全 文 ：50%板蓝根注射液对小鼠F r ien d红白血病细胞
3 C L一 8体内外的杀伤作用△
沈阳医学院生物技术研究所 ( 1 1。。 31 ) 单风平 . I o n G r e s s e r二
摘要 3C L一 8细胞是小鼠受 F ir e n d病毒感染后诱导机体产生的一 种 永 久性 红细胞分 化反应细
胞 , 致病性极强 。 应用 5 0 %板兰根对小鼠3 C L 一8细胞进行体内外杀伤 , 结果表明 : 在体外细胞晤
养时 , 50 %板蓝根注射液对 3C L一 8细胞有强大的直接杀伤作用 , 最低杀伤浓度可达 1 : 80 。 皮下局
部注射 50 肠板兰根时有一定的杀伤作用 , 3 C L 一 8实体瘤有减少趋势。 腹腔注射50 %板兰根时未见
对3 C L 一 8细胞有明显的杀伤作用 。
关健饲 小鼠红白血病 3C L · 8细胞 5。%板蓝根注射液 细胞毒作用
红白血病目前仍是世界上尚未攻克的一种血液系统癌症 。 小鼠 F r i en d红白血病是由 F r -
i e n d病毒感染小 鼠引起 , 3 C L 一 8细胞株是由F r i e n d病毒诱 导小鼠产生的永久性红细胞分化
反应细胞 , 具有很强的致病性及快准肝脾浸润性〔 , 〕 。 从` 60 年代起有关小鼠红白血病 的 研 究
有大量报道并推测与人类病毒性红白血病具有相似起因〔 2〕 。 近年来随着分子生物学 及 药 物
研究的进展 , 有关小 鼠红白血病病因 , 癌细胞结构及治疗方法都有很 多 研 究3t, 们 。 我们使用
50 %板兰根注射液研究对小 鼠 F r ie n d红白血病 3 C L一 8细陀株的体内外杀伤作用 , 试图 寻 找
用中药治疗红白血病的新途径 。
1 材料
1
.
1 R P M l l 64 o培养液 , 苏格兰产品 。 营养琼脂粉 ,法国产品 。
1
.
2 F r i e n d红白血病细胞 3 C L 一 s株 : 由n r . E . A r f a b r i c s赠送 , 并由本实验室接种到含 r o %
F C S的 1 64 0完全培养液中 , 每4 d传代一次 , 用时进行鉴定 。
1
.
3 50 %板蓝根注射液 : 按中国药典 1 9 8 5年中药版下项制成无菌注射液 (简称 50 %板蓝根 ) 。
1
.
4 动物 : 18 一 2 2 g D B A / 2雄 性小鼠 , 由法国科学院肿瘤研 究所无病原菌动物饲养基地提供 。
2 方法
2
.
1 体外试验 : 按细胞传代常规方法将不同浓度的 3 C L 一 8细胞接种到 50 m lF al c o n 一次性塑
料培养瓶中 , 每瓶 8 m l ,每个细胞 浓度接种 3瓶 , 同时分别加入不同浓度的 50 %板兰根 , 使最终
浓 度 分 别 为 l : 5 , l : 10 , l : 2 0 , 1 : 4 0 , l : 8 0 , 和 l : 1 0 0 。 置 3 7 oc 含 , % C 0 2培 养箱中培养
2 h4
, 同时设正常对照 , 显微镜下观察 , 用琼脂克隆法评价细胞浓度及活力 。
2
.
2 体内试验 : a ) 腹腔 内试验 : 健康小鼠 21 只 , 随机分成 3组 , 有 2 组每组 10 只 , 剩下 1
只为 1组 。 将 2组每组 10 只的小鼠分别腹腔注射 10 4 /m l 3 C L 一 8细胞 0 . 5 m l 。 然后 将 其 中 1组 10
只小鼠分别注射 50 %板蓝根 。 . 2m l , 每天 1次 , 连续 7 d 。 将另 1 组 10 只小鼠以同样条件注射
生理盐水 。 剩下 1只的小 鼠为正常对照 。 d7 后处死小鼠 , 取腹水 , 计数细 胞 , 用琼脂克隆法
评价细胞活性 。 b ) 皮下试验 : 健康小鼠 21 只 , 随机分成 3组 , 有 2 组每组 10 只 , 剩下 1 只为
l组 。 将 2 组每组 10 只的小 鼠分别皮下 注 射 1 0弓 / m l 3 C L 一 8细胞 0 . 2 m l。 然后将其中 1 组 10 只
小鼠分别在注射 3 C L 一 8细胞处皮下注射 50 %板蓝根 o . Zm l , 每天 l次 , 连 续 7 d 。 另 1组 10 只小
*
A dd r e s s
:
S il a n F o n g P i n g
,
I n s t i t u t e
(,
f B i
,
I J g i c a l T e c h o o l ) g y
,
S h e n y a 亘 9 M e d i e a l C o l l e g e
,
S h e
n y a n g
△本实验是在法国科学院肿瘤研究所所做工作的一部分 二现在法国科学院肿瘤研究所基因研究工作
《 中草药 》 1 9 0 4年第2 5卷第 8 期 一
4 1 7
-
鼠以同样条件每只注射生理盐水 。 剩下 1组 1只小鼠为正常对照 。 d7 后用卡尺测量肿瘤实体体
积 , 进行分析 。
2
.
3 琼脂克隆法评价 3 C L 一 8细胞 : 取直径 50 m m塑料培养皿 , 加 2m l用含 30 % F C s的 1 64 。培养
液配制的2 . 5%营养琼脂 , 放冷 。 然后加入 。 . 5m l用无血清 16 4 。配制的含有不同浓度待检细胞的
0
.
5 %营养琼脂 。置 3 7℃ 7 % c o z培养箱中培养 96 h , 在显微镜下计数 细胞克隆数 , 换算成相
应的细胞数 , 从而评价 5 0 %板蓝根对 3 C L 一 8的细胞毒作用 。
3 结果
上述结果见表 1一 3 。
表1 琼脂克隆法评价 50 %板蓝根对小以 表 2 小鼠皮下注射 50 写板蓝根d7
3 C L一 8细脸体外 2 h4 的杀伤结果 后实体肿有休积差异比较 .
板蓝根
稀释度
3 C L
一 8细胞浓度 注 射 天 数 ( d )
5 x 10
`
10
.
2 x 1 0
B 1 2 3 4 5 6 7
一 `— ~ - ~ ~ ~ 一 ~ — ~一 .一- 一一一 一一一 ~ . 一 一一 . - 一一一一一 ~ 一
药物
0 (对照 )
1 : 5
3 X 1 0 2
x 10
`
2 x 10 生理盐水
板蓝根
1 2 x 1 3 1 6 x 1 5 1 8 x 1 7 2 3 x 2 0
8 x 1 0 1 2 x 1 3 1 5 x 1 6 1 8 x l 9
* 为平均值 ( 下同 )
0 0
0 0 0
5 义 1 0 . 1 0 . 2 x l 0 .
.
J
.翻毛 d
表 3 琼脂克隆法评价小鼠腹腔注射 50 %
板蓝根后 3 C L一 8细脸数目结果 .
nù甘几U
0
5 x 1 0
` ` 一~ 一 二一一 ,一一旧一一 ,一~一一U
O几切ōnùU吸生,“月吸胜O,止
4 讨论
上述结果看出 , 50 %板兰根在体外对小
鼠F r ic n d红 白血病 3 C L 一8细胞有强大的直接
细胞毒作用 , 其最低作用剂量可达 1 : 80 。 这种
药物
3C L
一
8细胞浓度
注射前 注射后
一— — 一 一一一一 .一—— 一一— 一一生理盐水 1 0` 7· 5 x 1 0 ,
板蓝根 6 x 1 0一一 甲 r , , , 巴 尸, , 一~一 巴 ,一一 , 班 ,细胞毒作用与细胞浓度无关 。 在显微镜下观察到 , 死亡的细胞表面皱缩 , 破碎并完全丧失原
有细胞形态 。 这很可能是药物直接 与细胞表面结合而杀伤靶细胞 。 琼脂克隆试验结果也表明
了这一点 。
皮下注射治疗小 鼠F r i e n d红白血病 3 c L 一 8细胞实体瘤结 果 表 明 , 50 %板蓝根对实体瘤
有一定的治疗作用 , 瘤体略有缩小 , 但不十分明 显 。 腹 腔 注 射 50 % 板 兰 根 对 3 C L 一 8 瘤
细胞没有杀伤作用 。 可能是由于 : a ) 当皮下 注射药物时 有 局部储留和渗出 , 这样在肿瘤部
位不能保证有效的治疗浓度 。 b ) 3 C L 一 8是一种快速肝脾浸 润性癌细胞 , 当进入腹腔后迅速
寄居肝脾及其它脏器 , 这样可形成保护 。 尽管每次腹腔注射一定量的 5 0 %板兰根 , 但到达局
部脏器的浓度不足以杀死 3 C L 一 8细 胞 。 琼 脂 克隆法 评价细胞活力也表明了这一点 。 因此 ,
寻找合适的给药途径及给药剂量需进一步研究 。 板兰根是一种国内最常用的抗病毒中药 , 不
仅对流感 、 肝炎有一定的疗效 , 而且在某些条件下对急性白血病也有疗效〔 5〕 。 在当今世界对
人类红白血病束手无策的情况下 , 探找中 药 治 疗法是一项十分有益的工作 。
参 考 文
G r e s s o r l
, e t a l
。
I n t J C a n c o r
,
19 9 0
,
4 6
*
4 68 4
献
B e l a r d
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, e t a l
.
3 4 . 3 8 9
中国药典 . 1 , a s . 2 7 5
I n t J C a n o e r
,
19 8 4
-
H i r o a k i Y a s u i
,
C a n c . r R
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,
1 9 9 0
-
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.
I n t J C a n c e r
,
19 8 9
44 一 1 10 8 (
1 9 9 3一 0 3一3 1收稿 )
4 1 8
.
E f f e e t s o f E m o d i n a n d Rh u b a r b P o ly s a c e h a r id e s
o n t h e C y t o P l a s m i e F r e e C a l e i u m i n t h e
S P l e e n L y m Ph o c y t e s o f M i e e
J i n Z h u h u a
,
L i n X i u z h e n
,
M a D e l u
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r h u b a r b p o l y s a c c h a r i d e s o n t h e e y t o p l a s m i c f r e e c a l e i u 址 i n l y m p h -
o c y t e o f m i c e w e r e s t u d i e d w i t h t h e l a t e s t g o n e r a t i o n f l u o r e s e e n t i n d i e a t o r F u r a
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s h o w e d t h a t e m
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-
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r a e e l l u l a r s t o r e s a n d t h
e i r e f f e c t s a r e d o s o d e P e n d e n t
.
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T h i s m a y b o o ” e o f t h e t h e o r e t i c a l e v i d e n e e s o f t h o b i P h a s i e r e g u l a t i o n
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r i g i n a l a r t i e l e o n p a g e 4 2 5 )
《 中草药 》 19 9 4年第 25 卷第 8 期 · 4 4 7 ·