全 文 ：不同炮制方法对藤黄致变性的影响
南京中医药大学 ( 2 1 0 0 2 9) 孔令东 介 叶定江 王明艳 高存强
摘 要 以小鼠骨髓细胞中嗜多染红细胞微核和姐妹染色单体互换为指标 ,观察不同炮制方法对
藤黄致变性的影响 。 结果表明 ,藤黄经炮制后可降低其致变性 ,各炮制品之间无显著性差异 。
关链词 藤黄 炮制方法 致变实验
藤黄是一剧毒药 ,在中医临床上藤黄必
须炮制降其毒性方可服用 。 我们以小鼠骨髓
细 胞中嗜多染红细胞 (P C E s ) 、 微核 (M N )率
和姐妹染色单体互换 ( S C E )频率为指标 , 探
讨不同炮制方法对藤黄致变性的影响 。
1 实验材料
1
.
1 药材 : 藤黄购 自南京市药材公司 , 产地
泰国 。 经本校陈建伟副教授鉴定为藤黄科植
物藤黄 G a ar c i n i a h a n bu卿 1 H o o k F . 所分泌
的干燥树脂 。
1
.
2 试剂 : 环磷酸胺 (C P A 上海第十二制药
厂 ) , 5一澳脱氧尿崛吮核昔 ( 5一 B r d u , F l u k a ) 。
1
.
3 动物 : I C R 小鼠 ,雌雄各半 ,体重 20 士 2
g
, 由本校实验动物中心提供 。
2 方法和结果
2.1 藤黄的炮制 : 生 品 : 将原药材拣去杂质 ,
轧成粗粒 。
山羊血制品 : 将 1 0 0 0 m L 水和 2 5 0 9 山
羊血共煮 , 煮沸后加入 5 0 9 生藤黄煮 s h ,
纱布过滤 ,去净山羊血块及残渣 ,滤液晾干 。
清水制品 : 将清水 1 0 0 0 m L 煮沸后加入
50 0 9 生藤黄 , 烽化 ,纱布过滤 去残渣 , 滤液
继续加热 s h , 晾干 。
荷叶制品 : 将干秋荷叶 2 50 9 放入 2 5 0 0
m L 水中 , 煮沸 l h 后过滤 , 得荷叶煎汁约
1 0 0 0 m L
,加入 5 0 0 9 生藤黄 ,烽化 ,纱布过滤
去渣 ,滤液继续加热 s h ,晾干 。
豆腐制品 : 将 1 2 5 0 9 豆腐放入盘内 , 中
间挖一不透底的槽 , 取 5 0 9 生藤黄放入 ,再
用 豆腐盖严 , 隔水加热 s h 至藤黄溶化 , 取
出 ,冷却凝固后去豆腐 , 晾干 。
高压蒸制品 : 生藤黄置有盖的瓷杯中 ,放
入高 压蒸锅 中 , 12 6 ℃蒸制 0 . s h , 取出 , 晾
干 。
以上各炮制 品粉碎 , 过 1 0 目筛 , 用
.0 5% C M C
一
N a 溶液配成不 同浓 度的混 悬
液 ,供小鼠灌胃用 。
2
.
2 对小鼠骨髓 P C sE M N 率的影响 : 将小
鼠随机分 20 组 ,每组 8 只 。 藤黄组按表 1项
19 , 阴性对照组 19 等体积 0 . 5% C M C 一 N a , i
次 d/ ,连续 g d ,第 10 天脱臼处死动物 。 阳性
对照组每天 19 等体积 0 . 5 % C M c 一 N a ,处死
前 3 0 h i p 2 0 m g / k g e P A 。 取股骨骨髓细胞 ,
常规制片 , 用 iG e m sa 液染色 , 显微镜检 , 每
组计数 5 0 0 0 个 P C E ,计算 M N 率 ,并进行扩
检验 。 结果表明 ,与 C M C 一 N a 组比较 ,藤黄生
品 2 4 和 12 m g / k g 剂量组非常显著地提高
M N 率 (尸 < 0 . 0 01 , p < 0 . 0 1 ) , 藤黄炮制品
24 m g k/ g 剂量组显著地提高 M N 率 ( P <
.0 05 )
, 藤黄生 品 6 m g k/ g 剂量组均无显著
性差异 。 藤黄各组存在一定的量效关系 。 结
果见表 1 。
2
.
3 对小鼠骨髓细胞 S C E 的影 响 : 小 鼠分
组 ,给药同前 。 所有实验组动物处死前 24 h
i p 4 0 m g / 2 0 9 5
一
B r d u (与 3 0 0 目活性炭搅
匀 ) 、 处死前 4 h i p 5 m g / k g 秋水仙素 。 取股
骨骨髓细胞 ,常规制片 ,标本片在 37 ℃温箱
中老化 Z d 后 ,进行分化染色 , 显微镜检 。 每
组计数 24 0 个中期分裂相 , 按 L a m b er 法计
数 S C E ,计算 S C E 频率 , 并进行 t 检验 。 结果
`
A dd r e s s
:
K
o n g L i n g d o n g
,
N
a n ji n g U n i
v e r s i t y o f T
r a
d i t i
o n a l C h i n e s e M
e d ie in e
,
N
a n j in g
《中草药 》 1 9 9 7 年第 2 9 卷第 i 期
表明 , 与 C M C 一N a 组比较 ,藤黄生品 24 租 12
m g / k g 剂量组非常显著地增加 S C E 频率 (尸
< 0
.
0 0 1 , P < 0
.
0 1 )
, 藤黄炮制 品 2 4 m g / k g
剂量组也明显地增加 S C E 频率 (尸 < .0 05 ) 。
藤黄生品 6 m g k/ g 剂量组 , 藤黄炮制品 1 和
6 m g k/ g 剂量组无明显差异性 。 藤黄各组存
在一定的量效关系 。 结果见表 2 。
表 1 藤黄炮制品对小鼠骨髓 P C E 微核率影响
表 2
组别
藤黄炮制品对小鼠骨髓细胞 S C E 频率影响
剂量 S C E 总数 S C E 频率 量效关系
( m g / k g ) (个 ) (个 /细胞 ) ( r 值 )
月冷卜ù月,了。J八A`Où二O自nU孟叮`巴,口SA1火连ōIJùl)(一匕nùO亡OJ甘曰Qó月了Q自,01ǎ执甲口1口曰引日Qù叮犷ǎ吕甲口办b只é一了内匕峥自bn6月八t浦
20416
0
.
5写 C M C一 N a
C P A
生品
0
,
9 94 4
0
.
9 9 8 5
组别 剂量 含 M
N 细胞数 微核率 量效关系
(个 ) (输 ) ( r 值 )
山羊血制品
清水制品
( m g / k g
2
.
5 5 8士 0 . 6 6 8
1 0
.
8 9 2士 1 5 1 7 怪 份 书
7
.
9 5 0土 1 . 1 84 二
4 1 1 3土 0 . 92 8 赞 苦
2
.
9 2 9士 0 。 8 9 9
3
.
7 2 1士 0 . 9 1 0 份
3
.
1 4 2士 0 . 8 7 8
2
.
9 1 3士 0 . 8 72
3
.
6 8 8士 0 . 8 8 2 任
3
.
3 0 0士 0 . 7 90
2
.
6 2 5士 0 . if 2 7
3
.
6 8 3士 0 . 9 2 6 .
3
.
2 3 8士 0 . 8 69
2
.
6 0 6士 0 . 6 73
3
.
5 2 9士 0 . 9 9 4 .
3
.
2 8 3士 0 . 8 34
2
.
8 0 8士 0 . 7 6 7
3
,
6 7 1士 0 . 8 7 4 .
3
.
2 2 5士 0 . 7 70
2
.
5 7 9士 0 . 5 92
0
.
9 4 1 2
0
.
5% C M C
一
N a
C P A
生品
山羊血制品
清水制品
荷叶制品
2
.
0
8
.
8 , 二
7
.
8 一 , .
5
.
6二 0 . 99 5 1
4
、
0
4
.
2 .
3
.
6 0
.
9 2 8 6
2
.
4
4
.
8
荟
2
.
8 0
.
9 9 3 8
2
.
2
4
.
8
居
3
.
8 0
.
99 6 6
一卜
3
.
4
5
.
0 书
2
,
8 0
.
9 1 4 8
3
。
O
4
。
6 .
3 2 0
.
9 9 5 6
荷叶制品 24
l 2
6
豆腐制品 24
1 2
6
高压蒸制品 24
1 2
6
0 9 5 8 2
0
.
9 3 18
0
.
9 5 67
、 一 8 , 中期分裂相细胞 2 40 个 /组 ,与 CM C一 N a 组比较
,
P < 0
.
0 5 朴
份 尸 < 0 . 0 1 苍 圣 份 尸 < 0 . 0 5
品在剂量 12 、 6 m g k/ g 时均无致变性 , 说明
藤黄经过炮制后在一定条件下可降低其致变
性 。各炮制品同一剂量组之间无显著性差异 ,
即各种辅料及加热方式炮制藤黄并不影响其
致变程度的降低 。
藤黄各组对小鼠骨髓细胞中 P C sE M N
和 s c E 影响具有一定的量效关系 , 其致变性
随着剂量的增 加而增强 。 藤黄临床常用量
0
.
03 一 0 . 06 9 / d , 按人体表面积折算小 鼠等
效剂量为 3 . 9一 7 . 8 m g k/ g ,提示棒到居临床用
量 ,生品诱变的可能性大 ,炮制品诱变的可能
性较小 。 从细胞遗传毒理角度可以说明古人
炮制藤黄降低毒性是有一定道理 。
藤黄生品及其炮制品的薄层层析图谱未
显示出各样 品组分之间的差异性 , 藤黄各组
致变性的变化可能在于某些致变成分量的变
化 ,其致变的物质基础有待进一步研究 。
参 考 文 献
1 H e n d e r s o n l
, e t a l
.
M u t R e s
,
1 9 84
,
1 2 6 ( 1 )
: 4 7
2 王戈华 , 等 . 遗传与疾病 , 王95 5 , 5 ( 4 ) : 2 1 0
( 1 9 9 5
一
0 8
一
1 4 )
n甘4QJ80
,1,é吐几连ō14Qù1份力勺J夕é宁曰21
.
1,CI乙上,一
20416
6 1 7
豆腐制品 24 25
1 2 1 4
6 1 5
高压燕制品 24 23
12 1 6
6 1 1 2
.
2
, 二 s , P C E 数 50 0 0 个 /组 ,与 C M C 一N a 组比较
. 尸 < 0 . 0 5 二尸 < 0 . 0 1 带 . 钾 尸 < 0 . 0 0 1
3 讨论与小结
M N 形成和诱发 S C E 是研究生物体内
受到致突变剂作用而引起遗传学损伤的两种
方法 〔` 〕 ,两者检测结果具有一致性 。 P C sE M N
代表染色体断裂及纺锤体损伤的过程 , 增加
染 色体损伤 程度 可增 加 M N 率 ; S C E 代表
D N A 损伤和继发性修复过程 ,增加 D N A 分
子损伤或削弱 D N A 修复能力均可增加 S C E
频率 〔幻 , 二者增加均说明在此条件下具有诱
变活性物质存在 。
研究结果表明 , 藤黄生 品在剂量 24 、 12
m g k/ g 时 , 具有极显著的致变性 , 藤黄炮制
品在剂量 24 m g / k g 时 , 也具有显著的致变
性 , 但 远 远 弱 于 生 品 同 一 剂 量 组 ( 尸 <
0
. 。。 1 ) 。 藤黄生品在剂量 6 m g / k g 时及炮制