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o即da l is 担n h s u o T ub e e r u lt iv a t in o Pla n t re n e w a la n a t om y
牵牛子及其伪品的可溶性蛋白质电泳鉴别
河北省职工医学院中医系 (保定 0 7 1 0 0 0)
吉林省长春中医学院附属药厂
马晓莉 缺
王 晶
摘 要 对牵牛子及其伪品进行了可溶性蛋白质电泳鉴别 ,同时实验比较了两种染色剂考马斯亮
蓝 R 一 2 50 和 G 一 250 的染色效果 。
关键词 牵牛子 伪品 电泳鉴别
牵牛子是常用中药 ,药典收载的正品为
旋 花科植 物裂 叶牵牛 尸ha br it : in l ( L )
C h o i s y 及圆叶牵牛 P . p u rp u er a ( L · ) V o i g t
的干燥成熟种子〔 , , 。 由于 同科某些植物的种
子性状与其相似 , 市场上常有同科其他植物
的种子误充牵牛子销售 。我们通过市场调查 ,
采集标本 , 用连续性非解离聚丙烯酞胺凝胶
电泳技术 ,对牵牛子及其伪品进行了分析 ,所
得蛋白电泳图谱有显著差异 , 可作为鉴别依
据 。 同时比较了两种蛋 白质染色剂考马斯亮
蓝 R 一 25 0 和 G 一 25 0 的染色较果 。
1 实验材料 、 仪器及药品
1
.
1 实验材料 : 裂叶牵牛 尸h a br i t i s n i l ( I J . )
C h o i s y 的种子 ( 1 9 9 6 年 1 0 月采于 本院药
园 ) 。
圆叶牵牛 尸 . P u rP u er a ( L . ) V io gt 的种
子 ( 1 9 9 6 年 10 月采于本院药园 ) 。
田旋 花 oC n v o l v u a 二 e n s i: L . 的种 子
( 1 9 9 6年 7 月采于本院校园 ) 。
大 花 牵 牛 P ha br it : iL m b at a 的 种 子
( 1 9 9 6 年 1 0 月采于保定市区 ) 。
范菜 IP o m o e a a q u a t i c a F o r s k . 的种子
(购于保定市种子公司 ) 。
以上药材由作者采集 、 鉴定 。
1
.
2 仪器 : D Y 一 74 型电泳仪 (汕头市广播仪
器厂 ) , 8 0一 2 型离心机 (国华仪器 ) , 圆盘电泳
槽 (北京市六一仪器厂 ) 。
1
.
3 药品 : 丙烯酸胺为化学纯 ,双丙烯酞胺
为进 口原装 ,四甲基乙二胺为生化试剂 , 考马
斯亮蓝 R 一 25 0 和 G 一 2 50 为进 口分装 ,其余药
品均为分析纯 。
2 实验方法
2
.
1 试剂的配制及凝胶的制备见文献闭 , 凝
胶浓度为 6 . 3 % 。 考马斯亮蓝 G 一 250 染色液
的配法 : 取考马斯亮蓝 G 一 25 0 10 0 m g 、 浓磷
酸 1 0 m I J 、 无水乙醇 45 m L ,加水溶解 ,烯释
至 一 1 0 0 0 m I J 。
2
.
2 样品液的制备 : 取实验材料 0 . 5 9 ,加电
极缓冲液 5 m L 研磨成匀浆 , 转移至离心管
中 , 3 o o o r /m i n 离心 1 5 m i n , 取上清液 0 . 5
m L 加入 0 . 05 %澳酚蓝示踪指示剂 1一 2 滴 ,
混匀 ,备用 。
2
.
3 电泳 : 调节电流按 1 m A /管 进行电泳 ,
Z m in 后 ,按 3 . s m A /管 进行电泳 ,待示踪指
示剂行至距末端 0 . 5 c m 时 ,关闭电源 , 全程
约 4 0 m i n 。
2
.
4 染色 : 考马斯亮蓝 R 一 2 50 染色法 : 将胶
条置固定液中固定 10 m in ,再用洗脱液反复
` A d d r e s s : y
a 不i a o li , eD p a r t m e n t o f T r a d i t i o n a l C h in e s e M e d i e in e , H e b e i M e d i e a l C o l l e g e o f C o n t in u in g Ed u e a t i o n ,
b a o d i n g
. _
, 马瞬圣叹, 丸理堂学大 ,讲师 ,从事虫药药剂专业的教学 、 科研及中药电泳鉴别法的科研工作 。 曾在《中药材 》 、 《基层中药朵志 》 、 《 例北甲医 》等刊物上发表专业论文数篇 。
.
4 1 2
.
洗脱 ,至背景清晰为止 。 考马斯亮蓝 G 一 25 0
染色法 :将胶条置染色液中 ,室温条件下染色
3 0 m i n 即得 。
3 结果与讨论
3
.
1 牵牛子及其伪品的蛋白电泳 图谱 ( 图
l) 各不相同 ,有显著差别 ,可作为鉴别依据 。
我们按颜色的深浅将谱带分为 2 级 ,色深者
为 I 级 ,色浅者为 l 级 。 同种实验材料在相同
条件下 ,分别用两种染色剂染色 , 所得电泳图
谱 , 圆叶牵牛相同 , 其它实验材料略有差异
(图 1 ) ,用考马斯亮蓝 G 一 25 0 染色时 , 一些细
带 、 弱带不能为肉眼所见 , 没有考马斯亮蓝
R
一
2 5 0 效果好 , 且用 G 一 25 0 染色谱带颜色均
比 R 一 2 5 0浅 。 但用 G 一 2 5 0和 R 一 2 5 0一样 , 所
. 1级带
。 U级带
图 1 牵牛及其伪品的蛋白电泳图谱
1
、
1
’ 一圆叶牵牛子 2 、 2 ’ 一裂叶牵牛子 3 、 3 ’ 一摧菜子
4
、
4,
一田旋花子 5 、 5 ’ 一大花牵牛子 1~ 5一用考马斯
亮蓝 R一 2 50 染色所得图谱 1 ’ 一 5 ’ 一用考马斯亮蓝
G
一
25 。 染色所得图谱
得电泳图谱都能反映出不同材料的特征谱
带 , 可以做为鉴别依据 。
3
.
2 近年来报道的蛋白质电泳鉴别法中 ,均
用考马斯亮蓝 R 一 25 0 为染色剂 ,该染色剂的
特点是灵敏度高 , 所得电泳谱带清晰 ,科研中
常用 〔3〕 , 但存在染色 、 脱色操作繁琐 , 时间长
等缺点 。 而考马斯亮蓝 G 一 25 0 灵敏度低 ,但
具有操作简便 ,时间短等优点 ,被广泛用于学
校实验教学 。 本实验结果表明 ,考马斯亮蓝
G
一
25 0 可以应用于生药的电泳鉴别 。
3
.
3 已报道的电泳鉴别法中 ,多选用解离型
非连续性聚丙烯酞胺凝胶电泳法 , 不仅配胶
繁琐 , 需制备分离胶和浓缩胶 ,而且电泳时间
长 ,约需 3 h一 4 h 。 本实验采用连续性非解离
聚丙烯酸胺凝胶 电泳法 , 与前法比较有以下
优点 : l) 配胶简便 , 只需制备分离胶 ; 2) 电泳
时间短 ,约需 4 0 m i n 。
我们通过 5 次重复试验 ,重现性 、 稳定性
良好 , 结果可靠 , 可做为牵牛子及其伪品的鉴
别依据 。
参 考 文 献
1 中华人 民共和国卫生部药典委员会 . 中国药典 .
部 . 北京 : 人民卫生出版社 , 19 95 : 12 8
2 夏 雷 ,等 . 中国中药杂志 , 19 90 ; 1 5 ( 7 ) : 1 1
3 袁晓华 ,等主编 . 植物生理生化实验 . 北京 : 高等教育
出版社 , 1 9 8 3 : 24 3
( 1 9 9 7
一
0 3
一
1 7 收稿 )
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《中草药》杂志编辑部
《中草药》 19 9 8 年第 29 卷第 6 期 一 4 1 3 -