全 文 :中国蔬菜 2013(20):77-81
CHINA VEGETABLES
收稿日期:2013-05-05;接受日期:2013-06-30
基金项目:国家公益性行业(农业)科研专项(201003029),国家自然科学基金项目(31360002)
作者简介:刘峰,男,硕士研究生,专业方向:植物病害及其生物防治,E-mail:598077502@qq.com
* 通讯作者(Corresponding author):姬广海,男,教授,博士生导师,专业方向:植物病害及其生物防治,E-mail:
jghai001@aliyun.com
云南和西藏十字花科蔬菜根肿病菌生理小种
鉴定
刘 峰 张丽辉 姬广海 *
(云南农业大学植物保护学院,云南昆明 650201)
摘 要:采用 Williams 划分十字花科作物根肿病菌生理小种的鉴别系统,对十字花科蔬菜根肿病的云
南省 42 个样品和西藏地区 13 个样品进行生理小种鉴定。结果表明:从云南省样品中鉴定出 9 个生理小种,
分别为 1 号、2 号、4 号、6 号、7 号、10 号、11 号、12 号和 13 号,从西藏自治区样品中鉴定出 4 个生理
小种,分别为 2 号、4 号、5 号和 7 号,其中,生理小种 4 号为这两个地区的优势小种,所占样品的比例
分别为 61.9% 和 53.8%。
关键词:云南省;西藏自治区;十字花科蔬菜根肿病;生理小种
中图分类号:S63 文献标识码:A 文章编号:1000-6346(2013)20-0077-05
Identification of Physiological Race of Plasmodiophora brassicae in Yunnan
and Tibet
LIU Feng,ZHANG Li-hui,JI Guang-hai*
(College of Plant Protection,Yunnan Agricultural University,Kunming 650201,Yunnan,China)
Abstract:We used 4 differential species of Williams A system to identify the main physiological
races of pathogens from 42 samples in Yunnan Province and 13 samples from Tibet Autonomous Region
suffered from Cruciferous vegetables clubroot.The results showed that 9 physiological races were
identified from Yunnan samples.They were NO.1,NO.2,NO.4,NO.6,NO.7,NO.10,NO.11,
NO.12 and NO.13.Four physiological races were identified from Tibet samples. They were NO.2,
NO.4,NO.5 and NO.7,among which NO.4 was advantages physiological race in these 2 areas,taking
61.9% and 53.8% of the samples, respectively.
Key words:Yunnan Province;Tibet Autonomous Region;Cruciferous vegetables clubroot;
Physiological race
十字花科蔬菜根肿病是由芸薹根肿病菌(Plasmodiophora brassicae)侵染引起的一种世界
性病害。该病最早发现于地中海西岸(英国,1737)和欧洲南部(前苏联列宁格勒,1872),现
在许多国家都有发生(杨永林,1990)。十字花科蔬菜根肿病是一种土传病害,能引起大白菜、
甘蓝、萝卜、普通白菜、青花菜、花椰菜等十字花科蔬菜根部膨大,并在肿大组织内部产生大
量的休眠孢子(杨家鸾 等,2002)。发病植株根系和地下茎部分或全部组织形成膨大的肿瘤,影
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响养分吸收和水分的运输,地上部出现营养不良和萎蔫,严重时导致植株未成熟而死亡(杨佩
文 等,2009)。
根肿病菌是专性寄生菌,存在生理小种的分化。自 Honig(1931)首次证明根肿病菌存在
生理小种分化以来,Ayers(1944)和 Kole(1955)对其生理小种分化进行了研究。Williams
(1966) 根 据 被 侵 染 的 4 种 十 字 花 科 植 物 品 种(Jersey Queen,Badger Shipper,Laurentian,
Wilhelmsburger)的反应类型制定了一个根肿病菌小种鉴别系统。按照 4 个寄主的排列组合,应
有 16 个小种,标示为小种 l~16。
近年来,根肿病在世界范围内发病日趋严重,尤其是芸薹属植物种植密集的地区,如亚洲、
北欧和北美。我国大部分省市均有根肿病发生(李金萍 等,2012)。云南、西藏是我国十字花科
蔬菜主产区,但根肿病日益严重,严重影响了十字花科蔬菜生产的发展,而目前云南仅江川地
区有关于根肿病菌 4 号生理小种的报道(沈向群 等,2009),而西藏自治区未见根肿病菌生理小
种分化及其分布的报道。本试验通过对云南、西藏自治区十字花科蔬菜根肿病菌进行生理小种
鉴定,以明确该区域生理小种的分化,并确定其优势生理小种,为该地区十字花科蔬菜生产和
抗根肿病育种奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试菌株 2011~2012 年从云南昆明、玉溪、曲靖、楚雄等十字花科蔬菜基地采集典型
根肿病样品 42 份,西藏十字花科根肿病的 13 份样品由西藏农牧学院旺姆教授提供。将新鲜的
膨大根瘤洗净后密封,在 -20℃冰箱中保存备用。
1.1.2 鉴别寄主 鉴别寄主为 2 个结球甘蓝品种 Jersey Queen 和 Badger Shipper,2 个芜菁甘蓝
品种 Laurentian 和 Wilhelmsburger,均由沈阳农业大学园艺学院沈向群教授提供。
1.2 鉴定方法
1.2.1 接种体准备 每份病根清洗干净取 15 g,研磨成匀浆,配制 100 mL 菌液,利用菌落计数
法调整菌液孢子浓度为 12×107 个·mL-1,将菌液加入到 300 g 风干草炭土中,搅拌均匀,其含
水量以手握成团、触之能散为宜,密封 48 h 以上,制成病菌土,病菌孢子浓度为 4 ×107 个·g-1
(杨永林,1990)。
1.2.2 接种方法 培养土按草炭∶蛭石∶珍珠岩为 2V∶1V∶1V 的比例配制,装入营养钵(规
格为 10 cm×10 cm) ,浇足底水,中心用实心棒插一深 3 cm、直径 2 cm 的圆穴,置入病菌土(沈
向群 等,2009)。每份病菌土分装 10 钵,每钵播 3 粒种子,均播在病菌土上,每份病菌土保苗
20 株以上。播种后苗床地温控制在 25 ℃,土壤湿度保持在 90% 左右,pH 值控制在 5.5~6.5(沈
向群 等,2009;王靖 等,2011),为病菌的发病营造良好的条件。
1.3 病情调查
接种后 45 d 进行病情调查,根据 Williams(1966)根肿病菌生理小种鉴别寄主抗、感病反应
(表 1)确定病菌的生理小种。
表 1 十字花科根肿病菌生理小种鉴别系统
鉴别品种
模式小种
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
结球甘蓝:Jersey Queen + + + + - + + - - + - + - - - -
结球甘蓝:Badger Shipper - + - + - - + - - + + - + + + -
芜菁甘蓝:Laurentian + + + + - - - + + - + - + - - -
芜菁甘蓝:Wilhelmsburger + - - + - - - - + + + + - + - +
注:+ 代表感病,- 代表抗病。
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2 结果与分析
2.1 云南省根肿病菌生理小种鉴定
对云南省不同地区的 42 份根肿病菌样品进行生理小种鉴定的结果显示(表 2):在云南采集
的 42 份根肿病菌样品共被鉴定为 9 个生理小种,分别为 1 号、2 号、4 号、6 号、7 号、10 号、
刘 峰等:云南和西藏十字花科蔬菜根肿病菌生理小种鉴定
表 2 云南根肿病菌生理小种鉴定
寄主 菌株来源
鉴别寄主反应
生理小种
Jersey Queen Badger Shipper Laurentian Wilhelmsburger
甘蓝 玉溪市通海县万家村 + + - - 7
大白菜 玉溪市通海县黄龙村 + + - - 7
大白菜 玉溪市通海县黄龙村 + + + - 2
大白菜 玉溪市通海县兴蒙乡 + - - - 6
大白菜 玉溪市通海县大河嘴 + + + + 4
甘蓝 玉溪市通海县达子营 + + + - 2
大白菜 玉溪市通海县达子营 + + + + 4
大白菜 玉溪市通海县金山村 + + - - 7
甘蓝 玉溪市通海县杨庄镇 + + + + 4
甘蓝 玉溪市通海县王武营 - + + - 13
大白菜 昆明市嵩明县阿子营 + + + + 4
普通白菜 昆明市嵩明县桥头村 + + + + 4
大白菜 昆明市嵩明县桥头村 - + + + 11
大白菜 昆明市嵩明县大官庄 + - + + 1
青花菜 昆明市嵩明县龙福村 + + - + 10
大白菜 昆明市嵩明县城 + + + + 4
青花菜 昆明市嵩明县上大摆 + + + + 4
青花菜 昆明市嵩明县上大摆 + + - + 10
青花菜 昆明市嵩明县下大摆 + + - - 7
大白菜 昆明市呈贡县城 + + + + 4
青花菜 昆明市呈贡马金铺 + + + - 2
大白菜 昆明市呈贡县斗南 + + + + 4
大白菜 昆明市呈贡马朗村 + + + + 4
大白菜 昆明市呈贡马金铺 + + + + 4
大白菜 楚雄州姚安县 + + + + 4
大白菜 楚雄州禄丰县郊区 + - - + 12
大白菜 楚雄州禄丰县朱家村 + + + + 4
青花菜 曲靖市沾益县盘江镇 + + + + 4
大白菜 曲靖市沾益县西平镇 + + + + 4
大白菜 曲靖市沾益县白水镇 + + + + 4
大白菜 曲靖市沾益县松木村 + + + + 4
普通白菜 曲靖市沾益县意光村 + + + + 4
大白菜 昆明市安宁市石坝村 + + + + 4
普通白菜 昆明市安宁木厂 + + + + 4
普通白菜 昆明市蒜村 + + + + 4
大白菜 昆明市小哨 + + + + 4
大白菜 昆明市小哨 + + + + 4
普通白菜 昆明市小哨 + + + + 4
大白菜 昆明市沙朗乡 + + + + 4
甘蓝 昆明市沙朗乡 + + + + 4
大白菜 大理市巍山县 + + - + 10
大白菜 大理市郊 + + - - 7
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11 号、12 号及 13 号。根肿病菌在云南省各主要蔬菜基地均有分布,而且生理小种十分丰富,
其中 4 号生理小种为云南省优势小种,占供试样品的 61.9%,其次为 7 号生理小种,占供试样品
的 11.9%,2 号和 10 号生理小种均占供试样品的 7.1%。
从云南省不同区域的小种数量上来看,玉溪市通海县、昆明市嵩明县根肿病菌生理小种种
类最多,其中通海县根肿病菌的小种分别为 2 号、4 号、6 号、7 号和 13 号,主要生理小种为 4
号和 7 号,各占 30%,嵩明县根肿病菌生理小种为 1 号、4 号、7 号、10 号和 11 号,主要生理
小种为 4 号,占 44.4%。其次是呈贡县和禄丰县,最少的是安宁市、沾益县和昆明市郊(包括小
哨、沙朗乡和蒜村),仅有 4 号小种。
2.2 西藏自治区根肿病菌生理小种鉴定
对来自西藏自治区的 13 份根肿病菌样品进行生理小种鉴定,结果显示(表 3):西藏自治区
13 份样品共鉴定出 4 个生理小种,分别为 2 号、4 号、5 号、7 号。其中 4 号为优势小种,所占
比例为 53.8%,7 号生理小种所占比例为 30.8%。
西藏自治区生理小种种类最多的是堆龙德庆县,分别为 2 号、4 号、5 号,最少的是墨竹正
卡县,生理小种为 4 号。
表 3 西藏根肿病菌生理小种鉴定
寄主 菌株来源
鉴别寄主反应
生理小种
Jersey Queen Badger Shipper Laurentian Wilhelmsburger
花椰菜 林芝县大柏树村 + + - - 7
甘蓝 林芝县大柏树村 + + - - 7
大白菜 林芝县觉木村 + + + + 4
乌塌菜 林芝县觉木村 + + + + 4
普通白菜 林芝县觉木村 + + + + 4
大白菜 林芝县巴吉村 + + + + 4
萝卜 堆龙德庆县 - - - - 5
大白菜 堆龙德庆县 + + + - 2
甘蓝 堆龙德庆县 + + + + 4
甘蓝 拉萨市郊 + + - - 7
甘蓝 拉萨市农科所 + + + + 4
茎瘤芥 拉萨市郊 + + - - 7
普通白菜 墨竹正卡县 + + + + 4
2.3 生理小种在各寄主上的分布情况
由表 2、3 可知,生理小种在不同寄主上的分布情况,侵染大白菜的根肿病菌生理小种种类
最多,有 8 个生理小种,分别为 1 号、2 号、4 号、6 号、7 号、10 号、11 号和 12 号,其次是
青花菜(2 号、4 号、7 号、10 号)和甘蓝(2 号、4 号、7 号、13 号),最少的是普通白菜(4 号)、
萝卜(5 号)、花椰菜(7 号)、乌塌菜(4 号)和茎瘤芥(7 号)。同时不同的寄主受侵染的根肿
病菌的小种类型也不完全相同。
研究发现,生理小种 4 号分布广泛,而且同一地区存在不同的生理小种。
3 结论与讨论
近年来,云南和西藏地区十字花科蔬菜种植面积不断增大,加上对根肿病具有抗性的品种
太少,导致十字花科蔬菜根肿病的发生日益严重。云南省蔬菜根肿病发生情况的调查结果表明,
昆明、玉溪、曲靖、楚雄、大理、保山、临沧地区均有根肿病发生,其中昆明、玉溪、曲靖地
区发病严重。而西藏自治区十字花科蔬菜根肿病发病极其普遍,露地、大棚甘蓝、花椰菜、大
白菜、普通白菜、萝卜、乌塌菜上均有发生,发病严重地块发病率达到 70%。病害发生与海拔
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没有直接关系。本试验通过对云南、西藏自治区十字花科蔬菜根肿病的调查以及生理小种的鉴定,
发现侵染大白菜的根肿病菌生理小种最多,有 8 个生理小种(1 号、2 号、4 号、6 号、7 号、10
号、11 号、12 号),4 号为优势小种,与沈向群等(2009)报道侵染大白菜的生理小种(2 号、
4 号、7 号、10 号、11 号)的结果基本一致。之前云南省江川县已有关于根肿病菌 4 号生理小
种的报道(沈向群 等,2009),和本试验云南省根肿病菌 4 号优势小种相同,但未见云南省其他
地区根肿病菌生理小种的报道。本试验结果还表明,大白菜上的根肿病菌生理小种有 8 种,甘
蓝和青花菜上有 4 种,其他十字花科蔬菜(普通白菜、花椰菜、乌塌菜、茎瘤芥、萝卜)上有 1
种,在不同寄主上既存在相同的生理小种,也存在不同的生理小种,这可能是由于不同根肿病
菌生理小种侵染不同的十字花科植物,还有待进一步论证。
由于在本试验中所采用的接种体为根瘤,没有进行单孢分离,可能存在不同根肿病菌孢子
混合侵染,同时,Osaki 等(2008)也发现,同一 Williams 小种在不同引物 RAPD 分析后,还
存在多个小种,所以在后续的试验中还需进行单孢接种验证。目前,我国的根肿病菌生理小种
研究工作尚处在初步阶段,无论是标样采集数量,还是采集地域分布,都在有限的范围之内。
同时,不同生理小种的单孢分离难度还比较大,毒性强弱也有差别(Xue & Cao,2008;李茜 等,
2012)。所以今后还要继续对该地区的十字花科蔬菜根肿病菌生理小种进行跟踪监测,以明确该
区域内根肿病的发生与变异特点,以便有针对性和有目标性地进行抗病育种,及时调整品种布局。
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