全 文 ：· 药剂与工艺 ·
H P L C 法和 U V 法测定复方五子颗粒剂中
淫羊霍试和总黄酮含量
湖南中医学院药剂教研室 (长沙 4 1 0 0 0 7) 黄桂芳 辛 罗杰英
摘 要 应用 H P L C法测定复方五子颗粒剂有效成分淫羊霍贰含量 , 其结果为 0 . 0 50 % , R SD
0
.
72 %
,应用 U V 法 (三波长 )测定该颗粒剂有效部位淫羊覆总黄酮含量 ,结果为 0 . 120 % , R S D 3 . 8 % 。
H P L C 法分离效果好 ,可用于复方单一成分含量测定 , 而 U V 法宜用于复方中有效部位含量测定 。
关键词 H P L C U V 淫羊蕾贰 淫羊蕾总黄酮 含量
复方五子颗粒剂主药为淫羊霍 。 淫羊霍
为历次版本的《中华人民共和国药典 》收载的
常用 中药 , 具有温肾壮阳 , 祛风除湿之功效 。
为 小巢科植物淫 羊霍 EP im ed iu m ber v ic *
m u m M a x i n
, 箭 叶 淫 羊 霍 E . s a g i t t a t u m
M a x im
, 柔 毛淫羊蕾 E . P u be s c e n s M a x i n , 巫
山淫羊蕾 E . 二 u s h a n e n s e T . 5 . y i n g , 朝鲜淫
羊霍 E . k o er a n u m N a k a i 的干燥地上部分 〔` 〕 。
其有效成分主要为淫羊霍试 ,其有效部位为
总黄酮类 。 作者建立了 H P L C 法测定该颗粒
剂 中淫羊霍贰含量和 U V 法测定其总黄酮
含量的方法 ,进行了方法学考察 ,并对其结果
进行了分析比较 。 为该颗粒剂质量标准中的
定量研究提供方法 。
1 H P L C 法测定淫羊霍试含量
1
.
1 仪器与试药 : 日本岛津 L C 一 4 A 高效液
相色谱仪 ; C 一 R Z A X 数据处理机 ; S P D 一 ZA 紫
外检测器 ; C T O 一 ZA 恒温柱 箱 ; 微量进样器
1 0川 ;超声波清洗器 L X 一 1 0 0 (北京医疗设备
二厂 ) 。 试剂 : 甲醇为色谱纯 , 水为重蒸馏水 ,
乙酸乙酷分析纯 。药材 : 淫羊蕾药材购 自省药
材公司 , 经省药检所检定 ,符合药典标准 ,但
不是单一品种 ;淫羊霍对照品 (中国药品生物
制品检定所 ) ;复方五子颗粒剂 ( 自制 ) 。
l
·
2 色 谱 条 件 : 色谱柱 : S p h e r i s o r b C 1 8 ,
5拌m , 必 4 · 6 X 15 Om m ; 流动相 : 甲醇 一水 ( 5 0 :
5 0 ) ;流速 : 1 . o m l /m i n ; 柱温 2 8 ℃ ;检测波长 :
2 7o n m ; 灵敏度 : 0 . 0 2 A U F S ;进样量 : 10拜l 。 上
述 色谱条件下 , 淫 羊霍贰峰保留时间约为
1 6
.
3m i n
。
.1 3 对照品 、 待测液 、 空白液的制备
1
·
.3 1 对照品液的制备 : 精密称取经五氧化
二 磷 干 燥 至 恒 重 的 淫 羊 霍 贰 对 照 品
1
·
6 8m g
, 置 2 5m l 容量瓶中 , 加甲醇 1 3 m l 使
溶 解后 , 加 水 稀 释至 刻 度 , 即得 ( 67 . 2拌g /
m l )
。
1
.
3
.
2 待测 液的制备 : 精密称取样 品约
.0 59 加水溶解后 , 用乙酸乙醋 Z om l 超声波
提取 , 除去脂不溶性杂质 , 乙酸乙酷蒸干 , 残
渣用 13 m l 甲醇溶解 , 移至 25 m l 量瓶中 , 用
1 0%的 N a C I稀释至刻度 , 再冷藏 (0 ℃以下 )
3 0 m in 使蛋白质沉淀 , 微孔滤膜滤去蛋白质
沉淀 ,即得供试品溶液 。
L .3 3 空白液的制备 : 取缺淫羊霍的阴性样
品适量 ,制法同待测液 。
1
.
4 样品测定 : 取对照品液 、 样品待测液 、 样
品加对照品液 、 空白液分别进样测试 ,其结果
见图 1 。
寮
A d d r e s s
:
H
u a n g G u if
a n g
, 块 p a r t m e n t o f P h a r m a e e u t ie s , H u n a n C o l le g e o f T r a d i t io n a l C h i n e s e
M
e d i e i n e
,
C h a n g s h a
·
5 2 6
·
以
1
.
|
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à
十品图对照品
液色谱图 样品液色谱 图
样品
对照
色 i件
空 白液
(无淫羊霍 )色讲图
图 1 H P L C 图谱
从以上结果可知 , 前三者色谱图中淫羊
霍贰保留时间相同处有相同色谱峰 ,而空 白
液则无 。 证明该颗粒剂处方 中其它成分对淫
羊蕾贰的测定无干扰 。
取不同量对照品液进样 ,测得淫羊霍贰
0
.
13 一 .0 81 仁g 范围内峰面积与进样量 印 g )
的回归方 程为 A 一 1 . 8 85 x 10 ℃ 一 1 . 15 4 x
1护 , r 一 0 . 9 9 9 9 。 据此对样品进行含量测定 ,
以外标法计算 , 即得 。 计算公式为 :
含量一 样品峰面积 x 对照品溶液 浓度 x 稀释倍数对照品溶液峰面积 x w (取样量 )
结果见表 1 。
表 1 六批复方五子颗粒剂淫羊
毯试含量测定结果 (n ~ 3)
样品
淫羊霍贰含量 0 . 0 5 9 0 . 0 5 6 0 . 0 5 7 0 . 0 4 6 0 . 04 2 0 . 0 4 2 0 · 0 5 0士
( g / g )%
1
.
5 精密度 : 精密吸取同一对照品液 , 重复
进样 5 次 , 每次 10 川 , 淫羊霍贰峰面积 R S D
为 1 . 2 3 % 。
1
.
6 重复性 : 同一批样品取 5 份分别按拟定
的含 量测定方法测定 , 其含量测 定结果的
R S D 为 3 . 5% 。
1
.
7 稳定性 : 同一批样品制成待测液当天进
行含量测 定 , d3 后再测定一次 , 两次结果的
R SD 为 0 . 6 9% 。
《中草药 》 2 9 9 6 年第 2 7 卷第 9 期
1
.
8 回收率 :取 已知含量的同一批样品 5份
(含量为 0 . 0 5 9 1% ) ,各加水 l o m l , 超声波振
荡使溶解后 ,各精密加入一定浓度的对照品
溶液 2 . 0 、 4 . 0 、 6 . 0 、 8 . 0 、 1 2 . o m l ,于 8 0℃水浴
上将甲醇挥干 ,照样品测定方法进行测定 , 计
算回收率 ,其平均回收率为 97 . 84 % , R S D 为
1
.
6 7%
。
2 U V 法测定淫羊霍总黄酮的含量
2
.
1 仪器与试药 : 日本岛津 U V 一 2 65 F W 型
紫 外 分 光 光 度仪 ; 层 析 柱 ( 3 0 X cZ m ) ;
’
T G 32 8 B 光子读数分析天平 。 试剂 : 无水乙醇
为分析纯 ;聚酞胺为层析用 。药材 、对照品 、 样
品同 H P L C 法 。
2
.
2 对照品 、 待测液 、 空白液的制备
2
.
2
. 及 对照 品液 的制备 : 精密称取 6 . g m g
淫羊霍贰对照品 , 用 70 % 乙醇溶解 , 定容于
l o o m l 容量瓶 ,其浓度为 6 9产g /m l 。
2
.
2
.
2 待测液的制备 : 精密称取样品约 g4 ,
加 7 0 % 乙 醇 一s o m l 回流 1 . s h , 滤 渣再 用
7 0% 乙醇 75 m l 回流 o . hs ,过滤 ,合并两次滤
液 , 回收乙醇 , 定容于 s o m l 容量瓶中 。 称取
过 10 0 目筛的聚酞胺细粉 g4 ,湿法上柱 ( 30
x cZ m 柱 ) ,取上述 10 m l 提取液与约 0 . 5 9 聚
酞胺细粉混匀 ,水浴上蒸干 ,挥至无乙醇味 ,
上柱 。 先 用 50 m l 蒸 馏 水洗 脱 , 弃 去 , 再 用
1 5 o m l 无水 乙醇洗脱 , 收集醇洗 脱液 , 在水
浴上挥尽乙醇 , 再以 70 % 乙 醇为溶媒 ,使之
溶解 , 定容于 10 om l 容量瓶中 ,取 10 m l 上述
液稀释为 1 0 o m l ,即为样液 。 定量药材同法处
理 。
2
.
2
.
3 空白液的制备 : 称取适量不含淫羊霍
的样品 ,处理同上即得 。
2
.
3 三 波 长选择川 : 以上各种试 液 , 均 以
7 0%的乙醇为对照 ,在 日本岛津 U V 一 2 6 5 FW
紫外分光光度仪上扫描 。 波长范围为 2 0 一
4 0 0 n m
, 吸收度为 。一 1 ,得如下曲线 。
选择 空白液的最高吸收峰 2 78 · sn m 为
久, , 淫羊蕾贰的特征吸收峰 2 69 . 6n m 为 A: ,
在空白液曲线上通过 入1 、 入: 两点作直线交于
曲线上一点 2 4 3 n m , 故在 2 4 3~ 2 4 4之间变动
·
5 2 7
.
入3 ,在 U v 一 2 65 F w 型紫外仪上测定空 白液 从
一入3 的吸收度 ,从紫外仪上读出△ A ,见表 2 。
么 4 样品测定 :取不同量淫羊蕾贰对照液制
成 1 0拌1 7 0% E t O H 液 , 在 选 定三 波 长 测
△ A , 在 3一 40 拜g 范围 内 , 测得 C 一△A 回归
方程 : C ~ 7 5 . 7 6 4△ A 一 0 . 3 6 2 3 , r 一 0 . 99 9 5 。
据此对样品进行含量测定 ,测得△ A , 由公式
C X 5 0 0 0
W 样 X 10
6
量 ( g / g )
3
.
8%
。
x 10 o %
,求得淫羊霍总黄酮百分含
。 结果 为平均 含量 0 . 120 % , R SD
。势.八吕曰
-,(:I限件以夙
奋侧侣心应.`
、 、、、叭
谓乙 图
.
图 2
一 一空 白
各试液萦外吸收曲线
一待测液
一淫羊粗药材
-一对照
表 2 不同组合波长与△ A 的关系
入 z ( n m )
2 7 8
。
5
2 7 8
。
5
2 7 8
.
5
2 7 8
。
5
2 7 8
。
5
入2 ( n m )
2 6 9
.
6
2 6 9
.
6
2 6 9
。
6
2 6 9
.
6
2 6 9
。
6
入s ( n m )
2 4 3
.
0
2 4 3
。
5
2 4 3
。
6
2 4 3
.
7
2 4 3
.
8
0
。
0 0 1 6
0
。
0 0 0 0
0
.
0 0 0 5
0
.
0 0 0 7
0
.
0 0 0 8
由上可知 , 使△ A 一 。 的三个组合波长应
为 2 7 8 . s n m , 2 6 9 . 6 n m , 2 4 3 . s n m 。 在这三个
波长测得样品的△ A 值已消除干扰 。 通过不
同浓度的空白液检验 , △ A 均趋于 。 , 三波长
选择正确 。
D e t e m i n a t i o n o f I e a r i i n a n d F l a v o n o i d S
2
.
5 回收率测定 : 取 sm l 对照液 加入精密
称定的样品中 (约 4 9 ) ,按前述样品处理法处
理并测 定 含量 , 测得平均 回收率为 89 % ,
R S D 4
.
8%
。
3 讨论
两法比较 , H P L C 法简便 、 分离效果好 ,
方法可靠 ,适宜单一化学成分含量测定 ,可作
为质量标准定量指标 。 而 U V 法属计算法 ,
分离效果差 , 待测液处理繁杂 , 回收率低 , 但
对于样品中有效部位检测有一定意义 。 中药
为复方给药 , 体现的是整体效应 、综合作用 ,
单一化学成分作为定量指标难以完全代表药
物疗效 ,如结合有效部位含量测定则较为全
面反映该制剂质量 。
参 考 文 献
1 中华人民共和国药典 . 1 9 90 年版 , 2 91 页
2 孟 宪好 , 等 . 中成药分析 . 北京 : 人 民 卫生出版社 ,
1 9 9 0
.
54
,
5 6
( 1 9 9 6
一
0 3一 0 5 收稿 )
i n C o
一
W
u 幼 G r a n u l e b y H P L C a n d U V
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A n H P L C m e t h o d fo r t h e q u a n t i t a t iv e d e t e r m in a t io n o f ie a r ii n a n d a n U V m e th od fo
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0
.
0 5 0 %
,
R SD = 0
.
7 2%
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e a m o u n t o f fl a v o n o id s w a s 0
.
120%
,
R S D = 3
.
8 %
.
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毯台屯召是腐 是住屯召之台是台召宙忍召易盆毯召屯召习召妞宙是有妞名 妞名 屯召 赶宙妞有 是召屯侣 之召翻宙屯召召台是召忍召名召毯台弓盆屯台妞台屯召趁召之召妞二g 是召是台
《 中 草 药 》 杂 志 欢 迎 刊 登 广 告
一
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