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RAPD法在金线莲的鉴别研究中的应用
胡珊梅 1 ,张启国 1 ,周涵韬2 ,阮元彬2

( 1. 厦门市药品检验所 ,福建 厦门　 361012;　 2. 厦门大学生命科学学院 ,福建 厦门　 361005)
摘　要: 目的　金线莲母 (金线莲 )与金线莲公 (无线金线莲 )是否为同一种植物 Anoectochilus roxburghii历来有争
议 ,为了准确鉴别这两种植物并搞清楚二者之间遗传变异。方法　本文运用 RAPD技术 ,对同一采集地的具有不同
叶面特征的金线莲进行了 DNA指纹鉴定。结果　两者的 DN A指纹图谱具有部分共同的位点 ,但又有各自的特征
性位点。 结论　二者具有较大的遗传变异。
关键词: 金线莲公 ;金线莲母 ; RAPD
中图分类号: R282. 710. 3　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 10 0949 02
Identification of two species of Anoectochilus Bl. Jinxianlian by RAPD
HU Shan-mei
1 , ZHANG Qi-guo
1 , ZHO U Han-tao
2 , RUAN Yuan-bin
2
( 1. Xiamen Institute fo r D rug Cont ro l, Xiamen 361012, China;　 2. Co lleg e of Life Science,
Xiamen Univ ersity, Xiamen 361005, China)
Key words: Jinxianlian Gong; Jinxianlian Mu; RAPD
　　金线莲为兰科开唇兰属植物 ,其化学成分、药用
价值已有报道 [1, 2 ]。 我们曾对花叶开唇兰 Anoec-
tochilus roxburghii ( Wal l. ) Ldl. 两个产地的福建
金线莲和广西金线莲及台湾开唇兰 A. formosanus
Hay. 进行了 DNA指纹鉴定 ,揭示了两种金线莲的
种间差异及同种不同产地的金线莲的遗传变异 [ 3]。
　　在福建省金线莲的分布主要是花叶开唇兰 ,民
间习惯称叶面具有明显的金黄色网脉的为金线莲母
·949·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 10期
收稿日期: 2002-04-06基金项目:厦门市卫生局医学科学技术进步基金科研资助项目
(金线莲 ) ,叶面叶脉不明显或无脉的为金线莲公 (或
无线金线莲 )。据报道 ,这两者常常以伴生形式生长
在同一生态环境下 ,前者分布量较大 ,在采集金线莲
的同时 ,也有部分无线金线莲夹杂。学者们曾经把无
线金线莲订为绒叶斑叶兰 Goodyera velutina Max-
im. 或分出一个新种 [4 ] ;但后来经中科院北京植物
研究所兰科专家郎楷永教授鉴定二者为同一种植
物 [5 ] ;郑纯等对此作了解剖和理化鉴别 ,也认为二者
是同种植物 [6 ]。在外贸出口中曾把无线金线莲视为
伪品。 为了搞清楚二者是否为同种植物及他们之间
的遗传关系 ,我们在同一生态环境采到了金线莲和
无线金钱莲 ,进行了 DNA指纹鉴定 ,为金线莲的正
确分类和扩大药用资源提供科学依据。
1　材料与方法
1. 1　植物材料:金线莲与无线金线莲均采于福建永
安罗坊乡 ,野生。
1. 2　 DNA提取分离: 采用改进的 CTAB法 ,取新
鲜叶片 0. 8 g。提取步骤见文献 [4 ]。
1. 3　 PCR反应: 扩增总体积 25μL ,其中 2. 5μL
10×buffer, Mg2+ 2 mmol /L, dN T P 1 mmol /L ,引
物 15 ng (名称及序列见表 1) , DN A模板 50 ng ,
0. 5单位 Taq酶 ,加超纯水至 25μL。
表 1　 17个引物对两种金线莲的 DNA扩增结果
引物名称 序列 ( 5’ → 3’ ) 总标记数 特异位点数
金线莲公金线莲母金线莲公金线莲母
S108 GAAACACCCC　　 3 　　 9 　　 1 　　 7
S158 GGACTGCAGA 3 5 2 1
S188 TTCAGGGTGG 5 9 2 5
S18 CCACAGCAGT 6 8 1 3
S178 TGCCCAGCCT 12 7 5 0
S148 TCACCACGGT 6 8 1 2
S168 T T TGCCCGGT 9 9 1 1
S88 TCACGTCCAC 5 5 1 1
S8 GTCCACACGG 5 6 0 2
S11 GTAGACCCGT 13 14 0 1
S12 CCT TCACGCA 6 7 0 1
S38 AGGTGACCG T 9 12 0 3
S78 CGAGTGGGTG 9 9 1 1
S28 GTGACGT AGG 5 7 0 2
S128 GGG ATATCGG 5 10 0 4
S19 ACCCCCGAAG 5 4 1 0
S21 CAGGCCT T TC 4 5 0 1
　　在 T3 PCR仪 (德国 Biometra)上扩增 ,扩增程
序为 90℃变性 1 min; 36℃复性 1 min; 72℃延伸
2 min; 40个循环 ,最后 72℃延伸 7 min。扩增产物
20μL于 1. 5%琼脂糖凝胶上电泳 ,经 EB染色 ,凝
胶成像系统 ( GDS8000,英国 UV P)照相并打印。
2　结果与分析
　　采用改进的 CT AB法 ,提取了两种金线莲的总
基因组 ,从 22个 10-Mer随机引物中 ,筛选出 17个
有效引物 ,获得了清晰稳定重现性好的基因组 DNA
多态性指纹图谱 (图 1) ,每个引物产生的标记数在
3～ 12之间 ,共得到 244个 RAPD标记和 51个特异
位点 (表 1)。
1-金线莲公　 2-金线莲母　 M-λDN AEcoRI/ HindⅢ分子量标记
图 1　 6种引物对 2种金线莲样品的扩增图谱
3　小结与讨论
3. 1　从 DNA指纹图谱可以看出 ,二者具有部分共
同的谱带 ,但又有各自的特征性谱带 ,说明二者的遗
传基因已经产生了变异。 建议分别独立成种。以上
6种引物可以作为鉴别两种金线莲的特征性引物。
3. 2　经反复实验 ,证明 RAPD分子标记技术可靠
性强 ,重现性好 ,主要是鉴定中药材的染色体、线粒
体或叶绿体的特征基因遗传信息 ,具有种属专一性 ,
对于外观性状相似且显微组织特征性不强、化学成
分复杂 ,用传统的形态标记方法无法准确鉴定的品
种是一种快速、准确的手段。
致谢:本课题样品采集及文献查阅得到福建亚
热带植物研究所陈裕、福建永安罗坊乡陈锦光的大
力帮助 ,特此致谢!
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