全 文 ：t ion of the indu stria lized p ro2 duct ion of
artem isin in th rough tw o2step m ethod.
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特异性真菌作用于龙血树材质形成血竭的研究
杨　靖1, 江东福2, 马　萍2Ξ
(11 湛江海洋大学 现代生化实验中心, 广东 湛江　524088; 21 云南大学微生物研究所, 云南 昆明　650091)
摘　要: 目的　探讨剑叶龙血树血竭的形成与微生物活动之间的关系。方法　用分离自剑叶龙血树根部的内生真
菌 9568D 镰孢霉接种于剑叶龙血树材质 (经灭活处理)。结果　保湿培养 4～ 5 个月后, 在接种部位有红色血脂颗粒
形成, 经UV、IR 光谱分析及抗菌活性实验, 初步证实该血脂与来自剑叶龙血树的天然血竭无本质差异。结论　特
异性真菌作用于龙血树材质可促成血竭的形成。
关键词: 9568D 镰孢霉; 龙血树材质; 血竭
中图分类号: R 286102　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 05 0572 03
Study on forma tion of D ragon’s blood in D racaena coch inch inens is
inocula ted w ith F usa r ium 9568D
YAN G J ing1, J IAN G Dong2fu2, M A P ing2
(1. Experim ental Cen ter of B iochem istry, Zhan jiang O cean U niversity, Zhan jiang 524088, Ch ina;
2. M icrob io logy Institu te of Yunnan U niversity, Kunm ing 650091, Ch ina)
Key words: F usa rium 9568D; D racaena coch inch inensis (L ou r. ) S. C. Chen; D ragon’s b lood
　　血竭 (D ragon’s b lood) 是中药传统品种之一, 其性味甘、温、咸、平, 兼有活血、化瘀、止血、补血的
·275· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 5 期 2004 年 5 月
Ξ 收稿日期: 2003207204
作者简介: 杨　靖 (1967—) , 男, 苗族, 湖南永顺人, 助理研究员, 硕士, 主要从事微生物生态及应用微生物研究。T el: (0759) 23834773 通讯作者　E2m ail: yh sne@ho tm ail. com
功效。剑叶龙血树血竭来自于剑叶龙血树D racaena
coch inch inensis (L ou r. ) S. C. Chen 的树脂, 早年
的研究[1 ]发现人工割伤可以促进树脂的积累。江东
福等[2 ]证实剑叶龙血树血竭的形成与真菌相关, 即
用特异性真菌接种活体龙血树, 激活龙血树的防御
反应, 产生含植物防卫素的血竭[3～ 5 ]。但人们注意到
在野外自然环境下, 一些衰老枯死的剑叶龙血树的
材质上亦有血竭形成, 其与真菌的作用是否有关联?
为此, 进行了以下的实验。
1　材料与方法
111　供试材料: 菌种分离自云南孟连城郊树龄长达
数百年以上的剑叶龙血树D racaena coch inch inensis
(L ou r. ) S. C. Chen 根部, 模式菌株保存于云南大
学微生物研究所应用微生物室。
　　天然血竭为中国科学院西双版纳热带植物园药
厂生产的“雨林牌”血竭, 源自天然龙血树。
112　酶液的制备: 将 9568D 菌株接种于含 2% 龙血
树木屑、8% 棉籽壳的灭菌固体培养基上, 25 ℃培养
5～ 6 d, 于 30 ℃下, 加入其 3 倍体积蒸馏水并充分
振荡 90 m in, 经超滤膜滤过, 收集的液体即为酶液。
113　接种液的制备: 将 9568D 菌株接种于含 5% 龙
血树木屑汁、2% 葡萄糖、3% 棉籽壳汁灭菌培养液中,
25 ℃下, 经 100 röm in 振荡培养 60 h 作为接种液。
114　龙血树材质灭活处理: 取直径约 1 cm 的离体
龙血树枝条和 1 cm ×2 cm 的龙血树离体木块若干,
钻以数个深 3～ 5 mm , 直径 1 mm 的小孔, 经沸水浴
蒸腾 5 m in 灭活后作为接种的龙血树材质。
115　接种处理: 龙血树材质 预处理 接种处
理 保湿培养。
11511　处理组①: 将龙血树材质置于 9568D 菌酶
液中, 55 ℃下浸泡 8 h 行预处理, 然后晾干, 再将
9568D 接种液注入预处理过的龙血树材质; 置于试
管中在室温下保湿培养。
11512　处理组②, ③: 分别用 011% 葡萄糖液和无
菌水预处理, 接种处理皆为菌液。
11513　处理组④, ⑤: 分别用 011% 葡萄糖液和无
菌水预处理作为对照。
116　接种处理效果的观察及测定: 分别于接种后保
湿培养 3～ 5 个月, 观察处理组和对照组红色血脂的
形成情况, 红色血脂的乙醇提取物分别以 DU 27
Backm an 紫外分光光度计和 FT S240öH P5890 色
谱ö红外联用仪测定, 并以天然血竭样品作对照, 抗
菌谱测定按圆滤纸片法[6 ]。
2　结果与分析
211　9568D 镰孢霉接种后的作用效果 (见表 1) :
9568D 镰孢霉接种于剑叶龙血树材质后, 保湿培养
10～ 15 d 即可观察到在接种部位颜色变红, 继续培
养 4～ 5 个月在红色区域有大小不等的血脂颗粒出
现, 而对照组却无此现象。试验结果也证明, 在不同
的预处理下, 血脂的形成量有差别, 以酶液预处理的
效果最佳。处理③仅在前期微显红色, 但后期在红色
区域内无血脂颗粒形成。
表 1　龙血树材质上血脂形成情况
Table 1　Resin formation in D. coch inch inens is
处　理
培养时
间öd 血脂形成量 (直径) ömm枝条 木块
酶液+ 菌液 120 0. 3～ 0. 5 0. 2～ 0. 3
011% 葡萄糖+ 菌液 120 0. 2～ 0. 3 0. 2
无菌水+ 菌液 140 - -
011% 葡萄糖对照 150 - -
无菌水对照 150 - -
212　光谱分析: 血脂与天然剑叶龙血树血竭的乙醇提
取物的光谱分析证明两者的谱形十分相似(图 1, 2)。É 2天然血竭样品　Ê 2血脂样品É 2natu ral D ragon’s b lood　Ê 2tested resin
图 1　血脂和天然血竭的红外光谱
F ig. 1　IR spectrum of resin s and
natura l D ragon’s bloodÉ 2天然血竭样品　Ê 2血脂样品É 2natu ral D ragon’s b lood　Ê 2tested resin
图 2　血脂和天然血竭的紫外光谱
F ig. 2　UV spectrum of resin and
natura l D ragon’s blood
·375·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 5 期 2004 年 5 月
213　血脂的抗菌谱: 见表 2。两种提取物的抗真菌
活性也一致。
表 2　血脂和天然血竭提取物的抗菌谱
Table 2　An tibiotic spectrum of resin and D ragon’s blood
试验菌
抑菌圈 (直径) ömm
血脂 天然血竭
金黄色葡萄球菌 12. 0 15. 0
大肠杆菌 - -
黄曲霉 - -
烟曲霉 - -
黑曲霉 - -
微曲青霉 15. 0 13. 0
串珠镰孢霉 9568D 12. 0 13. 0
三隔镰孢霉 11. 5 11. 5
粉红头孢霉 15. 0 12. 0
土生交链孢霉 - -
土色侧孢霉 - -
枝孢嗜果疮 18. 0 21. 0
出芽短梗霉 11. 0 11. 0
3　讨论
　　实验初步证明 9568D 镰孢霉作用于无生物活
性的剑叶龙血树材质可促成血脂的形成和积累, 该
血脂与天然剑叶龙血树血竭无本质差异。经灭活处
理的龙血树材质无疑已丧失了对微生物侵染的防御
反应能力 (产生植物防卫素) , 故在 9568D 镰孢菌接
种部位产生的血脂显然不是植物防卫素血脂, 但它
与天然植物防卫素血竭的组成和抗菌谱却极为相
似。在对 9568D 镰孢霉的形态观察中发现其小分生
孢子仅见诸于龙血树茎杆材料诱导培养基, 这说明
该菌在一定程度上对剑叶龙血树具适应性。由于内
生真菌生存在一个竞争的环境中, 它们可能通过与
宿主的共进化或基因转移, 模拟宿主的化学环境, 生
产和耐受宿主的某些代谢产物, 从而保证自己的竞
争优势。
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HPLC 法测定望春花蕾中望春花黄酮醇苷É 的含量
于宗渊1, 孙中矾2, 苏本正1, 刘　青1Ξ
(11 山东省中医药研究院, 山东 济南　250014; 21 山东大学化学与化工学院, 山东 济南　250012)
　　中药辛夷主治各种急、慢性, 过敏性鼻炎和鼻窦
炎。《中华人民共和国药典》2000 年版一部规定辛夷
为木兰科植物望春花M ag nolia biond ii Pamp. 、玉
兰M . d enud a ta D esr. 和武当玉兰 M . sp reng eri
Pamp. 的干燥花蕾。其中望春花蕾为辛夷的主流品
种。其含有望春花黄酮醇苷É 等化学成分[1 ] , 但其含
量测定方法至今未见报道。本实验建立了H PL C 法
测定辛夷主流品种望春花蕾中望春花黄酮醇苷É 含
量的方法, 并用该法测定了 11 批望春花蕾样品中望
春花黄酮醇苷É 的含量, 为评价和控制辛夷药材的
内在质量提供参考。
1　实验材料
W aters 高效液相色谱仪: 600 泵, 7725i 定量进
样阀, 进样环体积为 10 ΛL , 996 二极管阵列检测器,
M illenn ium 32色谱工作站; 甲醇为色谱纯, 水为超纯
水, 其他试剂均为分析纯; 望春花黄酮醇苷É 对照品
系自望春花蕾中提取并经色谱法分离纯化制得, 经
测定其UV , IR , 1H 2NM R , 13C2NM R 和M S 等波谱
数据进行了结构鉴定, 并经高效液相色谱归一化法
测定其纯度为 99161% ; 11 批望春花蕾样品分别购
自河南郑州、陕西西安、河北安国和山东等地 (表
1) , 经山东省中医药研究院钟方晓副研究员鉴定, 均
为木兰科植物望春花M ag nolia biond ii Pamp. 的干
燥花蕾。
·475· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 5 期 2004 年 5 月
Ξ 收稿日期: 2003207215
作者简介: 于宗渊 (1964—) , 男, 山东莱西人, 副研究员, 医学硕士, 1984 年毕业于山东医学院药学系, 主要从事中药化学成分及质量控
制方法等方面的研究工作。T el: (0531) 296847023018　Fax: (0531) 2968473　E2m ail: yuzys@ sohu. com