全 文 ：气相色谱法 〔 3〕等多种 ,通过多年的实践 ,证明 蒜油中抗菌物质的含量进行了一些探索和研
这些方法都是可行的 。但这些方法中 ,有些需 究 ,并用气相色谱法 比较 (表 3 ) ,测得结果基
要高级的仪器 ,或 比较昂贵的分析试剂 。基于 本相似 。
这种情况 , 我大大们对用生物检定法测定大
表 3 大蒜包结物中主要成分的相对含量
主要成分的相对含量 ( % )
样品 —1 2 3 4 5 6大蒜包结物 (0 . 1 9 + o . s m l 甲醇 )大蒜油 (9 m L 油 + 0 . 5 m l 甲醇 ) :. :: :…:; 3 4 . 9 13 4 1 0 :: 4 2 . 6 74 3 。 7 6 :. ::注 : 1一二烯丙基一硫化物 2一甲基烯丙基二硫化物 3一二烯丙基二硫化物 (大蒜辣素 ) 4一甲基烯丙基三硫化物 5一二烯丙基三硫化物 (大蒜新素 ) 6一未鉴 定 (下同 )4 . 3 本生物检定法用 20 %的乙醇作溶解介质是根据文献报道采用的 , 同时在实验室进行了验证和抑菌作用考察 。参 考 文 献 张崇璞 , 等 . 药学通报 , 1 9 8 7 , 2 2 ( 2 ) : 1 0 1沈联慈 ,等 . 中草药 , 1 9 9 2 , 2 3 ( 1 0 ) : 5 1 8张立萍 , 等 . 中成药 , 1 9 8 9 , 1 1 ( 5 ) : 3 5( 1 9 9 6 一 0 1一 1 4 收稿 )薄层扫描法测定茶多酚中咖啡因的含量
广东省中医研究所 (广州 5 1 0 0 9 5) 刘法锦 带 孙冬梅 陈路林
摘 要 用薄层扫描法对茶多酚中咖啡因的含量进行测定 , 方法简便 ,结果准确 , 重现性好 ,平均
回收率 10 0 . 1% , R S D % 一 2 . 90 ,最低检测限为 0 . 1 拌 g 。
关键词 茶多酚 咖啡因 薄层扫描
茶多酚是从茶 叶中提取分离得到的一种
多酚类化合物复合体 ,近年研究表明茶多酚
具有多种药效 〔` 〕 , 在食品 、 化妆品等方面用途
也较广泛 。 由于茶叶中咖啡因的含量较高 ,在
提取茶多酚时 , 咖啡因也随之提取出来 ,这样
影响了茶多酚的药效及用途 , 同时也限制了
茶多酚及其产品的出口 。 我们采用薄层扫描
法 ,在 27 6 n m 波长处进行吸收扫描 ,对茶多
酚中的咖啡因进行定量 ,方法简便 、 灵敏 、 稳
定 、 快速 ,重现性好 。
1 仪器 、 试药及试剂
薄层扫描仪 l ( C A M A G ) e o m p a q 4 5 6
计算机系统 , N A N O M A T I 点样仪 ( C A M -
A G )
,定量点样毛细管 ( C A M A G ) 。 P B Q 一 l
薄层 自动铺板器 (重庆 ) , 硅胶 G (青岛海洋化
工 厂 ) , 咖啡因对照品 ( 中国药品生物制品检
定所 ) , 茶多酚 (广东英德英南科技联营实业
有限公司生产 , 生产 日期 : 1 9 4一 09 一 1 8 ) ,所用
试剂均为分析纯 。
2 实验条件的选择
2
.
1 对照品溶液 的制备 : 取咖啡因对照品 ,
精密称定 , 用 甲醇制成 1 m g /m L 的溶液 ,作
为对照品溶液 。
2
.
2 样 品供试液 的制备 : 取茶多酚样 品约
0
.
1 9
, 精密称定 ,置 5 m L 量瓶中 ,加 甲醇溶
解稀释至刻度 ,摇匀 ,作为样品供试液 。
带 A d d r e s s
·
2 0
·
L iu F a i in
,
G u a n g d o n g P r o v e n e ia l I n s t i t u t e o f T r a d i t i
o n a
l C h in
e s e
M
e
d i
e i n e
,
G u a n g z h
o u
2
.
3薄层条件 :用 0 . 3 %CM C一 Na 为粘合剂
的硅胶 G F 2 54板 (20 em只 10 em ), 用微量毛细
管分别 吸取 上述对照品及样 品供试液各 2
拜L ,点样于同一薄层板上 , 以甲苯一丙酮 ( 6 :
4) 为展开剂 ,展开 ,展距 8 c m ,取出 , 晾干 。
2
.
4 测定波长的选择 : 分别吸取对照品及样
品供试液各 2 拌L , 点于 同一薄层板上 , 以上
述条件展开后 , 用氛灯在 20 0一 40 0 n m 波长
范围内 ,对各相应的斑点进行光谱扫描 ,结果
均在 2 76 n m 波长处有最大吸收 。
3 薄层色谱原位光密度定量测定
光源 : 氛灯 。 扫描方式 : 吸收扫描 , 波长
2 7 6 n m
,外标法定量 。
3
.
1 标准 曲线 : 定量吸取对照品溶液 2 、 4 、
6
、
8
、
10 拌L ,点于薄层板上 ,按上述实验方法
展开 ,扫描 , 线性回归得标准曲线 。 回归方程 :
Y 一 1 3 2 8 . 6 6 + 2 2 1 . 4 3X , r = 0 . 9 9 9 6 ,线性范
围 : 1 . 9 2一 9 . 6 0 拼g 。
3
.
2 精密度考察 : 定量吸取样品供试液点于
同一薄层板上 ,展开 ,测定 ,其峰面积分别为 :
2 2 8 5
、
2 2 6 3
、
2 2 7 3
、
2 2 9 6
、
2 2 4 8
、
2 2 9 1
,
R S D % =
0
.
8 0
。
3
.
3 稳定性试验 : 定量吸取样品供试液点于
同一薄层板上 ,按实验方法分别在不同的时
间 (0 、 1 、 歇 3 h ) 扫描测定 , 其峰面 积分别 为
2 4 4 5
、
2 4 2 2
、
2 4 1 5
、
2 4 2 1
。
R S D % = 0
.
5 4
。 实验
结果表明 ,薄层板展开 , 吹干溶剂 后 , 3 h 内
扫描测定 ,结果较为稳定 。
3
.
4 回收试验 : 称取茶多酚适 量 ,按三种不
同的比例加入咖啡因对照品 , 按上述样 品供
试液制备方法制备 ,点样 , 薄层扫描 。 平均 回
收率为 1 0 0 . 1% , R S D = 2 . 9 0 % ( n = 6 ) 。
4 样品含量测定
照上述操作分别 吸取样 品供试液 2 . 。
川 J 点 样 , 同板随行点对照 品溶液 2 . 。 、 4 . 0
拜L , 同上法 展开 , 进行扫描测定 , 计算 , 结果
见表 1 。
表 1 茶多酚中咖啡因含量测定
编号 测 定 值 R S D %
9
.
3 3
9 5 8
9
.
4 4
9
.
52
9
.
5 1
9
.
3 9
9
.
4 6
9
.
4 7
9
.
4 1
5 讨论
5
.
1 咖啡因易溶于氯仿 , 将茶多酚溶于水后
用氯仿萃取也可 ,但没有本方法操作简便 ,直
接将样品溶于 甲醇后进行点样 , 含量测定结
果准确 , 回收率好 。
5
.
2 咖啡因的扫描测定波长有报道为 27 0 、
2 5 4 n m
, 我们采用原位吸收光谱对样品及对
照品进行扫描 , 确定二者的最大吸收波长为
2 7 6 n m
。
5
.
3 咖啡因的薄层条件文献曾有报道 〔2 , 3 〕 ,
我们采用 甲苯一丙酮 ( 6 : 4) 展开 , 时间短 , 斑
点集中 , R f 值适中 (约为 。 . 4) 。
5
.
4 本方法 灵敏度 高 , 最 低检出 限为 0 . 1
拜g ; 在 3 h 内测 定 , 结 果 稳 定 , 重现性 好 ,
R S D % 一 .0 5 4 ,可作为控制茶多酚 中咖啡 因
的质量检测方法 。
参 考 文 献
l 陈为钧 ,等 . 中草药 , 1 9 9 3 , 2 4 ( 9 ) : 4 9 3
2 中国药典 . 二部 . 1 9 90 . 3 01
3 朱 敏 ,等 . 中国中药杂志 , 1 9 9 2 , 1 7 ( 1 1 ) : 6 7 7
( 1 9 9 6
一
0 1
一
1 6 收稿 )
安徽高校联合培训部中医 、 兽医函授班招生
经省教委批准 ,第六期兽医 、 第十一期中医函授班继续向全国常年招生 。 使用全国高等院校统编教材 , 由
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《中草药 》 1 9 9 7 年第 28 卷第 1 期