全 文 ：
, ,
一
一
用生物检定法测定大蒜油中大蒜辣素
和大蒜新素的含量
湖南医药工业研究所 长沙 周重 阳 带 陈海波 罗 艳 邓 青 赵 棠
摘 要 利用大蒜提取物中大蒜辣素和大蒜新素具有抗菌作用这一特点 , 用生物检定方法进行检
测 , 结果与气相色谱法测得结果一致 。
关键词 大蒜油 大蒜辣素 大蒜新素 生物检定
大蒜属百合科植物大蒜 、
。 大蒜 中多种化学成分都有药用价值 , 其
中大蒜油 中的大蒜辣素和大蒜新素是很好的
抗菌药物 , 对白色念珠菌 、隐球菌等有明显的
抑制作用 , 对细菌引起的痢疾疗效确切 ,对呼
吸道 、消化道 、脑膜炎 、肠道等疾病有效率达
一 , 是一种疗效好 , 毒副作用小 , 有
发展前途的天然抗菌药物 。 我们报道的是用
生物检定法中的三剂量法测定大蒜油中大蒜
辣素和大蒜新素含量的研究 。
材料
原材料 湖南湘阴县产紫皮大蒜 俘一环糊
精 陕西志丹县生物化工厂生产 , 日一 。
生物检测材料 试验菌 大肠杆菌 〔
〕。
培养基 培养基 版《中华人民共
和国药典 》附录 页 。
对照 品 大蒜油 山东苍 山县大蒜制 品
厂 。
提取和制备
大蒜油的提取 取去紫皮独蒜 。。。 ,
用 一 组织破碎匀浆机破碎 , 加蒸馏水 。。
。 水蒸汽蒸馏下收集馏液约 , 静
置 , 分出部分油层 , 剩余溶液用氯仿萃取
次 , 取两次氯仿层合并 , 于水浴上 回收氯仿 。
残 留物与挥发油合并得大蒜油 。
大蒜油包结物 的制备 将大蒜 油和 各
加入到饱和 乙醇 中 , 水浴 ℃搅拌
至无油滴 , 静置 , 过滤 , 取沉淀物于 ℃下干
燥 , 得白色大蒜油粉 , 即大蒜油 件环糊精包结
物 。
用生物检定法测定其抗菌物质含量
检定方法按照《中华人 民共和国药典》
版二 部附录 一 页进行 配制检定
培养基和大肠杆菌增菌培养基 制备合适的
菌悬液 在半无菌室完成滴样操作 。
制备无菌双碟
标记无菌双碟 , 每个无菌双碟加入
溶化好的 号培养基 , 让其自然凝固 ,
作底层 。
将 计算好的大 肠杆 菌菌 悬液
加入另外 班 号培养基中 ,摇匀 , 每
个双碟加入 一 。 摇匀作菌层 , 备用 。
标准品和样品的制备 大蒜油中以大蒜
带 , ,
· ·
辣素和大蒜新素具有抗菌作 用 , 且油 中两者
的相对含量约为 。用 浓度的乙醇
为溶剂和稀释剂 , 将大蒜油粉和对照 品大蒜
油按 。 剂距按高 、中 、低计算并稀释 , 得
相对含量分别为 样品大蒜油粉为 , 则 , 一
, 一 , d t 3 = 5 . 0 % 。标示量(A T )
为 76% 。 对照品大蒜油为 s , 则 ds , 一 3.2 % ,
则 dsZ= 4.0 % , 则 dS3一 5.0 % 。
3
.
3 滴样和培养 ;在制备好的每一个双碟中
以等距离均匀安置无菌钢管 6 个 , 间隔滴入
样品和对照品高 、 中 、低 3 剂量 , 盖上陶瓦盖 ,
37 ℃恒温箱培养 18 h , 量取抑菌圈直径 (Y ) ,
并进行数理统计 。
3
.
4 计算和统计结果 :按《中华人民共和 国
药典》199 5 版二部附录 X lv )生物检定统计法
三剂量法统计结果 , 将培养好的双碟量取抑
菌圈直径并计算抑菌结果 , 见表 1
表 1 大蒜油包结物抑菌结果
dsl dsZ ds3 dtl dtZ dt, 艺Y m
1 6 , 0 5
1
6
1 0
1
6
.
3 0
1 6
.
3 0
: :
.
5
0 1
6
1 0
1
6
.
3
0
5
0 1
6
.
0
5
1 6
.
1 5
1 6
.
0
5
1 6
.
3
0
1 6
.
4 5 9 7
.
7
0
1
6
.
4
0 9
7
.
5
0
1 6
.
5
0
9
7
.
7 0
1 6
.
6
0
9 8
.
3
0
1
6
.
5 5
9
8
.
4 0一Y16.40m)16.2016.4016.4516.4016.016.1516.3516.098.6516.515.9516.5016.2016.4516.5097.8016.2015, 9 0 1 6 . 4 5 1 6 . 1 5 1 6 . 3 5 1 6 . 5 0 9 7 . 7 0
1 6
.
3
5
1 5
.
9 5 1
6
.
5 5
1 6
.
3 0 1
6
.
4 0 1
6
.
5 5 9 8
.
1 5
1
6
.
4 0
艺Y (K ) 1 45 .1 0 1 47 .1 5 1 48 .3 5 1 45 .5 5 14 7. 10 14 8. 65 88 1. 80
52 5 2 5 3 tl tZ t3
3. 4. 1 通过剂间变异分析和可靠性检验得
表 2 中各项结果 。
表 2 大蒜油包结物含量测定的可靠性检验结果
变异来源 自由度 差方和
已J亡巴」n八曰00乡卜V
试品间
回归
偏离平行
二次曲线
反向二次曲线
剂间
碟间
误差
总计
0.0097407
1.12006944
0.000625
0.00689815
0.00689815
1.143082
0.208572
0.399828
1.751482
方差
0.0097407
1.12006944
0.000625
0.00689815
0 00689815
0.2286164
0 .0260715
0 .0099957(52)
< 1
112.05518 份
) 0
.
0 5
< 0 0 1
2 2
.
8 7 1 4 8
怪
2
.
6 0 8 2 7
< 0
.
0 1
> 0
.
0 5
: :
F ( 1
,
4 0
,
0
.
0 5 ) = 4
.
0 8 F ( 1
,
4 0
,
0
.
0 1 ) 一 7 . 3 1
通过数理统计分析 , 回归非常显著(p <
0.劝1 ) ,偏离平行 、二次曲线 、反向二次曲线均
不显著(尸> 0 . 05 ) , 实验结果成立 。 组内差异
非常显著(尸< 0 . 0 1 ) ,分除组内差异 , 可以减
少实验误差 。
各项差方和如下 :
差方和 (总 )一 1.75 148 2 f= 9 只 6 一 1 = 53
差方和 (剂)= 1.14308 2 f= 6一 l = 5
差方和 (碟)= 0.208572 f= 9一 l= 8
差方 和 (误 差 ): 1.751482 一 1 · 4 3 0 8 2 一
0 .20 8572 = 0. 3998 28 f= 53 一 5 一 8 = 40
3. 4. 2 通过对大蒜辣素相对含量及可信限
的计算得大蒜包结物 中大蒜新素和大蒜辣素
的相对含量为 76 .26 % , 其可信限为 72 .81 %
《中草药 》1 9 9 7 年第 28 卷第 1 期
~ 79 . 8 % 与文献报道的气相色谱法分析所
测含量相近 , 说明用生物检定法测定大蒜油
中抗菌物质的含量方法可行 。
4 结论与小结
4.1 大蒜油中含有大量的抗菌物质 , 是一种
天然的抗菌药物 , 但 由于大蒜油具有挥发
性 , 有特异性气味 , 且长时间不易消失 ;大蒜
油在空气中容易氧化变质 , 对粘膜有较强的
刺激性 , 由于这样一些特点 ,大蒜的药用开发
一直进展很慢 , 我们利用 件环糊精的分子特
点〔‘, , 对大蒜提取物中的大蒜油进行包结 ,用
生物方法和气相色谱法测定 , 得到了相似的
结果 , 说明我们使用的工艺是可行的 〔2〕 。
4
.
2 大蒜油含量测定法有薄层层析分析法 、
·
1 9
·
气相色谱法 〔3〕等多种 , 通过多年的实践 , 证明 蒜油中抗菌物质的含量进行了一些探索和研
这些方法都是可行的 。但这些方法中 , 有些需 究 , 并用气相色谱法 比较(表 3) , 测得结果基
要高级的仪器 , 或 比较昂贵的分析试剂 。基于 本相似 。
这种情况 , 我大大们对用生物检定法测定大
表 3 大蒜包结物中主要成分的相对含量
主要成分的相对含量 (% )
样品 —123456大蒜包结物 (0 .1 9 + o.s m l 甲醇 )大蒜油(9 m L 油+ 0.5 m l 甲醇) :.:: :⋯:; 34.913410 :: 42.6743。 7 6 : . : :注 :1一二烯丙基一硫化物 2一甲基烯丙基二硫化物 3一二烯丙基二硫化物 (大 蒜辣素) 4一甲基烯丙基三硫化物 5一二烯丙基三硫化物(大蒜新素) 6一未鉴 定(下同)4 . 3 本生物检定法用 20 % 的乙醇作溶解介质是根据文献报道采用的 , 同时在实验室进行了验证和抑菌作用考察 。参 考 文 献 张崇璞 , 等.药学通报 , 1 9 8 7 , 2 2 ( 2 ) : 1 0 1沈联慈 , 等 .中草药 , 1 9 9 2 , 2 3 ( 1 0 ) : 5 1 8张立萍 , 等.中成药 , 1 9 8 9 , 1 1 ( 5 ) : 3 5( 1 9 9 6 一 0 1 一 1 4 收稿)薄层扫描法测定茶多酚中咖啡因的含量
广东省中医研究所(广州 510095) 刘法锦 带 孙冬梅 陈路林
摘 要 用薄层扫描法对茶多酚中咖啡因的含量进行测定 , 方法简便 ,结果准确 , 重现性好 ,平均
回收率 10 0.1% , R S D % 一 2 .90 , 最低检测限为 0.1 拌g 。
关键词 茶多酚 咖啡因 薄层扫描
茶多酚是从茶 叶中提取分离得到的一种
多酚类化合物复合体 , 近年研究表明茶多酚
具有多种药效 〔‘〕 , 在食品 、化妆品等方面用途
也较广泛 。由于茶叶中咖啡因的含量较高 , 在
提取茶多酚时 , 咖啡因也随之提取出来 , 这样
影响了茶多酚的药效及用途 , 同时也限制了
茶多酚及其产品的出口 。 我们采用薄层扫描
法 , 在 27 6 nm 波长处进行吸收扫描 , 对茶多
酚中的咖啡因进行定量 , 方法简便 、灵敏 、稳
定 、快速 , 重现性好 。
1 仪器 、试药及试剂
薄层扫描仪 l (C A M A G ) e om paq 456
计算机系统 , N A N O M A T I 点样仪 (C A M -
A G ) , 定量点样毛细管 (C A M A G ) 。 P B Q 一 l
薄层 自动铺板器 (重庆 ) , 硅胶 G (青岛海洋化
工 厂) , 咖啡因对照品 (中国药品生物制品检
定所 ) , 茶多酚 (广东英德英南科技联营实业
有限公司生产 , 生产 日期 :19 4一 09 一 1 8 ) ,所用
试剂均为分析纯 。
2 实验条件的选择
2.1 对照品溶液 的制备 :取咖啡因对照品 ,
精密称定 , 用 甲醇制成 1 m g /m L 的溶液 , 作
为对照品溶液 。
2
.
2 样 品供试液 的制备 :取茶多酚样 品约
0.1 9 , 精密称定 , 置 5 m L 量瓶中 , 加 甲醇溶
解稀释至刻度 , 摇匀 , 作为样品供试液 。
带 A d d r e s s
·
2 0
·
L i u F a i i
n , G u a n g d o n g P r o v e n e i a l I n s t i t u t e o f T r a d i t i
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l C h i
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