全 文 ：HPLC法测定水芹中槲皮素和异鼠李素
王利胜 1 ,朱盛华 2 ,许晓峰 1
( 1. 广州中医药大学中药学院 ,广东 广州　 510405; 2. 广东岭南职业技术学院 ,广东 广州　 510663)
　　水芹为伞形科植物水芹 Oenanthe javanica
( Bl. ) DC. 的全草 ,全国各地均有分布 ,具有清热解
毒、利水功能 ,常用于治疗黄疸、水肿、痄腮等。 药理
研究表明 ,本品具有显著的抗肝炎作用 ,对乙肝病毒
( HBV )感染性肝炎有明显的保肝降酶、利胆退黄和
抗乙肝病毒作用 ,尚有抗心律失常、抗过敏等作用。
黄酮类化合物槲皮素、异鼠李素、蓼黄素和金丝桃素
等为水芹抗肝炎主要活性成分 [1 ] ,而对水芹质量控
制的含量测定方法 ,目前仅有分光光度法测定总黄
酮 [2 ]、 HPLC法测定绿原酸的报道 [3 ] ,尚无 HPLC法
测定水芹中黄酮类成分的报道。本研究用 HPLC
法 ,对不同产地的水芹中槲皮素和异鼠李素进行含
量测定 ,该方法具有简便、准确、重现性好的特点 ,可
作为水芹药材及提取物的质量控制方法。
1　仪器与试药
1. 1　仪器: 高效液相色谱仪: Waters 600E泵 ,
Wa ters PAD996 二 极 管阵 列 检 测 器 ; Waters
Millennium
32工作站 ; Shimadzu Libro r AEL 40SM
天平 (日本岛津 ) ; KQ— 50B超声波清洗机 (昆山市
超声设备有限公司 )。
1. 2　药品与试剂:槲皮素对照品 (中国药品生物制
品检定所 ) ;异鼠李素对照品 (四川省药品检验所 ) ;
水芹均购于广州市清平药材市场 ;甲醇为色谱纯 ;磷
酸 (优级纯 ,北京红星化工厂 ) ;其他试剂为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: Diamonsi l C18柱 ( 250 mm× 4. 6
mm, 5μm,迪马公司 ) ;流动相: 甲醇 -0. 5% 磷酸溶
液 ( 55∶ 45) ;检测波长: 367 nm;柱温:室温 ;体积流
量: 1. 0 mL /min。在该色谱条件下 ,槲皮素和异鼠李
素对照品保留时间分别约为 8. 2、 13. 7 min,供试品
色谱中槲皮素和异鼠李素峰与杂峰分离良好。 色谱
图见图 1。
2. 2　供试品溶液的制备: 取水芹药材粉末 (过 60
目筛 ) 5. 0 g ,精密称定 ,置索氏提取器中 ,加甲醇 30
m L提取 4 h,提取液水浴蒸干 ,残渣加甲醇-25% 盐
图 1　槲皮素、异鼠李素 (A)和样品 (B)的 HPLC图
Fig. 1　 HPLC chromatograms of quercetin,
isorhamnetin (A) , and sample (B)
酸 ( 4∶ 1)溶液 20 m L加热回流 30 min,用 0. 45μm
滤膜滤过 ,滤液于 25 mL量瓶加甲醇至刻度 ,即得。
2. 3　标准曲线的制备:取对照品槲皮素 3. 58 mg,
异鼠李素 2. 57 mg ,精密称定 ,置 50 mL量瓶中 ,用
甲醇溶解并定容 ,摇匀 ;精密量取 5 mL,置 10 mL
量瓶中 ,用甲醇溶解定容 ,摇匀 ,即得对照品溶液。精
密吸取此对照品溶液 1、 5、 10、 15、 20、 30、 40μL进
样 ,以峰面积积分值 ( A )为纵坐标 ,进样量 (C ) 为
横坐标 ,回归方程为: 槲皮素 A= 3 281 318. 1+
7 963. 9C , r = 0. 999 9; 异 鼠 李 素 A =
2 887 673. 1+ 8 534. 5C , r= 0. 999 9。 表明槲皮素
在 0. 036～ 1. 432μg ,异鼠李素在 0. 026～ 1. 028μg
与峰面积具良好的线性关系。
2. 4　精密度试验: 取对照品溶液 10μL进样 ,在以
上色谱条件下 ,进行日内、日间精密度试验。槲皮素、
异鼠李素日内 RSD分别为 0. 31% 、 0. 61% ( n=
6) ;日间 RSD分别为 0. 38%、 0. 68% (n= 6)。
2. 5　稳定性试验:取同一供试品溶液 ,于制备后每
2 h测定一次 ,槲皮素的 RSD为 0. 73% ,异鼠李素
的 RSD为 0. 65% ,测定结果样品溶液在配制后 12
h内稳定。
2. 6　重现性试验: 取同一批药材 5份 ,分别按样品
测定方法操作 ,槲皮素的 RSD为 1. 34% ,异鼠李素
的 RSD为 1. 42%。
2. 7　加样回收试验: 精密称取已知含量的样品 5. 0
g ,加入槲皮素、异鼠李素对照品 ,按上述方法测定 ,
计算回收率。 槲皮素的平均回收率为 98. 67% ,
RSD= 1. 82% ( n = 6) ;异鼠李素的平均回收率
·1061·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 9期 2004年 9月
收稿日期: 2004-01-16作者简介:王利胜 ( 1968— ) ,男 ,土家族 ,湖北利川人 ,现任广州中医药大学中药学院讲师 ,在读博士 ,主要从事中药新药研究及教学工作。 Tel: ( 020) 36585416( O)　 E-mail: w glis g@ 21cn. com
99. 54% , RSD= 1. 78% (n= 6)。
2. 8　样品测定:精密吸取供试品溶液 10μL进样 ,
以峰面积积分值计算 ,结果见表 1。
表 1　水芹药材中槲皮素和异鼠李素的测定结果 (n= 3)
Table 1　 Quercetin and isorhamnet in inO . javanica (n= 3)
批号 产地 质量分数 / ( mg· g
- 1)
槲皮素 异鼠李素
RSD /%
槲皮素 异鼠李素
1 湖北 0. 116 0. 191 1. 51 1. 34
2 广东 0. 112 0. 215 1. 36 1. 32
3 广西 0. 099 0. 184 1. 45 1. 58
4 湖南 0. 091 0. 174 1. 24 1. 25
5 河南 0. 066 0. 137 1. 56 1. 38
3　讨论
3. 1　检测波长的确定:用二级管阵列检测器分析比
较了槲皮素及异鼠李素对照品色谱峰和样品所测成
分相应色谱峰的紫外光谱 ,结果对照品和样品中槲
皮素、异鼠李素均在 367 nm处有最大吸收 ,故选择
367 nm为测定波长。
3. 2　提取方法研究:对水芹中槲皮素、异鼠李素提
取 ,采用超声提取法、热回流法、浸渍法、索氏提取法
4种方法 ,考察了不同溶媒、用量及提取时间的影
响 ,结果提取效率差别较大 ,以索氏提取法对槲皮
素、异鼠李素提取率最高。实验对比了甲醇-25%盐
酸 ( 4∶ 1)与甲醇 -5%硫酸 ( 1∶ 2)对水芹提取物的
水解 ,结果前者水解时间短 ,槲皮素、异鼠李素测定
结果高 ,故选用盐酸水解法。
3. 3　对流动相的选择:实验比较了甲醇 -水、甲醇-
0. 5%磷酸溶液、乙腈 -0. 4%磷酸溶液的不同比例的
流动相 [4～ 6 ] ,结果发现甲醇 -0. 5%磷酸 ( 55∶ 45) 效
果较好。
3. 4　含量测定结果表明 ,不同产地的水芹中槲皮
素、异鼠李素含量均较低 ,以广东、湖北产水芹含量
稍高 ,但各产地黄酮类成分含量相差不大。另外异鼠
李素含量普遍高于槲皮素 ,且多结合成苷 ,故测定槲
皮素、异鼠李素含量时 ,必须水解处理。
References:
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application of O. ja vanica [ J] . Pharm J Chin PL A (解放军
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Ancien t Book s of Chines e Medical Pu bishing House, 1997.
[3 ]　 Cao W B, Huang Z M, Yang X B, et al . Determination of
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贯众与其混用品大贯众 (桫椤 )的鉴别
薛　漓
(广西梧州药品检验所 ,广西 梧州　 543002)
　　贯众为较常用中药 ,具有清热解毒、驱虫的功
能 [1 ]。中医传统还有驱邪除疫之说。商品贯众为多种
蕨类植物的带叶柄的干燥根茎。 据统计其原植物有
5科 31种 ,其中除《中华人民共和国药典》 2000年版
收载的绵马贯众外 ,紫萁贯众、苏铁蕨贯众、狗脊贯
众、荚果贯众等在全国不同地区习用 [2～ 4 ]。 2003年
“非典”疫情流行之际 ,贯众药材用量急增 ,市场上曾
一度脱销。笔者在对防治“非典”有关药物的专项监
督检查过程中发现一种新的贯众混用品 ,当地称之
“人头蕨” ,经笔者鉴定为桫椤科植物桫椤 Cyathea
spinulosa Wall. 的茎干 ,又名龙骨风、大贯众。为了
正本清源 ,保证用药安全有效 ,笔者对大贯众 (桫椤 )
与《中华人民共和国药典》收载的绵马贯众和广西地
区习用的苏铁蕨贯众进行了药材性状、理化鉴别及
紫外光谱的比较。
1　仪器与材料
日 本 岛 津 UV— 265FW 分 光 光 度 计 ,
2537AUY— 1型三用紫外分析仪 (上海顾光村电光
仪器厂 )。
　　绵马贯众 ( A) ,为乌毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨
·1062· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 9期 2004年 9月
收稿日期: 2004-01-13