全 文 ：天山雪莲水提取物对小鼠辐射损伤的保护作用
高 博,梁中琴,顾振纶
(苏州大学医学院 药理学教研室、苏州中药研究所,江苏 苏州 215007)
摘 要:目的 观察天山雪莲水提取物 ( ES) 对电离辐射损伤小鼠的保护作用。方法 小鼠 ig ES 0. 75, 1. 5, 3. 0
g / kg, 14 d 后接受 8 和 2. 5 Gy 的照射,观察 8 Gy 照射小鼠的平均生存时间和生存率及 2 5 Gy 照射小鼠的脾 T
淋巴细胞转化能力和骨髓 DNA 含量。结果 ES 能显著延长 8 Gy 照射小鼠的平均生存时间 ( P< 0 05) , 并提高
生存率;显著提高 2 5 Gy 照射小鼠的脾 T 淋巴细胞转化能力和骨髓 DNA 含量 ( P < 0 05, 0 01) , 改善免疫功能。
结论 ES 具有抗辐射损伤作用。
关键词:天山雪莲提取物; 放射损伤;免疫功能
中图分类号: R286 94 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2003) 05 0443 03
Protective effect of extract of Saussurea involucrate on radiation injuried mice
GAO Bo, LIANG Zhongqin, GU Zhenlun
( Department of Pharmacolog y, Suzhou Institute of Chinese Materia Medica,
Medical College of Suzhou University , Suzhou 215007, China)
Key words: ex tract of Saussurea involucrate Kar. et Kir. ( ES) ; radiation damage; immune funct ion
天山雪莲 Saussurea involucr ata Kar. et Kir.
作为传统药物沿用已久,具有很好的抗炎、抗风湿、
镇痛、强心、终止妊娠、抗癌、抗氧化、清除自由基、解
痉、降压和平喘等作用[ 1~ 4] , 但其抗辐射损伤作用
甚少报道, 且只限于对免疫功能的研究[ 5~ 7]。本实
验通过小鼠体内给药观察了天山雪莲水提取物
( ES) 的抗辐射损伤作用。
1 材料
11 药品:天山雪莲全株水、醇浸提物首先蒸发醇,
再浓缩至每毫升相当于生药 1 g ( 1 g/ mL, 下文
同)。将提取物充分摇匀,以蒸馏水稀释 5 倍, 室温
过夜, 3 500 r/ min 离心 30 m in, 4 保存待用。经
定性分析,其中主要含有水溶性成分多糖、总黄酮及
总生物碱。
12 动物:昆明种小鼠, 体重 16~ 20 g,雌雄各半,
由苏州大学医学院实验动物中心提供。
13 试剂和仪器: RPM I1640培养基, Gibco 公司;
小牛血清, 杭州四季青生物工程材料研究所, 批号
00314; MT T, SDS, Sigma 公司; PHA, 上海市医学化
验所 (批号: 200502) ; CO2培养箱, Napco 公司;
DG3022A 型酶标仪,国营华东电子管厂。
2 方法
21 辐射条件: 照射源为直线加速器, 由苏州大学
附属第一人民医院放疗科提供, 一次性全身照射,剂
量率 200 mGy/ min,靶距 1 m。
22 分组及给药方法:将小鼠随机分为生理盐水对
照组, 模型组, ES 给药大、中、小 ( 3, 15, 075
g/ kg) 3 个剂量组,维生素 E ( Vit E) 75 mg / kg 组。
ig 给药或蒸馏水, 连续 14 d 后接受一次性全身照射
(生理盐水组不接受照射)。照射剂量: 平均存活时
间实验 8 Gy, 淋巴细胞实验 25 Gy。
23 观察指标: 8 Gy 照射后观察小鼠 30 d 内的平
均存活时间,同时密切注意小鼠的各种反应,如有无
惊厥、自主活动情况等。
24 淋巴细胞实验: 25 Gy 照射后第 3 天颈椎脱臼
处死小鼠,按常规方法制备骨髓和脾细胞标本, 进行
两个实验: ( 1)骨髓 DNA 含量测定。剖取一侧股骨,
除净软组织,用 10 mL CaCl2( 5 mmol/ L) 将全部骨髓
冲入离心管中, 4 冰箱中放置 30 min, 2 500r/ min
离心 15 min,弃上清,加入HClO4 5 mL 将沉淀物充分
混合, 95 加热 15 min,冷却,滤纸过滤,滤液用 752
C 型紫外分光光度计在 268 nm 处测定吸光度 ( A )
值。计算每根股骨 DNA 含量 DNA 含量 (g) = 40
50 A。( 2) MTT 法。按常规制备脾细胞悬液,
用 RPMI1640培养液 (含 20% 小牛血清, PHA 100
g/ mL) 调细胞数至 2 106/ mL, 加入 96 孔培养板
443中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
收稿日期: 20021126基金项目:国防预研项目
( 100 L/孔) ,于 CO2培养箱中孵育 72 h, 加入 MTT,
4 h 后用酸化 SDS 终止反应,用 DG3022A 型酶标仪
在 570 nm 处测定 A 值。
25 统计分析:数据均以 x s 表示,进行组间 t 检验。
3 结果
31 ES 对 8 Gy 照射小鼠 30 d平均生存时间及生
存率的影响: 如表 1 所示, ES 大、中剂量组能明显
延长 8 Gy 照射小鼠 30 d 平均生存时间,与模型组
相比差异显著 ( P< 001, 005) ; Vit E 组虽然亦延
长生存时间, 但与模型组相比差别不显著 ( P >
005)。ES 小剂量组则与模型组无显著差异。30 d
后, Vit E 组和 ES 大、中剂量组各有 1 只小鼠存活,
小剂量组及模型组无一存活。提示, ES 可明显延长
受照小鼠生存时间, 提高生存率。
表 1 ES对 8 Gy照射小鼠 30 d平均生存时间的影响 ( x s)
Table 1 Effect of ES on average survival time
of mice irradiated with 8 Gy ( x s)
组别 剂量
/ ( gkg- 1)
动物
/只
存活动物
/只
生存率
/ %
生存时间
/ d
NS - 10 10 100 30
模型 - 10 0 0 89 107
Vit E 0075 10 1 10 153 309
ES 075 10 0 0 105 177
15 10 1 10 172 263*
30 10 1 10 198 309* *
与模型组相比: * P< 005 * * P < 001
* P < 005 * * P < 001 v s model group
32 ES 对 25 Gy 照射小鼠骨髓 DNA 含量的影
响:经 25 Gy 照射后, 与生理盐水组相比, 模型组
小鼠骨髓 DNA 含量显著降低 ( P< 0001) ;与模型
组相比, ES 大、中剂量组骨髓 DNA 含量虽然有所
提高,但差异并不显著 ( P> 005) ;只有 Vit E 组显
著提高骨髓 DNA 含量 ( P< 001)。XL 对 25 Gy
照射小鼠骨髓 DNA 损伤的保护作用虽然无显著性
差异,但有一定的趋势。见表 2。
表 2 ES 对 25 Gy 照射小鼠骨髓 DNA 含量
的影响 ( x s, n= 6)
Table 2 Effect of ES on quantity of marrow DNA
of mice irradiated with 2. 5 Gy ( x s, n= 6)
组别 剂量/ ( gkg- 1) 照射剂量/ Gy DNA/g
NS - 25 1823 101
模型 - 25 1147 58
Vit E 0075 25 1414 97*
XL 075 25 1127 54
15 25 1301 100
30 25 1348 105
与模型组相比: * P< 001; 与生理盐水组相比: P < 0001
* P < 001 v s model group; P < 0001 v s NS group
33 ES 对受照小鼠淋巴细胞转化率的影响:见表
3。经 25 Gy 照射后,小鼠脾 T 淋巴细胞转化率明
显降低, 与生理盐水组相比差异显著 ( P < 001) ;
Vit E 组明显提高受照小鼠脾 T 淋巴细胞转化率,
与模型组相比差异显著 ( P< 001) ; ES 3 个剂量组
均提高受照小鼠脾 T 淋巴细胞转化率,但与模型组
相比, 只大、中剂量组有显著性差异 ( P < 001,
005) ,提示 ES 能减轻电离辐射对小鼠免疫系统的
损伤。
表 3 ES对 2 5 Gy 照射小鼠脾 T淋巴细胞
转化能力的影响 ( x s, n= 6)
Table 3 Effect of ES on transformation ability
of T lymphocyte in spleen of mice
irradiated with 2. 5 Gy ( x s, n= 6)
组别 剂量/ ( gkg- 1) 照射剂量/ Gy T 淋巴细胞转化能力/ A
NS - 25 0322 012
模型 - 25 0128 004
Vit E 0075 25 0238 006* *
XL 075 25 0238 019
15 25 0245 014*
30 25 0367 019* *
与生理盐水组相比: P < 001; 与模型组相比: * P < 005
* * P < 001
P < 001 v s NS group; * P < 005 * * P < 001 vs model
group
4 讨论
任何细胞、分子的病理变化,只有在整体上表现
出生物效应才有意义, 辐射损伤同样如此。对人体
而言,造血系统和免疫系统对辐射均高度敏感, 特别
是造血系统, 辐射的急性致死效应主要是因为造血
功能衰竭引起的[ 8]。本实验中 ES 连续给药 14 d
能明显延长受照小鼠生存时间, 其中大、中剂量组分
别达到 198和 172 d,与模型组相比差异显著 ( P
< 005) ; 生存率皆为 10% ; ES 亦能明显提高受照
小鼠的脾 T 淋巴细胞转化率,与模型组相比差异显
著或非常显著 ( P < 005, 001) , 说明其对受照小
鼠免疫系统有保护作用。ES 还有减轻骨髓 DNA
损伤的趋势。以上结果提示 ES 有较好的抗辐射损
伤作用。但对骨髓 DNA 损伤的保护作用并不明
显,推测可能是因为其最敏感, 所以损伤过于严重,
而使 ES 的作用无法体现,或剂量偏小所造成的。
在 ES 的抗辐射损伤作用中, 对免疫功能的影
响报道较多[ 5~ 7] , 本实验也得出同样的结果, 说明
其保护、增强免疫功能的作用是确实和稳定有效的,
这对于受到电离辐射损伤的生物体的恢复和防止继
发性改变具有重要意义。
444 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
电离辐射使生物体内的水原发辐解产生大量自
由基 (主要包括: eaq, OH, H2O2, HO2和 O2 ) 从
而引起辐射损伤[ 9] , 包括急性病变和致癌、致突变
等远期效应, ES 可能通过清除自由基, 保护重要生
物大分子如 DNA 免受损伤从而产生抗辐射损伤作
用。
References:
[ 1] Editorial Board of China Herbal, State Administ rat ion of T radi
t ional China Medicine. China Her bal (中华本草) [ M ] Shang
hai: Shanghai Science and Technology Publisher, 1999
[ 2] Li J S, Cai S Q. Chemical and pharmacological research advance
ment of Saussurea [ J] Chin Phar m J (中国药学杂志) , 1998,
33 ( 8) : 449452
[ 3] Jung J H, Kim Y, Lee CO, et al . Cytotoxic const ituents of
Saussur ea lappa [ J] Ar ch Pharm Res, 1998, 21 ( 2) : 153
[ 4] Zheng R L, Wang P F, Li J, et al . Free radical scavenging and
ant ifat igue act ivit ies of Saussurea involucrate polysaccharides [ J]
Chung K uo Yao L i Hsueh Pao, 1993, 4 ( Suppl) : 4749
[ 5] Ma H J, Fan G X, Ren H X, et al . Influence of Saussurea
flavone glycoside to monocyte funct ion of human PBL [ J ] J Xi
an Med Univ (西安医科大学学报) , 1998, 19 ( 2) : 168169
[ 6] Wang P, Yang J H, Wang Y J. Influence of Saussurea t o normal
and radio damaged mice macrophage funct ion [ J] Chin J Mi
cr oecol (中国微生态学杂志) , 1998, 10 ( 1) : 3233
[ 7] Wang P, Bai H Q, Bai F P. Influence of Saussurea to the recov
ery of immune funct ion from radio damaged mice [ J] Chin J Ra
dio Med Pro (中华放射医学与防护杂志) , 1997, 17 ( 3) : 161
162
[ 8] Xia S X. Radiobiology ( 放射生物学 ) [ M ] Military Medical
Science Publishing House, 1998
[ 9 ] Cheng A, Caf frey M . Free radical m ediated Xray damage of
model membranes [ J ] Biophys J, 1996, 70 ( 5) : 22122222
槐胆康痔水丸的药效学研究
肖学凤1,林 吉吉2,邱智东2,李建平2,王 凯2
( 1 天津中医学院, 天津 300193; 2 长春中医学院, 吉林 长春 130021)
摘 要:目的 观察槐胆康痔水丸对实验性痔疮的影响。方法 采用醋酸烧灼大鼠肛周形成溃疡、大鼠实验性痔
疮、口腔粘膜溃疡和止血实验。结果 槐胆康痔水丸对醋酸所致大鼠肛周溃疡、大鼠实验性痔疮和口腔粘膜溃疡
有显著的治疗作用,并且实验证明止血作用显著。结论 槐胆康痔水丸对实验性痔疮的治疗作用, 为其在临床上
治疗痔疮提供了理论依据。
关键词:槐胆康痔水丸; 实验性痔疮;止血
中图分类号: R285 5 文献标识码: A 文章编号 : 0253 2670( 2003) 05 0445 03
Pharmacodynamic study of Huaidan Kangzhi Pellet*
XIAO Xuefeng 1, L IN Zhe2, QIU Zhidong 2, L I Jianping2, WANG Kai2
( 1. T ianjin College of TCM , T ianjin 300193, China; 2. Changchun College of TCM , Changchun 130021, China)
Key words: Huaidan Kang zhi Pellet ( HKP) ; experimental hemorrhoid; hemostasis
* Huaidan Kang zhi Pellet is a Chinese preparat ion used against hemorrhoid.
槐胆康痔水丸为治疗痔疮的制剂, 主要由槐米、
猪胆膏、砂仁等精制而成。痔疮在药效学上没有固
定的动物模型, 我们根据痔疮临床症状及新药申报
要求设计并改进了实验性痔疮和肛周粘膜溃疡的药
效学试验模型, 观察槐胆康痔水丸对实验性痔疮的
治疗作用。
1 实验材料
11 动物:昆明种小鼠, 吉林大学动物部提供,体重
18~ 22 g, 雌雄兼用, 合格证号: 吉医动字第 10
5107。Wistar 大鼠,吉林大学动物部提供,体重 110~
150 g,雌雄兼用,合格证号: 吉医动字第 105110。
12 药品:槐胆康痔水丸,长春中医学院制剂室提
供,人临床用量为 9 g / d,每克药品相当于 175 g 生
药,批号: 980313, 使用前用蒸馏水配成混悬液备用。
痔康片,江中制药厂出品,批号: 9702003。
2 方法与结果
21 对醋酸所致大鼠肛周溃疡的影响[ 1] : 取大鼠
50 只, 雌雄各半,体重 160~ 180 g。用 990% 醋酸
致肛门周围溃疡: 取一张滤纸,用内径为 6 mm 的打
孔器, 制成大小相等的滤纸片。展开滤纸片, 放入
990% 醋酸溶液中, 充分浸泡。分别将浸泡后的滤
纸片放到肛门周围, 使滤纸片紧密接触肛周皮肤及
445中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
收稿日期: 20020731基金项目:国家中医药管理局科研基金项目 (0001 L( p) 029)作者简介:肖学凤,女,讲师,主要从事中药药剂学研究,发表论文 10 余篇,曾参与两项国家中医药管理局课题的研究工作。