全 文 ：取罐 , 1 , 8一二经基葱酿 (中国药 品生 物制品检定所 ) ;
所 用试剂均为分析纯 ;所 用药材购 自市饮 片厂 。
2 方法 与结果
2
.
1 对溶媒量 、 乙醇浓度 、 提取时间优选 : 以 上 3 项
按三 因素三水平用正交设计安排实验 。 见表 1 。
表 i L , ( 3 3 )正交试验表
一 因素 酒精浓 度 溶媒倍数 提取时间 游离葱酿
试验号 (% ) ( m in ) 含量 ( m g )
1 3 0 10 2 0 20 2 0 6 5
.
8 7
2 3 0 1 2 4 0 3 0 3 0 9 2
.
6 5
3 3 0 1 5 4 0 4 0 4 0 4 5
.
3 1
4 4 0 1 0 4 0 3 0 3 0 3 3
.
4 8
5 4 0 1 2 4 0 4 0 4 0 8 1
.
4 0
6 4 0 1 5 2 0 2 0 2 0 3 0
.
0 6
7 5 0 1 0 4 0 4 0 4 0 9 4
.
2 3
8 5 0 12 2 0 2 0 2 0 9 9
.
6 8
9 5 0 15 4 0 2 0 3 0 1 0 2
。
60
K 2 2 0 3
.
8 5 19 3
.
5 8 19 5
.
6 1
K Z 1 14
.
94 2 7 3
.
7 3 22 8
.
7 3
K 3 2 9 6
.
5 1 1 7 7
.
9 3 2 20
.
9 4
K
1 6 7
.
94 6 4
.
5 3 6 5
.
2 0
K
Z 4 8
.
3 1 9 1
.
2 4 7 6
.
2 4
K s 9 8
.
8 4 5 9
.
3 2 7 3
.
6 5
R 5 0
.
5 3 3 1
.
9 2 1 1
.
0 4
按处 方 比例称取药材各 1 0 0 9 共 9份 , 均提取 3
次 , 方法 为第 一次加人溶媒总 量 的 50 % , 浸泡 24 h
后 提取 ;第二次加人溶媒总 量的 30 % ;第 三次加人
总量 的 2 0% 按实验设计提取 。 合并 3 次提取液 , 减
压浓缩至相对体积质量 1 . 2一 1 . 3 即可 。
2
.
2 含量测定
2
.
2
.
1 测定波长 的选择 : 取 1 , 8一二 经基葱酿适 量 ,
置 10 0 m L 容量瓶 中用 乙醚溶解 , 在水浴上 蒸去 乙
醚 , 加 5 %氢氧化钠 一 2纬氢氧化按混 合碱液 至刻 度 ,
在沸水浴中加热 4 m in , 用水冷却至室温 , 30 m in 后
于波长 7 0 0~ 4 0 0 n m 进行扫描 , 于 5 22 n m 处有最大
吸收 。
2
.
2
.
2 标 准 曲线 的制备 : 取 10 m g l , 8一二 经 基葱
酿 ,精密称定 ,置 10 m L 容量 瓶 中用 乙 醚溶解并稀
释至刻度 。 取 0 . 5 、 1 、 2 、 3 、 4 、 5 、 6 m L 至 2 5 m I J 容量
瓶中 ,在水浴上蒸去 乙醚后按 2 . 2 . 1 项操作 。 回归方
程 C = 2 0 . 2 3 7A一 0 . 0 3 4 1 , r = 0 . 9 9 9 9 。
2
.
2
.
3 提取液的含量测定 :取提取液各 2 9 , 精密称
定 , 水浴蒸 干 , 用抓仿 6 0 m L 溶解 , 过 滤 。 合并滤液
放人分液漏斗中 , 以 5%氢氧化钠一 2 %氢氧化按混合
碱液提取 3 次 ,每次 3 0 m L 。 合并碱液 , 用 20 m L 氛
仿洗涤 ,抓仿弃去 , 碱液 调至 10 m L ,用垂溶漏斗 过
滤 , 滤液 在沸水浴 中加热 4 m in , 用冷水冷却至室温 ,
3 0 m in 后 于 5 2 2 n m 处 比色测 定 , 依据 回 归方程 计
算各份提取液中游离葱酿 的含量 。 见表 1 。
2
.
3 结果 : 以提取液中游 离葱酿 的含量 为指标 , 用
直观分析法计算 。 L 。 ( 3) “ 正交试验结果见表 1 。 由表
可 见最佳提取工艺为 : 以 50 % 乙醇为溶媒 , 溶媒 用
量 为处 方 中生药总 量 的 12 倍 , 提 取 3 次 (4 o 、 20 、 30
m in )
。 对实验影 响最大的因素为 乙醇浓度 , 其次是加
溶媒的倍数 ,最后是提取时间 。
3 讨论
3
.
1 因处方中所提取 的几种 生药均溶于醇 , 且原散
剂是 以黄酒调成糊状后使用 , 故本实验设计以 30 肠
~ 5 0 % 的乙醇为提取溶媒 。
3
.
2 中药复方制剂 因药味多 ,每味药中所含成分 又
较复杂 , 因此很难建立较完善的质量控制标准 。 本文
以制剂 中 1 , 8一二经 基葱醒 的含量 为指标 , 找 出最 佳
的提取工艺 , 方法简便 , 可靠 。
( 1 9 9 8
一
0 8
一
1 4
、收稿 )
H P L C 测定六味地黄丸 (浓缩 ) 中熊果酸的含量
连云港康缘制药有限责任公 司 ( 2 2 2 0 0 1) 冯 燕芹 ` 王振中 俞海荣
六味地黄丸 (浓缩 )收载 于卫 生部药 品标 准第十
一册 ( 1 9 93 年 ) , 标准 中采用薄 层扫描 法对其中主 药
山茱英有效成分熊果酸进行定量 ,但操作繁琐 , 重现
性差 , 我们采用 H P L C 一 E L SD 对制剂 中熊 果酸进 行
含量测定方法 的研 究 。
1 实验方法与结果
冯燕芹 , 女 , 工程师 ,现任江苏连 云港康 缘制药有限责任公司研究所所长 、 连云港市 中药工程 中心主任 。 19 9 0 年毕业于
南京 中医药大学中药系 。 先后在 《药物分析杂志 》 、 《中成药 》 、 《中国药科大学学报 》等发表论文 10 余篇 , 其中有两篇分别被美国和英国《化学文摘 》收载 。 曾获江苏省政府表彰 ,连 云港 市青 年学科带头人 , 主持研制 、 开发的 8 个国家级新药 , 有的被列人
国家星火 和火拒计划 。
《中草药 》 1 9 9 9 年第 3 0 卷第 3 期 1 9 1 ·
1
.
1仪器与试剂 :美 国 AL L TC EH 一 42 6型输液泵 ,
E L S D 50 0 型 检 测器 ;数据工 作 站 (天津先 明科技 开
发 公 司 ) ; 甲醇为色谱 纯 ; 熊果 酸 对照 品 (含 量 为
9 9
.
1写 , 中国药品生物制 品检定 所提供 ) ;六 味地黄
丸 (浓缩丸 , 连云 港康缘制药 有 限公 司出 品 , 批 号为
9 8 0 5 0 5
,
9 8 0 5 0 8
,
9 8 0 5 0 9 )
。
1
.
2 色谱及 检测条件 : 色谱柱 : A L L T IM A 1C 8 5 脚
流 动相 : 甲醇 一水 (8 0 : 2 0) ;流速 : 0 . 5 m L / m i川进样
量 功 拜L ; E L S D 检测 器漂移管温度 : 8 0℃ , 气 流 速 :
1
.
9 8 L /m i n
。
1
`
3 对 照品溶液的制备 :精密称取熊果酸对照 品适
量 , 加 甲醇制成每 l m L 中含 。 , 05 m g 的溶液 ,作为
对照 品溶液 。
1
.
4 供试品溶液 的制备 : 取六 味地黄 丸 (浓缩 )适
量 , 研细 , 精密称定 5 9 , 置烧瓶中 , 加 乙醚 10 m L ,
温水 回流 提取 Z h , 放冷 , 滤过 , 残渣 用 乙 醚洗涤 2
次 ,每次 20 m L ,合并滤液 , 蒸干 , 残渣 加 甲醇溶解并
定量转移至 s m L 量瓶中 , 作为供试品溶液 。
1
.
5 线性范 围 考察 : 精密 吸取 上 述对 照 品 溶液
5
. 。 , 10 , o , 15 . 0 , 20
.
0 拌L , 注人液 泪色谱仪中 , 以峰
面积 的 自然对数为横 坐标 , 以浓度的 自然对数为纵
坐标 , 进行线性 回归 ,其 回归方程为 : Y 一 0 . 2 3 8X 一
3
.
1 1 6
, r 一 0 . 9 9 5 ,线性范 围为 0 , 2 5~ z , 0 m g 。
1
.
6 稳定性试验 : 取熊果酸对 照 品溶液 10 拌L , 每
隔 Z h 进样一 次 , 12 h 内峰面积无明显改变 。
1
.
7 加样回收率 : 精密称取 已知含量的六味地黄丸
(浓缩 )定量加人 熊果 酸对照 品 , 求得熊果酸 的平均
回收率 9 . 97 % 。
1
.
8 样 品测 定 :分别精密吸取对照 品溶液及供试品
溶液 10 牡L , 注人液 相色谱仪中 , 将峰面积及浓度 自
然对数用外标法计算 。 结果熊果酸含量为 O , 0 58 %
( 9 8 5 0 5 0 )
,
0
.
0 3 1 % ( 9 8 0 5 0 8 )
,
0
.
0 2 6写 ( 9 8 0 5 0 9 ) 。
2 讨论
2
.
1 使用 E L S D 检测器 ,漂移管的温度和 载气流速
是实验的两个关键参数 , 通过反复实验 ,确定 了本实
验的参数条件 。
2
.
2 熊果酸成分 紫外 吸 收 为 末端吸 收八m a x ~
20 3
.
6 n m
, 因受试剂影 响 ,使用 紫外检测器分析很难
进行 ;薄层扫 描法定量 , 实验得知该方法稳 定性和重
现性相对较 差 , 且操作 时间长 , 步骤繁琐 。 而 E L SD
检测 , 与紫外 吸收强弱无关 , 试剂在检测 器中全部蒸
发 , 不 干扰检测 , 灵 敏度 、 稳定性及重 现性 均符合含
量测定的要求 , 且方法简便易行 。
参 考 文 献
1 冯埃生 , 等 . 药物分析杂志 , 1 9 96 , 16 ( 6) : 4 14
2 中华 人 民共 和国药典 . 一 部 . 北京 : 化学工业 出版社 ,
1 9 9 5
: 4 4 7
( 1 9 9 8
一
1 0
一
1 2 收稿 )
对 1 9 9 5 版药典黄蔑薄层鉴别法的探讨
南京军 区南京 总医院 ( 2 1 0 0 0 2) 谢虞升 李汉保 宋炳生
黄蔑 中主要成分为黄蔑 甲昔 , 按药典上规定 的
T L C 检识 , 在 日光 和紫外光灯下 , 与对 照 品斑点相
比 , 均不 明显 , 改用文献印报道 的方法 后 , 结 果明显 ,
且操作过程 比药典法略简单 , 建议能否 改用 文献法
作为黄蔑 的薄层 鉴别法 。
1 仪器和试药
仪器 : U V 一 1 紫外分析仪 , 薄层硅胶 G 板 (青岛
海洋化工 厂 ) 。
试药 : 黄蔑 (安徽毫州 ) 、 黄蔑 甲昔 ( 中国药 品生
物制 品检定所 ) ,试剂 为分析纯 。
2 方法和结 果
2
.
1 标准品液制备 :精密称取黄蔑 甲昔 约 2 m g , 置
Z m L 容量瓶 中 ,加 甲醇溶解并定容 至刻度 ,摇匀备
.
1 9 2
.
用 。 浓度 : 1 . 1 5 m g /m L 。
2
.
2 样 品液制备 : a) 药典 法 〔 2〕 : 取黄蔑粉末 3 9 , 精
密 称定 , 加 甲醇 20 m L , 置 水浴 上 加热 回流 l h , 滤
过 , 滤液加 于 已处理好 的 中性 氧化 铝柱 ( 10 0 ~ 12 0
目 , 5 9 , 内径 1 0一 1 5 m m )上 , 用 4 0 % 甲醇液 1 0 0 m L
洗脱 , 收集洗脱液 , 置水浴上蒸干 。 残渣 加水 30 m L
使溶解 , 用 水饱 和的 正丁醇 提取 2 次 , 每次 20 m L ,
合 并正 丁醇液 , 用水洗涤 2 次 , 每 次 20 m L , 弃去水
液 , 正丁醇液置水浴上蒸干 , 残渣加 甲醇溶解 ,定容
2 m L
。
b )文献法 : 取黄蔑 粉末 3 9 ,精密称 定 , 加 甲醇
50 m L
, 回流提取 2 次 ,每次提取 l h ,滤 过 ,合并滤
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