全 文 ：·药剂与工艺·
液相色谱质谱联用 (LC-MS /MS)在天然化学成分分析中的应用
Ⅰ . 音喷离子化 ( SSI)与大气压化学离子化 ( APCI)对利血平的比较分析
天津药物研究院 ,天津药代与临床药理研究室 ( 300193)
刘昌孝 　李全胜　魏广力　高连用　葛惠清　原田芳文* *
摘　要　报道应用 LC-MS /M S,采用音喷离子化 ( SSI)与大气压化学离子化 ( APCI)对利血平的比较分析 ,应用这
两种离子化方法比较所得的利血平的标准质谱 ( M S)和二级质谱 ( M S2 ) ,实验证明两种离子化方法所得结果完全一
致。
关键词　音喷离子化　大气压化学离子化　利血平　液相色谱质谱联用技术
Application of LC-MS in the Analysis of Natural Products
Ⅰ . Comparative Study for the Aanlysis of Reserpine by Sonic Spray
Ionization and Atmospheric Pressure Chemical Ionization
　　 Tianjin Institute o f Pharmaceutica l Resea rch ( Tianjin 300193 )　 Liu Changx iao , Li Quansheng , Wei Guangli, Gao
Lianyong and Ge Huiqiang
　　 Hitachi Ltd. , Kokubunji, Tokyo , 185-8601, Japan.　 Yoshifumi Harada
Abstract　　 The use o f sonic spray ionization ( SSI) and atmospheric pressure chemical ionization
( APCI) methods in liquid chromatog raphy /mass spect rometry ( LC-M S /M S) w as compa red fo r the analy-
sis of reserpine. The analy tical resul ts show ed tha t the standa rd M S and the second-o rder M S ( M S2) of re-
serpine w ere completely identical in LC-M S /M S analysis using the tw o ionization methods.
Key words　　 sonic spray ioniza tion ( SSI)　 atmospheric pressure chemical ionization ( APCI)　 reser-
pine　 liquid chromato graphy-mass spect rometry ( LC-M S)
　　利血平 ( reserpine)是存在于萝芙木 Rauwol f ia
v ert icillata ( Lour. ) Bail.、云南萝芙木 R . yunnanen-
sis Tsiang和鸡骨常山 Alstonia yunnanensis Diels.
根中生物碱 ,具有降压和安定作用 [1 ]。在药理模型中
这一生物碱可用作实验模型的工具药 ,在 LC-M S
仪器检测中也用来实验仪器的性能和参数的检验。
本文报告应用 LC-M S /M S,采用音喷离子化 ( SSI)
与大气压化学离子化 ( APCI)对利血平的比较分析 ,
以比较两种离子化方式所得结果的一致性。为今后
天然产物化学成分的研究中推广应用液相色谱-质
谱联用技术起点作用。
1　材料和方法
仪器:日立 LM-8000型 LC-3QDMS系统 ,配以
音喷离子化 ( SSI)与大气压化学离子化 ( APCI)接口
以及 LC-M S分析软件系统。图 1, 2分别为 SSI接口
APCI接口的示意图。
离子化方式: SSI和 APCI。
图 1　音喷离子化 ( SSI)接口
图 2　大气压化学离子化 ( APCI)接口
·578· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 8期
Address: Liu Changxiao, Tian jin Ins ti tute of Ph armaceu tical Research , Tianjin
* * 日本日立公司 LC-M S技术部
离子检测:正离子检测。
液相系统: C18色谱柱 ,溶剂系统:甲醇 ,流速 0. 2
m L /min,总离子流 ( T IC)检测。
质谱条件:
SSI方式:
标准 MS　扫描范围: 100～ 650;累积电压: 0
V;累积时间: 100 ms。
二级 MS( M S2 )　离子累积　离子累积范围:
584～ 635;累积时间: 200 ms;扫描范围: 100～ 650;
分离电压: 0. 01 V。离子分离 ( M S1)　分离范围:
608～ 610;分离时间: 10 ms; 0. 04 V;离子流检测:
588～ 631;电压: 0. 2 V;扫描范围: 68～ 709。撞击解
离 MS( CID-M S)　撞击范围: 588～ 631;撞击解离
电压 ( CIDV ): 0. 2 V;撞击解离时间: 50 ms;扫描范
围: 68～ 709。
2　结果
如图 3和图 4所示 , SSI和 APCI两种离子化方
式对利血平进行 LC-M S /M S分析 ,以正离子检测 ,
所得标准 MS完全一致。标准 MS所得母离子 m /z
为 609,与 Na形成的母离子 m /z为 631,证实该化
合物的分子量为 608,与理论分子量 608一致。
对 m /z为 609的母离子进行二级 MS( M S2 )分
析 ,两种离子化方式得到完全相同的二级 MS( M S2 )
结果 ,如图 5和 6所示。 主要离子碎片有 m /z为
448, 397, 577( 578) , 365和 195。 利血平的二级 MS
( M S
2 )的裂解成离子碎片的途径如见图 7。进行二级
MS分析时所得总离子流 ( T IC)检测的液相色谱图 ,
显示的色谱峰含有 m /z为 448和 397的离子流的
测定效应。
本实验所得结果证明: 对利血平采用 SSI和
APCI两种方式离子化 ,以正离子检测 ,标准 MS和
二级 MS均能得到一致的结果。
图 3　 SSI方式所得利血平的标准 MS图
图 4　 APCI方式所得利血平的标准 MS图
图 5　 SSI方式所得利血平的二级 MS(MS2 )图
图 6　 APCI方式所得利血平的二级 MS(MS2 )图
图 7　二级 MS分析中的利血平的离子碎片裂解途径
·579·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 8期
3　讨论
液相色谱 -质谱联用技术 ( LC-M S)在近 10年中
发展很快 ,由于它可分析难以挥发的化合物、热不稳
定化合物和大分子化合物 (如多肽、蛋白、多糖和多
聚物 ) ,分析范围广 ,因而极受分析工作者重视。液相
色谱 -质谱 -质谱联用技术 ( LC-M S /M S)具有比 LC-
M S更优越的性能 ,通过 LC分离 ,应用 M S /M S可
分析在有大量杂质的混合物中分析待测物质 ,提高
分析的特异性和灵敏性 ,可以获得更多的化学结构
信息。
在研究者关注的 LC-M S /M S的发展中 ,接口
技术的发展为研究应用提供了更广泛应用的可能
性 ,其中 APCI、 SSI和 ESI离子化技术为我们提供
了多种离子化方式 ,可满足多种分析的需要 [2～ 4 ]。
ESI对不同极性和稳定性的化合物的使用范围能完
全被 SSI所覆盖 ,同时还能覆盖部分 APCI的使用
范围。
参 考 文 献
1　江纪武 ,肖庆祥 . 植物药有效成分手册 . 北京:人民卫生出版社 ,
1986: 888
2　 Hirabayashi A, Sanokai ri M and Koizumi H. Anal Chem, 1994, 65
( 2): 4557
3　 Hirabayashi A, Hirabayash i Y, Sanokai ri M , et al . Rapid Commu-
nications in Mass Spect romet ry, 1996, 10: 1703
4　 Hirabayashi Y, Hirabayashi A, Takada Y, Sanokairi M and
Koizumi H. Anal Chem, 1995, 67( 17): 2878
( 2000-04-05收稿 )
黄芩素的化学发光测定
汕头大学医学院化学教研室 ( 515031)　　方　冶 　张鲁勉　何小英　梁友竹
摘　要　以黄芩素进行试验 ,建立了黄芩素的化学发光测定法 ,并应用于市售制剂中有效成分的检测 , RSD =
0. 65% ( n = 10) ,回收率为 ( 98± 3)% ( n = 6) ;本法可用于其它多羟基黄酮化合物的检测 ,检测结果从本质上反
映多羟基黄酮化合物生物活性和药理作用的强弱。
关键词　多羟基黄酮　黄芩素　化学发光法
Detection of Scutellarein Derivative by Chemiluminescent Analysis
　　Depar tment of Chemistr y , Medica l Colleg e of Shantou Univ ersity ( Shantou 515031)　 Fang Ye, Zhang Lumian, He Xi-
aoying and Liang Youzhu
Abstract　　 A chemiluminescent analysis ( CLA) fo r the detection o f scutellarein deriv ativ es was es-
tablished. Results show ed tha t the RSD = 0. 65% (n = 10) , the average rate o f recovery was ( 98± 3)%
(n = 6) . The CLA method may be applicable to other poly-hydroxy f lav ones, and to predict their biologi-
cal and pharmaco logical potentia ls.
Key words　　 po ly-hydroxy f lav one　 scutellarein　 chemiluminescent analysis
　　多羟基黄酮化合物是植物界分布最广泛的黄酮
类化合物 ,具有多种生物活性和药理作用 ;如槲皮素
是抗癌成分之一 [1 ]。传统上多羟基黄酮化合物用比
色法检测 [2 ] ;该法基于酚羟基的颜色反应 ,特异性
差 ,干扰因素多 ,且多羟基黄酮化合物的多种生物活
性和药理作用与其抗自由基氧化的作用密切相
关 [1, 3, 4 ] ,比色法根本无法揭示这一作用的强弱。化
学发光法因其灵敏度高 ,准确性好 ,重现性强 ,操作
简便 ,近年来已在生物样品的检测中有较广泛的应
用。本文以黄芩素进行试验 ,提出多羟基黄酮化合物
的化学发光检测法 ,测定样品抗自由基氧化作用的
能力 ,测定结果在本质上反映样品的生物活性和药
理作用的强弱。
1　材料和方法
1. 1　仪器和试剂: HF-1化学发光仪 ;黄嘌呤氧化
酶 ( XOD,东风公司 , 1. 938 U /mL, 0. 313 U /mL) ,
超氧化物歧化酶 ( SO D,华东理工大学 , 6 000 U /
mg ) ,次黄嘌呤 ( HX, Fluka ) ,鲁米诺 ( Luminol,
M erck-Schuchardt ) ,黄芩素 ( SD,从市售黄芩中提
取 ,重结晶法纯化后为黄褐色粉末 ) ,其它试剂均为
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Address: Fang Ye, M edical College of Shantou University, Shantou