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Studies on the Induction of Calli and Cell Culture of Rab dosia rubescens

冬凌草愈伤组织诱导及细胞培养的研究



全 文 :.9 3 8
. 中草药 C hi n es eT r a d i tio na la nd H r e ba l Dr ugs 20 0 0 年第 3 2卷第 1 2期
si ko kia n“ m F r a n e h
·
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;裂 片 5,具 不规则 的粗
锯 齿 至 细 的 啮 状 锯 齿 的 种 群 为 灯 台 莲 A .
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.
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H a dn 一M az t · ; 而裂片 7 ,边缘具粗锯齿或细牙齿 者
定为 七叶 灯 台链 A . : i k o k i a n u m F r a n e h . e t S a v .
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·
he ” yr “ ” “ m (E gn l
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) .H iL
。 我们在对浙江省天南
星族药用资源调查时 , 发现此种植物的叶枚数 、 叶裂
片的数 目 、 形状 、 大 小和 叶缘状态 均变 异较 大 , 叶
1一 2 ,裂片 3 , 5 , 7 ,许多植株 2 枚叶的分裂情况也不
同 , 裂片数分别为 3 和 5 或 5 和 7 , 裂片卵形 、 卵状
长圆形或长 圆形 ,有时侧裂片明显耳状 ,边缘有的仅
中上部具细锯齿 , 鸟足状 7 裂叶有的全缘 , 裂片大小
相差 4一 5 倍 , 很难划 清这些变种 间的界限 , 由此 可
见 ,裂片数和叶缘形状在本种植物似乎处于变异中 ,
尚未分化到足以成为划分变种依据 的程度 。 我们对
这 3个变种新鲜块茎 的过氧化物酶 、 醋酶和蛋白质
进行了电泳分析 , 发现叶枚数 、 裂 片数 、 叶缘形状 和
雌雄状态对分析结果 的影 响不大 ,这种差异小于不
同产地对其结果的影响 。 H ior y o s hi 等对灯台莲花粉
粒扫描 电镜观察结果表 明 : 其原种和变种间的花粉
粒形态特征无区别 〔1 2 〕 。 本实验观察和比较了这 3 变
种不 同产地 的新鲜标本 叶的显微特征 , 发现它们的
显微特征变异较大 ,但各变种间无 明显区别 。 因此 ,
我们认 为该种上述 3 个变种宜予归并 。
参 考 文 献
云南植物研究 , 1 9 8 6 , 8 ( 4 ) : 3 6 3
中国植物志 . 第十三卷第二分册 . 北京 : 科学 出版社 ,
李 恒
l 0
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l 2
19 7 9 : 10 ( )
李 恒 , 肖 溶 , 曾孝镰 植物分类学 报 , 1 9 7 7 . 1 5 ( 2) : 87
李 恒 . 云南植物研究 , 1 9 92 , (增 刊 ) : 7
胡世林 . 药 学学报 , 1 95 4 , 1 9 ( 9 ) : 7 ] 2
刘晓龙 ,郭新弧 . 云南植物研究 , 1 9 8 6 , 8 ( 2) : 2 23
浙 江药用植物 志编写组 浙江药用植 物志 . 下 册 . 杭州 : 浙江
科技 出版 社 , 19 80 : 1 4 7 5
薛祥 骥 见林泉 主编 . 浙江省 植物志 第七卷 . 杭州 : 浙江科
技 出版社 , 1 9 9 3 : 3 2 7
D
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h lg e r n R M T
,
C l i f f o
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.
T h e m o n o e o t y l e d o n s
:
A e o m p a r
-
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s t u d y
.
L o n d o n
:
A e a d e m i e P r e
s s
I n e I T D
, 19 8 1 : 9 0
F r e n e h J C
,
f o n l i s o n P B
.
A m J B o t
, 1 9 8 3 , 7 0 ( 5 )
: 7 5 6
G e n u a J M
,
H i l l
s o n C T
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A n n B o t
, 19 8 5 , 5 6 : 3 5 1
H i
r o y o s h i ( )
,
M u
r a t a J
. ’
I

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.
S e ; R
e p T o h o k u U n i
v
F o u r t h S
e r
( B i o l )
, 19 8 3
,
3 8 ( 3 )
: 2 1 9
( 1 9 9 9

0 9

1 3 0 收稿 )
冬凌草愈伤组织诱导及细胞培养的研究
河南师范大学生命科学学院 (新乡 4 5 3 0 0 2)
河南农业大学农学系
李景原 牵 王 太 霞 杨相甫 张晋像
李贺敏
摘 要 用组织培养 、 细胞悬浮培养和单细胞平板培养技术 , 诱导 出冬凌草愈伤组织 ,并探讨了细胞悬浮 培养时
间 、 培养方法和接种密度对冬凌草单细胞平板培养植板率的影响 。 结果表明 :从冬凌草叶和嫩茎诱导愈伤组织 , 以
M S 十 2 , 4一 D 1 m g l/ J + N A A .0 5 m g / L 培养基较好 , 愈伤组织诱导率高达 96 . 80 % 。 用普通单细胞平板培养法培养
冬凌草单细胞的植板率很低 , 而 以悬浮培养 15 ~ 18 d 的单细胞为材料 , 接种密度为 5 x l 护 个 /毫升时 ,进行条件培
养和看护培养 , 植板率达 21 . 63 % 。 本研究结果可供利用细胞培养技术筛选冬凌草高产冬凌草素细胞株时参考 。
关键词 冬凌草 愈伤组织 细胞悬浮培养 单细胞平板培养
S t u d i e s o n t h e I n d u c t i o n o f C a l l i a n d C e l l C u l t u r e o f R a bd o s i a ur b
e s e e n s
C o l l
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,
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e n a n N o r m a l U n i v e r s it y ( X i n x ia n g 4 5 3 0 0 2 ) L i J in g y u a n
,
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D e p a r t m
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,
H
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l U n iv e r s i t y L i H e m in
A b s t r a e t C o n d i t i o n s f o r e e l l e u l t u r e o f R a b d o s i a r u b e s c e n s ( H e m s l ) H a r a
.
w e r e s t u d i e d w it h t h e
a im t o d e v e l o p a n e w s o u r e e o f r u b e s e e n s i n f o r a n t i t u m o r t h e r a p y
.
C a l l i w e r e i n d u e e d f r o m t h e l e a f a n d
s t e m o f R
.
ur b e s c e n s a n d e u l t u r e d e i t h e r b y e e l l s u s P e n s io n e u l t u r e o r u n i e e l l u l a r P l a t e e u l t u r e
.
F a e t o r s a f
-
f e e t i n g p l a t e e f f i e i e n e y
, s u e h a s e e l l s u s p e n s i o n e u l t u r e t im e
,
w a y s o f p l a t i n g a n d e e l l d e n s i t y w e r e s t u d i e d
.
C u l t u r e m e d i u m M S e o n t a i n i n g l
: 0
.
5 r a t i o o f Z
,
4

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f o r t h e i n d u e t i o n o f e a l l i w h i e h a t t a i n e d a n i n d u e t i o n r a t e w e l l o v e r 9 6
·
8 %
·
H i g h p l a t i n g e f f i e i e n e y e o u ld b e
o b t a i n e d b y p l a t i n g a t a d e n s i t y o f 5 x 1 0
3 e e l l s /m L w i t h m o n o e e l l s s e p a r a t e d f r o m 1 5

1 8 d e e l l
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.
R e s u l t o f
A d d r e
s s : 1 1 J i
n g y u a n , C o l l
李景原 男 , 1 9 8 8 年毕业于南
f L i f e S e i e n e e
s ,
H e n a n N o r m a l U n i v e r s i t y
,
X i l X l a fl g大学植物学专业 , 获硕士学位 。 河南省植物学会副理 事长 , 主要从事植 物资源研究 与开发的工作 ,发表论文 20 多篇 。 现于西北大学攻读博士 。
中草药 C hi n es eT a rd i tio na l a nd H r e ba l Du r gs 20 0 0 年第 1 3卷第 1 2期 · 9 9 3·
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r es e n ts tu d y
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m a y p ro v id e so m r e efr e e n e efo r t hr es e e e ni n go f hi ghy i eld e el l s ta ri n fo
r t h ep ro d u e tio n
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o si a ru bc se e sn( H em sl )H a a r
.
ea l l u s e el l
su sp e nsi o n eu l tu r eu ni e el l u l a rp l a t e
冬凌 草 尺a bd o si a ru bes e e n: ( H em sl H )a a r· 又
称碎 米梗 、 冰凌草和冰凌花 , 是唇形科植物 。 1 9 7 7 年
作为一种抗菌消炎 、 防癌抗癌的药用植物资源 , 收人
《中华人 民共和国药典 )( 一部 l)[ 〕。 近年 的植 物化学
研究证明 ,冬凌草 中所含 的冬凌草 甲素和冬凌草 乙
素具有防癌抗癌作用川 。 冬凌草提取物可明显对抗
环磷酞胺 的致突变作用 。 本实验以我国冬凌草主产
地之一 (河南济源 )生长的冬凌草为材料 ,对其进行
组织和细胞培养 ,现将实验结果报道如下 。
1 材料和方法
1
.
1 愈伤组织的诱导和培养 : 取冬凌草叶和嫩茎 ,
用肥皂水和 自来水洗净后 ,吸干水分 , 先用 70 % 酒
精灭菌 2 m in ,再用 0 . 1% 升汞灭菌 10 m in ,无菌蒸
馏水冲洗 8 次 。 将 叶剪成边长约 1 Cm 的小块 ,将嫩
茎剪成长约 I Cm 的切段 , 分别接种到 附加有 不同
植物激素 的 M S , W hi et 两种培 养基上 。 在 ( 23 士
2) C
, 光照周期 1 2 h / d , 光强为 1 5 0 lx 条件下培
养 ,筛选出适合诱导冬凌草愈伤组织 的培养基和植
物激素配比 。 诱导出的冬凌草愈伤组织每 3 周转接
1 次继续培养 。
1
.
2 细胞悬浮培养 : 以生长旺盛 、 质地疏松 的愈伤
组织为材料进行细胞悬浮培养 。 在 25 0 m L 三角瓶
中分别加人 1 0 m L M S 液体培养基 ,接种 2 9 鲜愈
伤组织 , 在 1 20 r /m in 恒温摇床上培养 ,培养温度为
(2 3士 2 ) C 。 培养 30 d 后 ,收集并称取三角瓶的培
养物 ,每瓶培养基 中增加的细胞鲜重 ( F W )表示 细
胞生长速度 。
1
.
3 条件培养基的配制 : 配制 1 . 4%琼脂 M S + 2 , 4 -
D 1 m g / L + N A A 0
.
5 m g / L 培养基 ,在 1 2 1 ` C 下灭
菌 15 m in ,冷却至 35 C备用 。 在无菌条件下取培养
15 d 的冬凌草细胞悬浮培养物 ,离心 10 m in ,取其上
清液置于无菌瓶中备用 。 取无细胞上清液 1 份与 1 份
上述备用的 M S 培养基充分混合 , 然后分装成 5 组 ,
即 C M I ~ C M : 。 其 中 C M I 不加热 , C M Z ~ C M : 分别
在 5 0 cC 、 8 0 ` C 、 1 0 0 ℃和 1 2 1 C下加热 1 0 m i n 。
1
.
4 单细胞平板培养的制作与培养条件 : 将细胞悬
浮培养物用双层不锈钢网过滤 。 收集过滤液并用血
球计数器测量细胞密度 ,最终把细胞密度调整到每
毫升 5 x 10 3个 。 将 1 份上述单细胞悬浮培养液与 4
份 35 ℃ 的固体条件培养基充分混合均匀 , 倒人无
菌培养皿 中 , 使培养基 的厚度 3一 s m m , 盖上培养
皿的上盖并用蜡膜密封 。 置于 (2 3士 2 ) C ,光照周
期 1 2 h / d , 光强为 1 5 0 0 l x 条件下培养 。
1
.
5 看护培养的制作与培养条件 : 配制 1 . 4 肠琼脂
M S + 2
,
4

D l m g / I
J
+ N A A O
.
s m g / I
J 培养基 , 在
1 21 ℃下灭菌 15 m in ,冷却至 35 C备用 。 在无菌条件
下取培养 21 d 的冬凌草细胞悬浮培养物 1 份 , 与 1
份上述培养基充分混合均匀 ,倒人无菌培养皿 中 。 待
培养基冷却凝固后 ,再在培养基上放一张与培养皿直
径相同的圆形无菌滤纸 。 在滤纸上接种已调整好细胞
密度冬凌草细胞悬浮培养液 。 置于 ( 23 士 2) C , 光照
周期 1 2 h / d ,光强为 1 5 0 0 l x 条件下培养 。
1
.
6 实验参数 : 愈伤组织诱导率为产生愈伤组织的
外植体数 占全部接种的外植体数的百分 比 。 植板率
( P E ) 为培养 4 周后每个培养皿中新形成的细胞团数
占接种的细胞数的百分 比 。 细胞悬浮培养时 ,细胞生
长速度以培养 3 O d 后每瓶培养基中增加的细胞鲜重
( F W )表示 。 每个实验结果重复 3 次 , 取其平均数 。
1
.
7 冬凌草素 的定性测定 : 以 冬凌草 甲素 , 冬凌草
乙 素作对 照 , 用 硅胶 G 硬 板薄层 层析 , 氯仿一丙酮
( 7
:
3) 为展开剂 ,碘为显色剂 ,检测愈伤组织乙醚提
取液 中是否有冬凌草素 。
2 实验结果
2
.
1 愈伤组织 的诱导 : 在所实验 的 M S , W hi t e 两
种培养基上均诱导出愈伤组织 ,但不 同培养基 和不
同植物激素组合愈伤组织诱导率有显 著差异 ,所产
生 的愈伤组织生长状况也不相同 (表 1 ) 。 结果表明 :
M S + 2
,
4

D 1 m g I/
J
+ N A A .0 s m g / L 培养基上愈
伤组织诱导率 最高 , 且愈伤 组织质地疏 松 , 生长较
快 ,利于以后细胞悬浮培养 。所得愈伤组织经薄层层
析法定性检测含有冬凌草甲素和冬凌草 乙素 。
表 1 不 同培养基和 不同植物激素组合愈伤组织
诱导率 的影响
培养基 植物激素组合 ( m g / L ) 诱导率 ( % ) 愈伤组织生长状 况
M S Z
, 4一 D Z+ N A A 0
.
5 6 9
.
5 1 质地 疏松 ,生长较快
2
, 4一 D l + N A A 0
.
5 96
.
80 质地疏松 ,生长较快
2
, 4一 D o
.
5+ N A A o
.
5 58
.
65 质地疏密 ,生长较慢
W h i t e Z
, 4一 D Z+ N A A 0
.
5 5 6
.
3 2 质地疏密 ,生长较慢
2
, 4一 D l + N A八 。 . 5 9 6 . 8` 质地疏密 ,生长较慢
2
, 4 一D 0
.
5 + N A A O
.
5 58
.
6。 质地疏密 ,生长较慢
.4 90
. 中草药 C hi ns e e T rad i ti o n al n ad H e rb al D ru g s 20 0 0 年第 3 1卷第 2 1期
2
.
2细胞悬浮培养 :本 实验 比较 了 M S, W hi t e 两
种培养基和不同植物激素组合对冬凌草细胞悬浮培
养生长速度的影响 , 细胞生长速度 以培养 30 d 后每
瓶培养基 中增加 的细胞鲜重 ( FW )表示 。 结果见表
2

表 2 不 同培养基和不 同植物激素组合对细胞
悬浮培养生长速度的影响
液体 培养基 植物激素组合
( m g / L )
细胞生长量
( F W g /瓶 )
n50乙ǔh59曰亡J尸乃
.…月任亡nl冲臼」
59划00山尸乃只01八é.…nJSJ区9é,划W h i t e
2
,
4一 D 3 + K l

0
.
1
2
, 4一 D Z+ K T O
`
1
2
. 4 一D I + K T 0
.
1
2
, 4 一 D 0
.
5 + K T 0
.
1
2
, 4一D 0
.
1 + K T 0
.
1
2
, 4一 D 3 + K T 0 1
2
, 4一 D Z + K T 0
.
1
2
, 4一 D l + K T 0
.
1
2
, 4一 D 0
.
5 + K T 0
.
1
2 , 4一 D 0
.
1+ K T 0
.
1
2
.
3 温度对条件培养基活性的影响 : 本实验对同源
的无细胞培养液制备的条件培养基在不同温度下加
热处理 ,制备一系列条件培养基 , 比较 了各条件培养
基上单细胞培养的植板率 , 结果见表 3 。
表 3 温度对条件培养基 活性的影响
条件培养 基
植板率 (% ) 1 6 。 8 2
C M 3
0
.
20 0 1 2 0
.
0 2
从表 3 可看 出 ,在无菌条件下制备的 ,不经加热
处理的条件培养 基 ( C M : ) 上 , 细胞平板培养的植板
率最高 , 达 1 6 . 82 写 。 在其它几种加热处理的条件培
养基上 ,随处理温度的升高 ,植板率逐渐降低 。 这一
实验结果表明 , 高温能显著地破坏细胞悬 浮培养液
中的生长因子 , 降低条件培养基 的活性 。
2
.
4 细胞悬浮培养时间对植板率的影响 : 在条件培
养基 ( C M , )和看护培养情况下 , 比较了用悬浮培养
5一 3 o d 的冬凌草细胞作材料的植板率 。 结果见表
4

表 4 细胞悬浮培养时间对植板率的影响
细胞悬浮培养时间 ( d ) 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 0
条件 培养植板率 (写 ) 3 . 5 1 5 . 8 2 20 . 5 5 16 . 8 2 1 2 . 0 5 1 0 , 6 2
看 护培养植板率 (% ) 3 . 8 3 5 , 7 5 2 1 . 6 3 1 9 . 0 1 1 6 . 5 6 1 1 , 8 5
实验结果表明 ,用细胞悬浮培养 10 d 以内的单
细胞作材料 ,植板率很低 。 用细胞悬浮培养 15 一 20
d 的单细胞作材料 , 植板率较高 。 用细胞悬 浮培养
30 d 的单细胞作材料 , 植板率也很低 。
2
.
5 接 种 密度 对植 板率 的影 响 : 在条 件 培 养基
( C M
I
)和看护培 养情况下 , 比较 了不同接种密度对
冬凌草单细胞平板培养植板率的影响 。 结果见表 5 。
表 5 接种密度对植板率的影响
细胞密度 ( 又 10 3 个 /毫升 ) 1 2 3 4 5
条件培养植板率 ( % ) 3 . 72 6 . 0 4 1 0 . 5 1 1 6 . 2 8 1 8 . 0 0
看护培养植板率 ( % ) 4 . 8 1 6 . 7 5 1 1 . 6 3 16 . 0 6 1 7 . 2 5
由表 5 可看 出 ,在条件培养基 ( C M ; ) 和看护培
养情况下 , 冬凌草单细胞平 板培养植板率 随接种细
胞密度的增大而升高 。
3 讨论与分析
3
.
1 关于愈伤组织诱导的分析 : 诱导出愈伤组织 ,
筛选最适合细胞生长的培养基和培养方法是利用植
物细胞培养技术生产有用次生代谢产物的基础 。 本
研究 用 M S , W hi et 两种培养基附加多种植物激素
组合均能诱导冬凌草产生愈伤组织 , 但在不同培养
基上诱 导出愈伤组织 的质量和生 长速度有较大差
别 , 其中以 M S + 2 , 4 一D l m g / L + N A A O . s m g / L
培养基愈伤组织诱导率高达 96 . 80 纬 。 在这种培养
基上产生的愈伤组织生长速度快 , 质地疏松 ,利于作
细胞悬浮培养的材料 。 实验结果还表明 ,无论是诱导
冬凌草愈伤组织还是进行细胞悬浮培养 , 在培养基
中都需要加人适量的植物生长调节物质 2 , 4一 D , 适
宜的浓度在 1 . 0一 2 . 0 m g / L 之间 , 2 , 4 一D 的浓度过
高或过低都会降低愈伤组织的诱导率和生长速度 。
3
.
2 关于单细胞平板培养的分析 : 植物单细胞平板
培养技术 即单细胞克隆技术是筛选高产细胞系的基
础 。 然而 ,这项技术确实还存在一些问题 , 正如该技
术 的创 始人 贝格 曼 ( B er g m a n n) 指 出的那样 : “ 在单
细胞平板培养植物细胞 时 , 诱导细胞分裂 和集落形
成方面 ,通常存在重大问题 ’心〕 。 本实验结果也表明 ,
在冬凌草单细胞平板培养中 ,细胞悬浮培养时间 、 培
养方式 和接 种细胞密度 等诸多 因子都能影 响植板
率 。
实验结果证明 ,影 响植物单细胞平板培养植板
率的关键因子之一是培养基 中是否有足够的对细胞
生长和分裂有显著促 进作用的活性成分即条件 因
子 。用经高温灭菌的条件培养基培养冬凌草单细胞 ,
其植板率很低 。 相反 , 无论是看护培养 , 还是用不经
高温处理的条件 培养基培养都能获得较 高的植板
率 。植板率之所以 随灭菌温度的提高而降低 ,是因为
条件培养基 中条件因子 随高温灭菌而失活 。
许多文献报道过细胞悬浮培养时间对植板率有
重要影响 。 本实验结果证 明 , 以悬浮培养不足 10 d
的冬凌草单细胞作材料进行单细胞平板培养 ,植板
率很低 。 用培养 15 一 20 d 的冬凌草单细胞作材料进
行单细胞平板培养 ,植板率显著提高 。
中草药 C hi n e seT a rdi tio na l a nHd r e ba l Dru g s20 0 0年第 3 1卷第 1 2期 . 9 4 1·
接种细胞密度是影响植物单细胞平板培养植板
率的又一重要 因素 。从实验结果看 ,植板率随接种细
胞密度的增大而提高 。 但是 ,接种细胞密度越大 , 细
胞之间的距离越小 , 细胞分裂不久 , 形成 的克隆就彼
此长合在一起 , 这就 给分离起源于单细胞的无性 系
带来很大困难 。 因此 , 以筛选高产细胞株为 目的设计
植物单细胞平板培养时 ,不能为 了提高植板率盲 目
增大接种密度 , 而应在保证适度植板率的前提下 , 改
善其它培养条件 ,尽可能降低接种细胞密度 , 以便分
离起源于单细胞克隆 。
参 考 文 献
1 中华 人 民共 和 国卫生部药典委 员会 . 中华人民共和国药典 (一
部 ) . 北京 : 人 民卫 生出版社 , 19 78 : 1 86
2 王太霞 , 李景原 . 植物杂志 , 19 97 , 3 : 9
3 孙敬 三 , 桂耀林 , 植物 细胞工 程实验技术 . 北 京 : 科学 出版社 ,
1 9 9 5
: 1 5 0
( 1 9 9 9

1 0

1 2 收稿 )
灵芝菌发酵培养基的优化及灵芝胞外多糖的分离纯化
南京理工大学化工学院 ( 2 1 0 0 94) 孙 东平 ’ 潘 锋 史 小丽 杨树林
摘 要 用 正交法研究了不同条件对灵芝菌生长 影响 , 从中选 出了灵芝菌液体深层发酵的优化培养基 :葡萄糖
3
.
6%
, 蛋白陈 0 . 4 % , p H 6 . 0 , 酵母膏 0 . 2% , K H Z P O ; o , z % , M g S O ; · 7H ZO 0 . 0 5 % , V it B : 0 . 0 0 5% , 每升发酵液产
干菌丝体 1 5 . 6 9 ,粗多糖 0 . 72 9 。 经葡聚糖凝胶层析对灵芝胞外多糖进行了分离纯化 ,共有 5 个组分 , 并用红外光
谱 、紫外光谱 , 气相色谱等手段进一步分析了灵芝胞外多糖的组成 ,结果表明灵芝胞外多糖系由甘露糖 、果糖 、 葡萄
糖通过糖 各D 一 糖昔键构成 。
关键词 灵芝 发酵 多糖 分离纯化
S e l e c t i o n o f O P t im a l M
e d i u m a n d E x t r a e t i o n a n d P u r i f i e a t i o n o f
G a n o de mr
a l u c id u m E x t r a e e l l u l a r P o l y s a e e h a r i d e
C h
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a n d P u r i f i e a t i o n
灵芝是我国古代劳动人民用之已久的一类珍贵
的药用真菌 , 具有补中 、 固肾 、 补肺 、 止血的功用 ,对
多种慢性病有一定疗效 。 灵芝多糖对肉瘤 51 8 。 、 肿瘤
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, 埃利希氏腹水瘤及腺瘤具有 明显 的抑制活
性 ,并能迅速恢复和提高机体免疫能力 ,治疗爱滋病
的报道更引人瞩 目 ,掀起 了一场 “ 灵芝研究热 ” 川 。
灵芝及其多糖广泛应用在医药 、 食品等领域 ,市
场需求量与 日俱增 ,但 目前灵芝多糖的生产几乎都
是从子实体中提取 ,灵芝野生资源缺乏 ,人工栽培的
周期长 (2 一 3 个月 以上 ) , 占地面积大 , 又受季节 限
制 ,从而影 响了灵芝的充分利用 , 而利用深层培养技
术 生产灵芝 ,周期短 (7 ~ 10 d ) 、 成本低 、 产量大 , 具
有工业化的生产前景 ,选取合适的培养基 、 适当的分
离纯化方法 , 提取灵芝 多糖是本研究的最终 目的 。我
, _
.吞d少e s胜 S u n 阮 n即 i n g , C g l l e g e o f C h e m i e a l E n ig n e e r 、 n g , N a n ji n g U n i v e r s i t y o f T e e h n o l o g y , N a n ji n g
_ 孙东半 男 , 19 7 。 年生 , 江苏灌云人 , 现为南京理工大学化工学 院博士研究生 ,讲师 , 主要从事糖化学及微生物生理学术论文多篇 , 参与 国家 自然科学基金等多项科研 工作 。
、 生化研究工 作 , 发表