全 文 ：An a y l sio sf T et ra n d rin eAn t i
一
h eP a t i eF i b ro si sy bA e s s s sin gt h eL i ve rEn z y m eS P c et ru m
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15 n o n in v a s iv e a n d m o r e r a p id
, a e e u r a t e a n d e o n v e n ie n t t h
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e m ie a l in d e x e s fo r d ia g n o s is
, e u r a t iv e e f f
e e t a n d p r o g n o s t ie Ju d g
e m e n t o f h e p a t ie f ib r o s i s
.
理气药对荷瘤小鼠免疫功能的影响
北京医科大学生化和分子生物学系 ( 1 0 0 0 8 3) 叶 加 景 再益民 钱伯文 “ 于尔辛 ” ’
摘 要 实验中发现理气药有一定的抑 制小鼠肿瘤 S( 180 , L e w si 肺癌 ) 生长的作用 。 当小鼠接种
5 180 和 L e w 1S 肺癌后 , 其免疫功能降低 , 白细胞介素 l (I I 一 2 )活性低下 , T 细胞亚群比例失调 , T h /
T S < 1
。 经理气药治疗 , 明显抑制了 -Il 一 2 活性的降低 , 与对 照组比较 , 差别有显著意 义 (尸 < 0 . 05 ) ,
并能提高 T 辅 助细胞 , 调整 T 细胞亚群的比例 , 使 T h / T S > 1 。 表 明理气药能提高荷瘤机体的免疫
功能 , 以达到抗肿瘤效应 。
关键词 理气病 白细胞介素 I T 细抱亚群 免疫功能
恶性肿瘤与人体气机关系密切 , 气机失
畅是导致肿瘤形成的重要 原因之一 , 而肿瘤
的生长又促进全 身气机的紊乱 〔` 〕 , 临床上常
配伍理气 药 治疗各种肿 瘤 , 获得较 好的疗
效 〔 2 ’ 3〕 。 本实验拟通过理气药对荷瘤小鼠 Ll -
2 活性和 T 细胞亚群的观察 , 探讨理气药的
抗癌作用 。
1 材料与方法
1
.
1 动物与瘤源 : B A L B / c 小 鼠 , C 。 : Bl , 小
鼠 , 雄性 , 体重 18 一 2 09 , 上海市计划生育研
究所实验动物中心提供 。小鼠腹水型 5 1 8 0 瘤
株 , L e w si 肺癌 , 由中科院上海药物研究所赠
送 。 接种 2 又 10 6 个瘤细胞于小 鼠右液部皮
下 。
1
.
2 药物及试剂 : 理气药 : 八月札 、 广木香 、
佛手购 自上海市医药公司 。 水煎沸后 30 m ni ,
过滤浓缩至每 I OOm l 含生药 2 0 09 , 剂量 5 0 9 /
k只 · d 。 理气药的治疗剂量参照 《医学动物实
验 方法 })( 施 新酞 . 北京 : 人 民卫 生 出版社 .
19 80
,
10 4 )
, 并 以此 为 基 础 , 通 过 不 同 剂 量
( 2 0 0
、
1 0 0
、
5 0
、
2 5
、
1 2
.
5 9 / k g ) 的抗肿瘤实验 ,
确定 5 0 9 / k g · d 为最佳剂量 。 在接种肿瘤后
第 2 夭开始每天灌 胃治疗 , 用生理盐水作对
照 , 治疗 12 d 后 , 观察免疫 功 能指标 , 治 疗
Z dl 后 , 观察肿瘤生长情况 。 正常组未予任何
处理 。 C o n A : 美国 S i g m a 公司出品 ; ’ H 一T d R :
中科院上海原子能研究所提供 ; IL 一 2 标准样
品 : B o e h r i n g e r M a n n h e in G m bH . W 一G e -
nr a n y l 0 0 0 u /m l
,
C T I
矛
I厂 Z ha 胞 : 浓 度 l x
1 0 5 / m l
, 上海第二 医科大学免疫室提供 ;抗小
鼠 T 细胞 M e A b : T h y l , 2 , L 3T ; , L y t Z 由北
京 医科 大 学 免疫 室 生产 ; 第二 荧 光抗体 ,
FI T c 标记羊抗小鼠 Ig G : 中国军事医学科学
院 生产 ; 淋 巴细 胞分 离液 : 上海 试剂二厂生
产 。
1
.
3 方法
朱
A d d r e s s
:
Y e J ia
,
D e p a r t m
e n t B io e h e m i
s t r y , B e i*. n g M e d ie a l U n iv e r s . t y
,
B e ie i i
n g
` 卜海中医药 大学 ! , , 上海氏科大学附属肿瘤民院
《中草药 》 1 9 9` 年第 2 7 卷第 2 期 · 9 5 .
1
.
3
.
1理气药抗 B AL B /。 小鼠 5 1 8 0和 C 5 7
BL 小鼠 L ewiS 肺癌的生长 :小鼠接种瘤细胞
后第 2天 , 治疗组用理气药每天灌胃治疗 , 剂
量 5 09 k/ g · d , 荷瘤组用同体积的生理盐水
每天灌胃 , 正常组 为未予任何处理的正常小
鼠 。 2 1d 后 , 取局部实体瘤称重 , 观察瘤重及
抑瘤率 。
1
.
3
.
2 IL
一
2 活性测定 : 参考文献 〔` , 5 〕 。 a ) I L 一 2
的诱 生 : 无 菌取出 小 鼠脾脏 , 用 R P M l l 6 4 O
完全 培 养 液 配成 1 火 10 , 细 胞 悬 液 , 加 入
C o n A S拼g /m l , 5% C O : , 3 7 C 培养 2 4h 后 , 离
心收集上清 , 置一 20 ℃待检 。 b ) IL 一 2 含量测
定 :取传代的 C T L L 一 2 细胞 , 配成 1又 1。丫m l
细胞悬液 , 接种于培养板 , 加不同稀释度的待
测标本 , 以标准 I L 一 2 作阳性对照 , R P M l l 6 4O
作阴性对 照 , 5% C O : , 37 ℃培养 2 h4 , 于结束
培养前 6 h 每孔加入 0 . sm C i 3 H 一 T dR 5 0拜 l ,
收集细胞 , 用 B ac k m en 日检测仪测定 3H 掺入
量 。
1
.
3
.
3 T 细胞亚群测定 : 参考文献川 。 a )染
色 过 程 : 小 鼠眼球取 血 , 肝素抗 凝 ( 12 . s u/
m l ) P B S I
: 3 稀释后缓慢加到淋巴细胞分离
液上 , 离 心 1 5 0 0 r /m i n , ZOm in , 吸取淋 巴液 ,
加红细胞溶解液 1 : 2 0 , 7m i n 后离心 1 5 o o r /
m i n
,
sm i n
, 将所得淋 巴液分 3 管 , 各加 5 0拌 l
O K T M e A b ( 1
: 1 0 0 稀 释 ) T h y l , 2 , L 3T ; ,
L y t , 及 5 0拼1 P B S , 3 o m in , 离 心 z s o o r /m in ,
sm in
, 加第二 荧光 抗体 ( 1 : 1 9 ) 各 2 0拌 l , 经
4 5m i n 孵 育 后 , P B S 洗 涤 , 0 . 8 %戊 二 醛
。 . lm l 固定 , 染色在一 15 C 下进行 , 荧光标记
细胞的台盼蓝染色活细胞 > 95 % 。 b) 流式细
胞仪分 析 : F ac s t or p ul S 流 式细 胞仪 系美 国
B e e t o r
,
D i e k i n s o n 公司产品 , 氢离子激光 , 切
率 Z o o m w , 激 发波 长 4 8 8 n m , 绿 荧 光 5 3 0 /
3 n0 m
, 记录 1 0 2 4 道单参数直方图 , 所有数据
在 H P 3 10 数据分析计算机上进行 , 每个样本
采样淋巴细胞 5 0 0 。 个 。
2 结果
2
.
1 理气药对 B A L B / c 小鼠 51 80 的影响 :
B A L B / c 小鼠接种 5 1 80 瘤细胞后 , 治疗组用
·
9 6
·
理气药每天灌 胃治疗 , 共 21 d , 局部实体瘤重
1
.
09 士 0 . 48 9 , 而 荷 瘤 组 用 生理 盐水 灌 胃
21 d
。 局部实体瘤重 1 . 62 士 0 . 58 9 , 两组差别
有显著意 义 ( P < 。 . 0 5 ) , 治疗组的抑瘤率达
32
.
72 %
, 正常组未 见明显变化 。 可见理气药
对小鼠 5 1 8 0 的局部生长有一定抑制作用 。
2
.
2 理气药对 C : 7BI J 小鼠 L e wi S 肺癌实体
瘤的影响 : C 5 7B L 小鼠接种 L e wi S 肺癌后 , 治
疗组用理气药每夭灌 胃治疗 , 荷瘤对照组用
生理盐水每天灌 胃 , 2 d1 后 , 治疗组局部实体
瘤 重 0 . 91 士 0 . 4 59 , 荷瘤组局 部 实 体 瘤重
1
.
59 士 0 . 6 6 9 , 两组差别有显著意义 ( P < .0
05 )
, 治疗组 的抑瘤率为 42 . 7 % 。 正常组无
明显变化 。 表 明理气药对小 鼠 L e wi s 肺癌局
部生长有一定的抑制作用 。
2
.
3 理气药对荷瘤小鼠 I L 一 2 活性的影响 :
如表 l 。 B A I一B / c 小鼠接种 5 1 8 0 后 , 其脾脏
n
一
2 活性明显降低 , 为 31 . 37 士 8 . 7 3 u /m l , 与
正常组比较 , 差异有显著意义 ( P < 0 . 0 1 ) 。 经
理气药治疗 1 d2 后 , 测定 11一 2 活性 . 达 54 . “
士 1 6 . 4 6u /m l , 明显 高 于荷 瘤对 照 组 ( P <
。 . 01 ) 。 表明理气药有增强荷瘤小鼠 I L 一 2 活
性的功能 。
表 1 理气药对荷 51 80 小鼠脾脏 I L 一 2
活性的影响
组 别
正常组
治疗组
荷瘤组 {:
11
一 2 ( u / m l )
72
.
4 5士 12 . 1 3
5 4
.
6 6士 16 . 4 6 .
3 1
.
3 7士 8 . 7 3 蚤 赞
与荷瘤组 比较 ’ 尸< 。 . 01 与正常组 比较 , ` 尸< 。. 01
2
.
4 理气药 对荷瘤 小 鼠 T 细胞亚 群的影
响 : 结果如表 2 。 C 5 7B L 小鼠接种 I砂 e w is 肺癌
12 d 后 , T h yl . 2 (表达于 小鼠成熟 T 细 胞表
面 , 代表 T 3 ) , L 3 T 4 (表达于小 鼠成熟的诱导
一辅助 T 细胞表面 , 代表 T 4 )下 降 , 而 L yt Z
(表达于小鼠成熟的杀伤 /抑制 T 细胞表面 ,
代表 T 、 )则相对升高 , T ; / T 。 为 0 . 87 士 0 . 25 。
表明荷瘤小鼠 T 细胞亚群 比例先调 , T ; /Ta
比值倒置 。经理气药治疗 1 d2 后 , T ; 达 23 . 35
士 5 . 6 7% , 明 显 高 于 荷 瘤 对 照 组 16 . 8 士
6
.
2 %
, 其 差异有显 著意 义 (尸 < 0 . 0 5 ) , 而
T
4
/T
, 比值达 1 . 62 士 0 . 62 , 明显高于荷瘤对
照组伊 < 0 . 0 5 ) 。 从理气组看 , T ; 高于 T S , 与
正常组相近 , 而荷瘤组则相反 。结果表明理气
药有调整荷瘤小鼠 T 细胞亚群的功能 。
表 2 理气药对荷 L ewi s 肺癌小显外周血 T 细胞亚群影响
组别
正常组
治疗组
荷瘤组 ::
T h y l
,
2 ( % )
4 1
.
1 3士 4 . 0 2
3 9
.
4 7士 5 . 0 7
3 7
.
3 8士 7 . 3 7
I 3 T ; ( % )
2 5
.
6 6士 3 . 2 4
2 3
.
3 5士 5 . 6 7 .
16
.
8士 6 . 2 2
I
一
y t Z ( % )
1 5
.
2 7士 4 . 1 3
1 5
.
8 4士 5 . 6 2
1 9
.
9 0士 5 . 5 8
L 3T 4 / I
,
y t Z
1
.
7 1士 0 . 5 3
1
.
6 2士 0 . 6 3 .
0
.
8 7士 0 . 2 5
与荷瘤组 比较 ` p < 0 . 05
3 讨论
I L
一
2 对抗肿瘤效应细胞有调节作用 。 临
床报道 : 肿瘤病人 I L 5 2活性普遍降低 , 而经静
脉 注入体 内的 I L 一 2 , 在循环 中的半衰期很
短 , 大剂量的 IL 一 2 虽 可维 持体 内 IL 一 2 于一
定水平 , 但同时可引起多种副作用 〔7〕 , 所以寻
找能诱导体内产生 I L 一 2 的药物较之体外注
入 IL 一 2 更为安全可靠 , 且体内的维持水平均
衡长久 。 临床和动物实验 已证明有些 中药有
提高 IL 一 2 产生的作用 〔的 。 目前研究较多的是
补益类中药 。理气药在调节机体气机逆乱 , 纠
正平衡失调方面有一 定的作用 , 是否对体内
LI
一
2 活性亦有所影响 , 我们进行 了理气药抗
肿瘤及对诱生 I L 一 2 影响的实验 。 结果发现 ,
肿瘤的形成可使体内 IL 一 2 的产生降低 , 抑制
免疫系统的抗肿瘤功能 , 以利于肿瘤的生长 。
而理气药有一定的抑制 B A L B /C 小 鼠 51 80
和 C : : B L 小 鼠 L e w si 肺癌生长 的作用 , 理气
药的治疗能促进体内产生 IL 一 2 的功能提高 ,
改善了机体的免疫低下状态 。 由于理气药在
此是作为诱导剂 , 促进体内自身产生 I L 一 2 的
能力提高 , 较之外源性 IL 一 2 更完全有效 。
T 细胞在肿瘤免疫 中起 着 中心调控作
用 。 据报道 , 荷瘤状态下 , T 细胞功能的不全
和抑制 ,会引起机体抗瘤功能降低 , 这种变化
不仅有 T 细胞数量减少和功能改变 , 还表现
为 T 细胞亚群的比例失调 〔的 。 监视荷瘤机体
内 T 细胞亚群的变化显得十分重要 。 随着肿
瘤生长 , 总 T 细胞和 T h 细胞进行性下降 , 使
T h / T s 比值降低 。 T h 细胞的减少与肿瘤生
长的加速和扩散相一致 。 T s 细胞的升高伴有
肿瘤的转移和扩散 。 可见在抗肿瘤免疫中 , T
细胞亚群起着重要作用 。 我们以理气药观察
其对 T 细胞亚群的影响 , 结果发现 , 生长肿
瘤后 的小 鼠 , 其 T 细 胞抗肿 瘤免疫 功能降
低 。 T h / T s 比值明显下降 。 而理气药的治疗
调整 了 T 细胞亚群 的 比例 失调 , 使 T h / T s
接近正常 , 表明理气药有改善 T 细胞抗肿瘤
免疫功能的作用 , 从而达到一定的抗肿瘤效
应 。
参 考 文 献
z 钱伯文 . 上海中医药杂志 , 1 9 8 5 ( 1 0 ) : 2 6
2 金 岚 . 上海中医药杂 志 , 19 9。 ( 1。 ) : 7
3 钱伯 文 . 中成药研 究 , 1 9 8 2 (4 ) : 2
4 张 蒲 , 等 . 中国免疫学杂志 , 19 8 6 ( 6 ) : 23
5 匡彦德 , 等 . 上海 医科大学学报 , 1 9 8 7 ( 1 ) : 32
6 周 决 , 等 . 中国癌证杂志 , 1 9 9 1 ( 1 ) : 5 6
7 王文章 . 肿瘤免疫生化诊断与免疫 治疗 . 重庆 : 科技文献
出版社重庆分社 , 19 8 9
8 钟 飞 , 等 . 中国药理通讯 , 19 8 9( 6) : 5
9 R o b in s R A
, e t a l
.
Im m u n o l T o d a y
, 1 98 5 ( 6 )
:
5 5
( 1 9 9 5
一
0 1
一
1 2 收稿 )
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.
《中草药 》 1 9 9 6 年第 27 卷第 2 期