道高反应性。大量的研究表明 ,哮喘患者
肺灌洗液和周围血中嗜酸性粒细胞数量增加 ,嗜酸
性粒细胞能分泌具有神经和细胞毒性的蛋白颗粒 ,
主要包括主碱基蛋白 ( M BP)、嗜酸性粒细胞阳离子
蛋白 ( ECP)、嗜酸性粒细胞神毒素 ( EDN )和嗜酸
性粒细胞过氧化物酶 ( EPO) ,能直接损伤气道上
皮 ,导致气管炎症和气道高反应性 [5 ]。本研究选择动
物哮喘模型的迟发相模型—— 致敏小鼠抗原攻击后
嗜酸性粒细胞浸润反应观察喘宁软胶囊的抗过敏性
炎症反应 ,选择致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒反应
模型观察喘宁软胶囊对哮喘速发相的抑制作用。 结
果表明喘宁软胶囊能明显抑制肺灌洗液和周围血中
炎症细胞 (特别是嗜酸性粒细胞 )的聚集反应和致敏
大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒反应。因此我们初步证明
喘宁软胶囊的平喘作用可能与其抑制嗜酸性粒细胞
浸润和稳定肥大细胞膜有关。
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《中草药》杂志被确认为允许刊载处方药广告
·244· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期