全 文 ：野猪黄的体外培育及其成分研究
山东省菜西市药品检验所 (26 6 6 0) 战人美 ’ 崔丰氏 ` , 王爱梅 战 烨 ’ “
摘共 介绍了野猪黄即野猪胆结石的体外培育方法 , 并分析了所含主要化学成分是胆碱 、去氧胆酸 、
胆红素和 17 种氨基酸 , 为开发中药资源提供了依据和开辟了一条新途径 。
关健祠 野猪黄 体外培育 胆酸 胆红素 氨基酸
野猪黄为猪科动物野猪uS : : cr o f a L .胆囊中的结石 。 味辛 、 甘 、 平 、 无 毒 , 具 有 止
血 、 生肌等功效 , 主治癫痈 、 惊风 、 血痢 、 金疮等 lt 〕` 系民间流传已久但很稀少的品种 。 为了
开发资源 , 扩大应用 , 采用猪胆汁进行野猪黄体的外培育 , 并对其主要化学成分作了研究 。
结石的形成原理 : 胆结石的主要成分是胆碱 、 去氧胆酸 、 胆 红素 、 胆固醇 及 K + 、 N a 辛
C a 艺+ 、 M g 名+ 等 , 其中胆红素占固体成分的 15 % ~ 75 % 。 在正常胆汁中胆红素跟葡萄糖结合成
能溶于水的胆 红素二葡萄糖醛酸昔 , 以脂的形式存在于胆汁中。 当大肠杆菌进入胆囊内则大量
繁殖 , 并释放出活性很高的细菌性 p一葡萄糖醛酸酶 , 在这种酶的作用下 , 使胆红素二 葡 萄
糖醛昔大量水解而游离出胆红素 ,由于胆红素不溶于水或者再与胆汁中的 C a Z+ 、 M g Z斗等离子
结合而析出 , 在胆囊中异物如 : 蛔虫卵或蛔虫尾体为核心上逐渐沉淀而形成结石 。
1 实验材料
仪器与试 药 : 三用紫外线分析仪 (上海电光仪器厂 ) , 胆酸 、 去氧胆酸 、 胆红素 、 1 8种氨基
酸对照品 (中国药品生物制品检定所 ) 、 亚硫酸氢钠 、 氯仿等均为分析纯 。
2 方法与结果
2
.
1 菌种的培养: 自患胆结石的病人胆囊中 , 手术时抽取胆汁 。 用琼脂培养基按常规 法 培
养 , 分离出大肠杆菌 ,将其菌落接种于胆汁肉汤液体培养基 中于 37 ℃恒温条件下培养48 h 。 肉
汤呈馄浊后 , 在 5℃条件下冷藏用 。
2
.
2 培育方法 : 取新鲜猪胆汁 l 0 0 0m l , 加 C H C l s达饱合程度 。 加亚硫酸氢钠 5 9 , 静置 6 o d ,
可见液体底部出现小量的桔红色沉淀 , 加入胆酸结晶。 . l m m , 80 一 ;的粒 , 静 置 7 d , 晶体可
增长到 5 0~ 7 0倍 , 成 5~ 7 m m 的棕色固体 5 0~ 1 0 0块 , 16 d后 , 注入大肠杆 菌培 养 液 z o m l ,
继续在室 温下静置培育 , 使固体物继续增长到 10 ~ 17 m m ,取出用滤纸包于阴凉通 风处 晾干
得野猪黄 7 9 。
2
.
3 成分鉴定
2
.
3
.
1 成品性状 : 块状结石呈卵形或类三 角形 ,直径 5 ~ 叮 m m ,表面棕黄色 , 平滑有光泽 ,
断面有棕黄相间的环状层纹 , 质轻易碎 , 味苦 、 嚼之不粘牙 。
2
.
.3 2
一 主要成分胆酸 、 去氧胆酸 、 胆红素的分离鉴定 : 取样品粉末 1 o m g , 乙醇 l m l , 置温
水浴中振摇提取数分钟 , 提取液作为供试品溶液 , 另取胆酸和去氧胆酸对照品各 10 m g , 加
乙醇溶解制成每毫升含 l m g的 2种对照品溶液 。 用微量吸管分别取供试 品液和对照品 液 1 0时
点样于同一硅胶G 薄层板上 (湿法铺板 , 自然干燥后于 105 ℃活化 30 m in )以氯仿 : 乙醚 : 冰
醋酸 ( 2 : 2 : 一)为展开刘 , 展距 l o e m , 取出晾干 , 喷以 3 0% H : 5 0 ` ( v / v )于 1 05℃加 热 约 1 0
m i n
, 置紫外分析仪 ( 3 6 5 n m )波长下检视 , 对照品各显 1个荧光斑点 , 供试品在与对照品相
.
A d d r e s ,
:
Zh
a n R
o n m e i
:
L a n x i M u n i c i p a l I n s t i t u t o f o r D r u 多 c o n t r o l . L a n 轰 i
二 莱西 市人民包院 申二 肖岛 il1 药材站
· 6 9 2 -
应位置上显相 同的荧光斑点( 图 1 ) 。
取样品适量研成细末 , 加冰醋酸一乙酸 乙醋 ( l : 1 0) l m l室温浸 72 h , 过滤 。 取胆酸 , 胆
红素对照品各 io m g分别用冰醋酸一乙酸 乙醋 ( l : 10) 的溶液 l m l溶解 , 制成对照品溶液 , 各
点样 10归于硅胶 G薄层板上 , 以正丁烷一乙酸 乙醋一冰醋酸一甲醇 ( 75 : 4 0 : 1 2 . 5 : 12 . 5 )为畏
开剂展开 , 用 15 %硫酸 、 硫酸氢按 、 乙醇溶液喷雾后加热至色 (图 2 ) 。
00
O O
O O
1 2 3 2 3
图 1 野猪黄的薄层色谱图 图 2 野猪黄的薄层色谱图
1
一野猪黄 2一去氧胆酸 3 一胆酸 1一野猪黄 2一胆酸 3 ·胆红素
2
.
3
.
3 氨基酸成分鉴定 : 取供试 品粉末 50 m g加入酸水解玻璃管中 ,加 6m o l/ L H C I 10 m l ,
封管于 1 10 ℃恒温水解 2 4 h 。 取出冷却 , 过滤 、 蒸千后加水制成 1% 溶液 。 取 18 种氨基碱对照
品制成 0 . 二%水溶液 。 取供试品溶液和 对照品溶液各 15户 , 分别点于硅胶 G 薄层板上 , 用正
丁醇一醋酸一水 ( 4 : , : l) 为展开剂 I ,苯酚一水 ( 75 : 25 )为展开剂 I ,进行双向展开 。 用。 . 5%
苟三酮乙醇液喷雾显色 ( 图 3 ) 。
「一下于刁马 0 0 !。 。 。占 !
户尸 }
O ~ l
图 3 对照品奴基映薄层色谱图 图 3
1
一赖氨酸 2 一精氨酸 3一组氨酸 4一门冬氨酸 5 一谷氨酸
9
一脯氨酸 10 一苏氨酸 1 一酪氨酸 12 一撷氨酸 1 3 一色氨酸
苯丙氨酸 1 7 一半眯氨酸 1 8一蛋氨酸
野猪黄水解后薄层色谱圈
6一甘氨酸 7 一丝氨酸 8 一丙氨酸
14
一亮氨酸 1 5 一异亮氨酸 16 -
2
.
4 胆酸 、 去氧胆酸和胆红素的含量测定 : 按中国药典〔 3〕和有关资料〔 2 〕测定含胆 酸 0 . 8% 、
去氧胆酸 3 . 8 % 、 胆红素 2 7 . 5% 。
(下转第5 9 9页 )
《中草药》 19 9 5年第 26 卷第 U 期 5 9 3
速生长 。 4月底收割头茬绞股蓝 1 . 1 7k g , 7月底第 2次收割 o . 5 k3 g , 1 1月初第 3次收割 o . 41 k g 。
1 9 9 2年秋季进行的插叶试验 , 其结果如表 1 。
裹 1 秋攀擂叶试验结果
扦擂 扦插方法 数
成活
率
(% )
冬前新枝
出土百分
率 (% )
插后 3 0d
新枝平均
长度 c( m )
越冬后 0 4 · 0 8
测得新枝平
均长度 ( e m )
0 4 一 2 5收头
茬绞股蓝
干重 g( / m 艺 )
全年千草
总 产 量
( g /m
里
)
叶插 15 0 9 8 。 7 7 0 。 9
表2 春攀扦擂试验结果比较 ( 扦擂时间 1 993 一 04 一 21
扦擂
方法
成活
率 (% )
扦插第15 d 幼苗
发生不定根的平
均条数和最长
根的长度 ( c m )
插后第 30 d测得
新枝平均长度
和最长枝长度
、 e m )
年收千草
量 ( g / m : )
扦插数
叶插 1 2 0
12 0
17 2
。
7
( 有较多二级侧根 )
2 5
。
9 5 0
。
茎擂 14 。 1 2 3
1 8 1
1 5 2
2
.
2 春季扦插时气温呈逐渐上升趋势 , 120 株扦插苗在插后约 2 d0 便能较快地生长起来 。 作
者在 1 9 9 3年春季进行的叶插与茎插对比试验 , 其结果如表 2 。
3 讨论
插叶繁殖绞股蓝是扦插繁殖方法中的一项新技术 , 它是利用其鸟足状复叶叶柄下的腋芽
具有较强萌发能力的特点来进行繁殖 。 上述试验结果表明 , 插叶法具有以下优点 : a) 在适宜
条件下 , 插入土壤里的叶柄下端和生根节均能较快地发生许多不定根 , 成活率高 。 b) 叶插的
地下腋芽萌发早 , 由它所产生的新枝比用地上茎插产生的新枝长得快 。 c) 在秋季采用插叶法
繁殖绞股蓝 , 开春后生长迅速 , 且由腋芽产生的萌枝多 , 4月底至 5月初便可收割头茬藤蔓 ,
这样就增加了年收获次数和产量 。 从表 1看出 , 头茬绞股蓝的产量 , 占全年总产量的 5 . 4% ,
高于夏秋两季收获量之和 ; 从表 1和表 2对比看出 , 头年秋季用插叶法繁殖的绞股蓝 , 其总产
量是当年春季插叶年产量的 2 . 5倍 , 是当年春季茎插繁殖的 2 . 9 倍 。 由此可见 , 在长江 流域
广大地区 , 采用秋季插叶繁殖新技术 , 可 以大幅度提高绞股蓝的茎 、 叶产量 。
( 29 9 4
一 0 5一 2 1收稿 )
( 上接第 5 9 3页 ) - - - 一 -一 - - 一
3 讨论与小结
3
.
1 实验证明体外培育野猪黄方法可行 , l。。。m l猪胆汁可培育野猪黄 7g 左右 。
3
.
2 通过薄层色谱分析和含量测定证明 : 培育野猪黄中主要成分胆酸 、 去氧胆酸 、 胆 红 素
分别为 0 . 8% 、 3 . 9% 、 2 7 . 5% , 与牛黄的主要成分及含量相似 , 提示培育野猪黄具有牛黄的
治疗作用 , 是否可代牛黄应用尚需进一步研究。 此外证明培育野猪黄含有 1 7种氨基酸 , 其中
苏氨酸 , 领氨酸 、 亮氨酸 、 异亮氨酸 、 苯丙氨酸 、 赖氨酸是人体必需的氨扛酸 。
综上所述 , 体外培育野猪黄 , 为开发新的药材资源提供了依据和开辟 了一条新途径 。
考 考 文 献
1 江苏新医学院编钧 . 中药大辞典 . 下册 .上海 : 人 民 3 中华人 民共和国卫生部药典委员会编 . 中华人民
出版社 , 19 7 . 2 1 4 6 共和国药典 。一部 .北京 : 化学工业出版社 ,人 民卫
2 商业部脏器生化制药情报中心站编著 . 动物生化 生 出版社 , 1 9 9 0 . 5 6
制药学 . 北京 : 人民卫生出版社 , 1 9 8 0 . 2 6 0 ( 19 9凌一 0 9二 2 9收稿 )
《中草药 》 1 9 9 5年第26 卷第n 取 5 9 9