全 文 ：肝脾康胶囊药理作用研究
黑 龙江 省中龙 医药 专科 研究院 (哈尔滨 1 5 0 0 80)
黑龙 江中医药大学
焦柏忠 . 刘晓晶 吕美丽
田振坤 常存库
摘 要 肝脾 康胶囊对鸭 乙 型肝炎病毒感染鸭血清 D H B V 一D N A 有 显著的抑制作用 。 能显著降低
CCI
; 所致的小 鼠血清谷丙转氨酶 的升高 , 降低小鼠肝 脏甘油三醋含量 , 提高肝搪元含量 。 对肝硬化
模 型大 鼠 , 能降低肝 硬化形成 率 , 降低肝胶原蛋 白 、血清 r 球蛋白 、肝脏 经脯氨酸和肝总脂 含量 , 减
轻肝脏病 理变化 。 能提 高细胞免疫 功能 , 增加尿素蛋 白质和铜 蓝蛋白质合成 , 增 加胆汁流量 。
关键词 肝脾康胶囊 慢性 乙型肝 炎 肝硬化
肝脾康胶囊 是由黄茂 、 熊胆粉 、 三 七 、 郁
金 、板蓝根等中药精制而成 。 具有疏肝健脾 、
清热活血的功效 , 临床用 于 治疗慢 性乙 型肝
炎 、肝硬化疗效显著 , 并对丙肝 、 脂肪肝 、酒精
肝等也具有 良好的治疗效果 。 我们对该药的
药理作用进行了实验研究 。
1 实验材料
1
.
1 药物 : 肝脾康胶囊 由哈尔滨市中龙肝病
医 药研 究所 提供 , 1 . 5 9 生药 / g ; 无 环鸟 昔
(A CV )
, 湖北科益公 司 ; 护肝 片 : 黑龙江省五
常制药厂 ; 联苯双醋 片 : 上海第 十二制 药厂 ;
0
.
9 %氯化钠注射液 : 哈尔滨制药六厂 。
1
.
2 病毒 : 鸭乙 型肝 炎病毒 、鸭 乙型肝炎病
毒 D N A (D H B V 一D N A ) 强阳性血清 , 采 自上
海麻鸭 , 一 7 O C 保存 。
1
.
3 实验动物 : 1 日龄北京鸭 , 购 自中国 医
学科学院药用植物研究所养鸭场 ; 昆明系小
鼠 , W ista r 系大 鼠均由黑龙江 中医学 院实验
动物中心提供 ; 新西兰种家兔 , 由黑龙江省兽
医研究所动物中心提供 。
2 方法与结果
2
.
1 肝脾康胶囊在鸭体内对鸭 乙型 肝炎病
毒感染的治疗效果
2
.
1
.
1 鸭 乙 型 肝炎 病毒感 染 : 1 日龄北 京
鸭 , 经腿胫 iv 上海麻鸭 D H B V 一D N A 阳性鸭
血清 , 每只 0 . 2 m L , 在感染后 7 d 取血 , 分离
血清 , 一70 C 保存待检 。
2
.
1
.
2 药物治疗试验 : D H B V 感染雏鸭 7 d
后随机 分组进 行药物 治疗试验 , 每组 5 ~ 6
只 , 给药组第 1 , 2 , 3 批均分别 口 服 l , 3 , 5 9 /
k g 肝脾康 ;病毒对照组 (D H B V )以生理盐水
代替药物 ; 阳性对照组第 1 , 2 批均分别 口 服
1 0 0 m g / k g 无环鸟昔 。 每 日 2 次 , 共 1 0 d , 在
感 染 后第 7 天 即用药前 (T 。 ) , 用 药第 5 天
(T
S
)
, 第 1 0 天 (T I。 )和停药后第 3 天 (P3 ) 自
鸭腿胫静脉取血 , 分离血清 , 一 70 C 保存待
检 。
2
.
1
.
3 结果
¹ l 日龄北 京鸭感染 D H B V 后 , 3 批 实验感
染鸭 7 8 只血清 D H BV 一 D N A 全部阳性 。 病
毒对照组 17 只雏鸭感染后第 7 天 D H B V -
D N A 全部阳性 。 感染第 7 , 12 , 17 和 2 天血
清 D H B V 一D N A 水平有所变动 , 但无显著差
异 , 为 自然波动 。
º 阳性药对照组第 1 , 2 批实验 D H B V 感染
鸭 n 只 , 口 服无环 鸟昔 10 0 m g /k g , 有明显
抑制 D H B V 作用 , 但停药后略有反跳现象 。
» 肝脾康胶囊在 D H B V 感染鸭体内对鸭血
清 D H B V 一D N A 的影响 : 第 1 批 3 个剂量组
中 5 9 / k g 组 T , 。鸭血清 H D B V 一D N A O D 度
与 T 。比较显著下降 (尸< 0 . 0 5 ) , 与病毒对照
组对 比有明显的抑制作 用 (尸 < 0 . 0 1) , 未见
A d d re s s : Jia o Ba iz h o n g
,
H e l。) n g jia n g Zh o n g lo n g A o a d e m y o f M e d ie a l a n d Ph a r m a e e u t ie a l Sc ie n e e s
, H a e r b in
· 9 26 -
毒性反应 。 第 2 批 5 9 / k g 在 T S , T 10 都有显
著抑制 (尸< 0 . 01 及 尸< 0 . 0 5 ) 。 第 3 批实验
5 9 / k g T
l。血 清 D H B V 一D N A 抑 制 3 8 . 6 % ,
停药后 3 d 抑制 53 . 6 % , 与生理盐水对照组
相 比有显著和非常显著意义 。
2
.
2 对小 鼠 CC I; 肝损 伤的影响 : 取健康 昆
明种小鼠 7 0 只 , 体重 2 2~ 24 9 雄性 。 随机分
为 7 组 , 每组 10 只 。 其中 6 组分别由 s c l%
CC 1
4 植 物 油 5 m L / k g , 隔 日 1 次 , 共注 射 3
次 。 于第 3 次注射 CC1 4 当 日开始给予药物 。
分别 19 肝脾康 0 . 5 , 1 . 0 : 2 . 0 9 /k g , 护肝 片
1
.
0 9 / k g
, 联苯双醋片 1 0 0 m g / k g , 模型对照
组给予等体积生理盐水 , 容 积为 0 . 5 m L / 20
g , 每 日 1 次 , 连续 7 d , 剩余 1 组不做任何处
理作为正常对照组 。 末次给药后 3 h , 割颈取
血测定血清谷丙转氨酶 , 同时取适量肝组织
测定甘油三醋 , 过氧化脂质 , 谷胧甘肤和谷脱
甘肚 一S 一转移酶等生化指标 。 并取适量肝组织
常规福尔马林液固定 , 石蜡切片 , H . E 染色 ,
进行组织学检查 , 结果见表 1 , 2 。
裹 1 对 C C I. 肝损伤谷丙转奴醉的影响‘士 : )
剂量 动物数 血清谷丙组别
(g / k g ) (只 ) 转氨醉 (U )
正常对照 一 10 9 8 7士 2 4 5 “
模型对照 一 10 2 1 1 9士 5 2 4
联苯双酸 0 . 1 10 1 4 7 3士 4 1 2 、 “
护肝片 1 . 0 10 1 6 2 3士 4 3 6 “
肝脾康胶囊 0 . 5 10 1 6 1 1士 2 5 7 . “
1
.
0 10 1 4 2 6士 4 8 2 二
2
.
0 10 1 1 5 0士 5 6 2 . ’ △
与模型对照组 比较 : ‘ 尸< 。. 05 ‘ , P < 。 . 01
与护肝 片组 比较 : △尸< 0 . 05
表 2 对 CO ;肝损伤生化指标的影晌‘士s)
组别 荆量
(g / k g )
肝糖元含量
(拌g / 2 m g 肝 )
甘油三醋
(m g / g 湿肝)
正常对照
模型对照
联苯双醋
护肝片
肝脾康胶囊
2 4
.
07士 2 . 30 ‘ 件
6
.
10士 1 62
1 5
.
63士 2 . 67 二
1 0
.
17士 2 . 21 节 件
1 6
.
73士 2 . 21 位 . △△
1 4
.
96士 3 . 7 . 母
1 1
.
43士 2 . 45 . 价
30
.
31士4 . 6 3 二
50
.
20士4 . 0 4
30
.
2 1士4 6 . 1 7二
28
.
4 5土6 . 16 份 .
22
.
4 5士3 . 14 二 △△
28
.
21士5 . 8 2 份 .
35
.
2 7士4 . 6 6 件 .
病理形态 检查模 型对照组可见 CC1 4所
致典型的围绕 中央静脉的小叶中心型坏死 ,
外周可见肝细胞的混浊肿胀和气球样变及嗜
酸性变等病理改变 。肝脾康胶囊 中 、低剂量组
肝细胞虽有混 浊变性 , 但结构完整 , 细胞核
清晰可见 ; 高剂量组可见肝细胞索结构完整 ,
与肝血窦比例正常 , 肝细胞着色基本正常 , 胞
核清晰 。
2
.
3 肝脾康胶囊对 CCI ‘致体外培养肝细胞
损伤的保护作用 : 参照 Se gl e n 的方法 , 在乙
醚麻醉下经大鼠门脉插管 , 用 0 . 25 %胰蛋白
酶缓冲液循 环灌流离体肝脏 , 分离收集肝细
胞 。肝细胞收获率为 I X 10 “~ 4 X 1 0s 个细胞 /
肝 , 台盼蓝染色计数细胞 存活率为 90 % 以
上 。 用含 1 0 % 小牛血清 R PM I 1 6 4 0 干粉培
养基液稀释成 5 X IO3个细胞 / m L , 接种于 24
孔 培 养板 中 , 每 孔 l m L 共 4 0 孔 , 细胞 置
CO
Z培养箱 中预培养 1 . s h 后 , 于肝脾康胶
囊组每孔加人 巧% 肝脾康胶囊药物稀释液
1 5 m L
, 继续培养 Z h 后 , 肝脾康胶囊治疗组
及模型组内加 20 % CC1 4酒精溶液 巧 m L , 再
培养 4 h , 各组同时终止培养 。 分别取上层培
养液 5 0 rh L 测谷丙转氨酶 (改良金氏法 ) , 5 0
m L 测尿素氮 (尿 乙酞二肪法 ) , 5 0 0 m L 测铜
蓝 蛋 白食量 (微 量 法 ) , 10 0 川J 测 丙 二 醛
(M D A )(丁BA 荧光法 ) 。 肝细胞经离心去上
清液 , 加人 4 m L 冰生理盐 水 , 1 8 0 0 r / m in
离心 l m in , 制成肝细胞匀浆 , 分别测 MD A
(T B A 发光法 ) , 总蛋 白含量 (Fol ln 一酚法 )及
尿素氮含量 。 于培养板各孔底预先置一小块
盖玻 片 , 终止培养后 取出 , 制成 扫描电镜标
本 。
生化测定结果见表 3 ~ 5 。 可见 CCI 咭中毒
肝细胞谷丙转氢酶释放 明显增 加 , MD A 生
成显著增多 , 尿蛋 白质及 铜蓝蛋 白的合成明
显减少‘。 加人肝脾康胶囊药液谷丙转氨酶释
放减少 , M D A 生成减少 , 尿素蛋白质及铜蓝
蛋白的合成明显增加 。
电镜下形态 : ¹ 正常肝细胞膜表面绒毛
致密 , 呈规则指状突起 , 纹理清楚 。 º CCI ‘中
一 9 2 7 .
,.1两UŽa八UO
.⋯八曰linŽ抽L勺白
与模型对照组 比较 : ’ ‘ 尸< 0 . 01
与护肝片组 比较 : 八 尸< 0 . ()5 凸△尸< 0 . 01
《中草 药》1 9 9 9 年第 3 。 卷第 12 期
毒细胞表面绒毛稀疏 , 排列紊乱 , 甚至绒毛完
全脱失 , 呈光板状 。» 加人肝脾康胶囊后可明
显减轻肝细胞膜表面的损伤 。
衰 3 对培养肝细胞谷丙转氮醉释放及 M D A
生成的影晌伽 ~ 10 厉士 : )
组 别 谷丙转氮醉 悬液MDA 细胞内MDA
摸型组 476 . 8士10 . 8“ 0 . 308士 0 . 059 18 . 4士6. 5 ’ ‘
肝牌康胶班组 421一 土11. 2△△ 0 . 206士0 . 078△ △ 8 . 4士3. 9△△
正常对照组 421. 2士10 . 9 0 . 245士0 . 031 11. 8士2. 6
积的生理盐水 。 实验第 6 周末处死动物 。 取
血清做蛋 白电泳 , 肝左叶固定于 10 %福尔马
林液 中 , 石蜡包埋 切片 , H . E 及 V . G 染色 ,
进行组织学观察 , 其余肝组织 留作经脯氨酸
测定 。 处死前收集 16 h 尿 , 侧定尿经脯氨酸
含量 。 详见表 6 , 7 。
裹 6 对肝硬化形成率的影晌
加t 肝纤维化程度 肝胶原蛋白含t
(g /掩) 一 十廿册 (叱/ g 干肝)
与正常对 照组 比 : ’ 尸< 0 . 05 , , 尸< 0 . 01
与模型组 比 : △尸< 0 . 0 5 △△尸< 0 . 01 ( 下表同 )
衰 4 对 C cl .损伤肝细胞蛋白质及铜蓝蛋 白
含 , 的影晌 ( . = 10 汪士 : )
正常对照
肝硬化对照
联苯双助
护肝片
肝砰康胶.
货
10 0 0 0
0 4 3 3
4 3 3 0
2 3 3 2
6 3 1 0
18
.
4士0 . 53二
33
.
2士3. 2‘
22
.
8士2. 27二
26
.
3士1. 51二
20
.
4士1. 91二
t 漪r 球蛋白t
(%)
19
.
50士1. 40 “
20
.
6士0. 51
18
.
2士0 . 52二
19
.
42士0 . 朋二
16
.
44士0 . 65二
组 别
与肝硬化对 照比较 : ‘ 尸< 0 . 05 . ‘ P < 0 . 01
裹 , 对尿轻脆妞吸排出 . 的影晌‘士s)
模 型组
肝脾康胶囊组
正常对照组
总蛋 白 铜蓝蛋白
( m g / 5 X 108 细胞 ) (”g / SX 10 。细胞 )
9 5
.
6 士 8 . 6 ‘ ’ 17 5 . 5 士 13 . 2 ‘
120
.
1士 11 . 4△△ 212 . 9 士 19 . 5△△
1 14
.
7 士 11 . 3 213 . 4 士 20 . 2
荆皿
( g / ks
尿 径确 氮酸含 t
(雌 / m L )
裹 5
组 别
棋璧组
肝牌康胶级组
正常对照组
对 C cl 4损伤肝细胞尿康代谢的影晌
(几 = 10 , 牙士 s )
是液尿素 血内尿众 总尿索
(阿 / S X los 细血) (雌 /5 X lo8 细胞) (傀 / S X I OS细胞)
86
.
4士2, 3 . 17 . 9士4. 9 . 番 101. 4士5. 5 苍 份
65
.
9士1. 4△△ 50 . 2士11. 2△△ 122. 6士11. 3△△
82
.
4士 2. 6 42. 8士鼠2 125. 1士4 1
2
.
4 肝脾康胶囊对肝硬化模型的影响 : 取雄
性 W is t a r 大鼠 5 0 只 , 体重 18 0 ~ 220 9 , 分为
5 组 , 即正 常对照组 、 肝硬化对照组 、联苯双
醋组 、护肝 片组 、肝脾康胶囊组 , 每组 10 只 。
除正常组外其余 4 组均采 用复合病 因 (CC1 4
高脂低蛋 白膳食及饮酒等刺激 )复制肝硬化
模型 , 给药组于实验第 2 天开始 啥 给药 , 每
日 1 次 , 共 6 周 , 剂量见 表 6 , 容积 为 l m L /
10 9
, 正常对 照组 、肝硬化对照组给予等体
正常对照 一 1 . 9 2士 0 . 31 ‘
肝硬化对照 一 1 . 28士 0 . 21
联苯双醋 0 . 0 5 1 . 79 士 0 . 34 ’
护肝片 2. 0 1 . 9 4士 0 . 7 2 ‘
肝脾康胶囊 2. 0 3 . 40士 0 . 37 ·
与肝硬化对 照组 比较 : . 尸< 0 . 01
2
.
5 肝脾康胶囊对家兔胆汁流量的影响 : 取
新西兰种家兔 36 只 , 体重 (3 士 0 . 5) k g , 雌雄
不拘 , 随机分为 6 组 , 分别 19 给药 , 给药后
1
.
s h , 以 3%戊 巴 比妥钠静 脉麻醉 , 仰 卧行
剑突下正中偏右全层切一 6 c m 长切 口 , 找出
胆总管及十二指肠 , 在胆总管中段切一小 口
插人 内径 1 m m 塑料管 , 结扎固定 , 在塑料管
下连记滴装置使胆汁流量平衡 10 m in , 记录
胆汁流量 (滴 / m in )共 6 0 m in , 结果见表 8 。
2
.
6 对小 鼠单 核吞噬细胞 功能的影响 : 取
18 ~ 2 9 小鼠 48 只 , 随机分成 6 组 , 正常对
衰 8 对家兔胆汁流 , 的影晌
剂量 给药后 (而n ) 胆汁流 t (滴 )组 别
( g / k g ) 10 20 30 40 5 0 6 0g
生理盐水
联苯双醋
护肝片
肝脾康胶囊
6
.
12士 0 . 30
9
.
3 3士 0 . 3 1
12
.
30 土 0 . 42
14
.
33士 1. 10
14
.
40 士 0 . 5 4
12
.
5 0 土 0 . 8 7
6
.
34士 0 . 22
l〕. 31士 0 . 40
12
.
4 7士 0 。 5 1
14
.
17士 1. 10
13
.
42士 0 . 5 5
12
.
25士 1. 0 2
6
.
7 5士 0 . 40
] 2
.
24士 1. 0 8
12
.
00 士 2 . 35
13
.
33士 1. 13
12
.
21士 0 . 50
12
.
50 士 1. 0 2
5
.
3 6士 0 . 2 5
11
.
7 5士 0 . 21
11
.
2 5士 0 . 4 2
13
.
5 0士 0 . 7 0
11
.
4 4士 0 . 6 4
10
.
0 0 士 1 . 0 0
6
.
0 0 士 0 . 30
11
.
0 0 士 0 . 0 4
9
.
0 0 士1 . 40
12
.
6 7士 1. 13
11
.
3 4士 0 . 6 2
11
.
7 5士 1. 12
5
.
7 0士 0 . 22
11
.
0 0士 0 . 0 3
9
.
5 0 土 1 . 0 3
10
.
6 4士 1 . 0 6
12
。
0 0土 0 . 7 3
10
.
20士 2 . 5 0
0500.21户
9 28
照组 、联苯双醋 (2 0 0 m g / k g )组 、护肝片 (2 9 /
k g )组 、肝 脾康 胶囊 (4 , 2 , 1 9 / k g ) 3 个剂 量
组 , 19 给药 , 每 日 1 次 , 共给 10 d , 容积为 0 . 5
m L / 2 0 9
, 于末次给药后 3 m in , 尾部 iv 印度
墨汁 0 . 1 m L / 2 0 9 , 注射后 2 、 1 0 m in , 分别从
眼眶后静脉丛取血 20 m L , 处理后测 O D 值 ,
计算廓清指数 , 结果见表 9 。
表 , 对小暇单核吞噬细胞功能的影响‘士 : )
组别 剂量
(g / k g )
动物数
(只 )
廓清指数
( X 1 0 一 3 )
正常对照
联苯双醋
护肝片
肝脾康胶囊
5
.
0 2 士 0 . 8 4
1 2
.
3 5 士 3 . 7 6 件 奋
8
.
3 4 士 2 . 0 8 二
10
.
2 3 士 3 . 4 3 份 苍
9
.
7 4 士 2 . 5 6 . 份
9
.
6 9 士 3 . 3 2 怜 份
nO只†”夕Ž1工
与正常对照 比较 : 一 尸< 。 . 01
3 讨论
实验结果表明 , 肝脾康胶囊 口服 5 9 / k g
组对 鸭 乙 型肝 炎 病毒 感染 鸭血 清 D H B V -
D N A 有 显著 的抑 制 作 用 。 肝脾 康 胶囊 对
CC I
; 所致小 鼠肝损 伤有 良好的保护作用 , 能
显著降低血清谷丙转氨酶和肝脏甘油三醋含
量 , 增加肝糖元含量 ;能明显降低模型大鼠的
肝硬化形成率 , 降低肝胶原蛋 白和血清 r 球
蛋 白含量 , 增加尿经脯氨酸含量 ;具有 良好的
增加家兔胆汁流量作用 , 能提高小 鼠单核吞
噬细胞功能 。 提示肝脾康胶囊具有抗乙肝病
毒 、修复肝损伤 、抑制肝纤维化进程 、利胆 、增
强机体免疫力等作用 。 这与临床用于治疗慢
性 乙型肝炎 、肝硬化等病的效果是完全一致
的 , 为该药的临床应用提供 了可靠的药理学
实验依据 。
致谢 : 肝脾康胶囊在鸭体 内对鸭 乙 型肝
炎病毒感染的实验 由 中国 医学科 学院 医药生
物技术研究所完成 。
( 1 9 9 9
一
0 8
一
3 0 收稿 )
白头翁体内抗肿瘤作用的实验研究
解放军第四五四 医院 (南京 2 1 0 0 0 2)
江苏省肿瘤 医 院
蔡 鹰 ’
张能方
陆 瑜 梁乘文 余 国祥 谢 瑛
尤寿海
摘 要 以荷 51 80 瘤小鼠及艾 氏腹水 型小 鼠为模 型 , 研究 了 白头 翁注射液 (PW A E ) 的体内抗肿瘤
作用 。 PW A E 有明显 的抗体内移植瘤 和延长荷瘤小鼠存活期作用 , 并且 PW A E 还能 降低荷瘤 小鼠
脾指数 , 升高胸腺指数 , 使之趋 向正常值 。 提示 PW A E 不 仅能抑制体内肿瘤生长 , 还 能提高机体的
免疫能力 。
关健词 白头翁 抗肿瘤作 用 胸腺 指数 脾指数
白头翁为毛莫科植物 P u ls a t illa 。h i n e n -
515 R e g e l
, 已 发现其水 提液 ( PW E ) 、 醇提液
( PA E ) 在 体 外 能 显 著 抑 制 7 7 2 1 、 H e L a 、
MK N
一 4 5 细胞 的生长川 , 笔者对其体 内抗肿
瘤作用进行 了实验研究 。
1 材料
白头翁 : 本院中药房提供 。白头翁水提取
2 次 , 4 层 纱布过滤 , 滤液浓缩 , 加入 95 %酒
精使含醇量达 70 % , 置冰箱过夜 , 取上清液 ,
回收酒 精 , 再配成含醇量 80 %混悬液 , 置 冰
箱过夜 , 取上清液 , 回收酒精和水至干 , 加蒸
馏水 配成 0. 5 9 生药 / m L 溶 液 , 3 号垂熔漏
,
A d r e
s s :
C a i Y in g
,
N o
.
4 5 4 H o
s p ita l o f p L A
,
N a n jin g
蔡 鹰 女 , 32 岁 , 南京中医药大 学中药学硕士研究 生毕业 , 现 在解 放军第 四五 四 医 院工 作 , 任 主管药师 , 从事新药开发质量标准制订研究 工作 , 近年来从事于抗肿瘤 中草药筛选工作 , 发表论文 10 余篇 。
《中草药》19 9 9 年第 3 0 卷第 12 期 . 9 2 9 .