全 文 ：广 西 植 物 Guihaia　Jan．２０１４,３４(１):１２０－１２５　　　　　　　　　　 http://journal．gxzw．gxib．cn　
DOI:１０．３９６９/j．issn．１０００Ｇ３１４２．２０１４．０１．０２３
韦银凤,王瑞鑫,阮春燕,等．‘圣剑’洋桔梗植株高频再生体系建立及卡那霉素敏感性测定[J]．广西植物,２０１４,３４(１):１２０－１２５
WeiYF,WangRX,RuanCY,etal．EstablishmentofhighfrequencyregenerationsystemforEustomagrandiflorumcv．ExcaliburBluePicoteeand
determinationofkanamycinsensitivity[J]．Guihaia,２０１４,３４(１):１２０－１２５
‘圣剑’洋桔梗植株高频再生体系
建立及卡那霉素敏感性测定
韦银凤,王瑞鑫,阮春燕,梅谱成,严振亚,陈崇顺∗
(南京师范大学生命科学学院 江苏省生物多样性与生物技术重点实验室,南京２１００２３)
摘　要:洋桔梗是国际上十分流行的盆花和切花种类.以洋桔梗‘圣剑’无菌苗叶片为外植体,研究了６ＧBA
与NAA不同浓度组合对其不定芽再生的影响,并分别比较了不同浓度IBA和NAA诱导其生根的效果,测定
了该品种在不定芽再生时对卡那霉素(Km)的敏感性.结果表明:MS＋０．５mg􀅰LＧ１６ＧBA＋０．０１mg􀅰LＧ１
NAA为不定芽再生最适培养基,不定芽再生率达９１％;１/２MS＋０．２mg􀅰LＧ１IBA为不定根再生的最适培养
基,生根率达８９％;抑制叶片不定芽再生的Km最低浓度为２５mg􀅰LＧ１.建立了‘圣剑’洋桔梗植株高频再生
体系,并确定了其对卡那霉素的敏感性,为该品种的基因工程研究奠定了基础.
关键词:洋桔梗‘圣剑’;植株高频再生体系;卡那霉素敏感性
中图分类号:Q９４３．１　　文献标识码:A　　文章编号:１０００Ｇ３１４２(２０１４)０１Ｇ０１２０Ｇ０６
Establishmentofhighfrequencyregenerationsystemfor
Eustomagrandiflorumcv．ExcaliburBluePicotee
anddeterminationofkanamycinsensitivity
WEIYinＧFeng,WANGRuiＧXin,RUANChunＧYan,MEIPuＧCheng,
YANZhenＧYa,CHENChongＧShun∗
(JiangsuKeyLaboratoryofBiodiversityandBiotechnology,CollegeofLifeSciences,
NanjingNormalUniversity,Nanjing２１００２３,China)
Abstract:Eustomagrandiflorumisapopularcutflowerandpotflowerintheworld．Inthisstudy,usingleavesof
sterileplantletsofE．grandiflorumcv．ExcaliburBluePicoteeasexplants,theefectsofdiferentconcentrationcomＧ
binationsof６ＧBAandNAAonadventitiousbudregenerationwereinvestigated．TheefectsofdiferentconcentraＧ
tionsofIBAandNAAonrootingwerestudied,respectively．Thesensitivitytokanamycinupontheregenerationof
adventitiousbudswasdetermined．TheresultsshowedthatthemediumwithMS＋０．５mg􀅰LＧ１６ＧBA＋０．０１mg􀅰LＧ１
NAAwastheoptimummediumforadventitiousbudregeneration,with９１％regenerationrate．Meanwhile,themediＧ
umwith１/２MS＋０．２mg􀅰LＧ１IBAwastheoptimummediumforrooting,andtherootingratereached８９％．Besides,
theminimumconcentrationofKminhibitingtheregenerationofadventitiousbudswas２５mg􀅰LＧ１．Thisstudylaid
animportantfoundationfortheresearchofgeneticengineeringonthiscultivarofE．grandiflorum．
Keywords:Eustomagrandiflorum ‘ExcaliburBluePicotee’;highfrequencyplantregenerationsystem;kanamycin
sensitivity
收稿日期:２０１３Ｇ０６Ｇ０７　　修回日期:２０１３Ｇ０９Ｇ０２
基金项目:江苏省高校优势学科建设工程项目
作者简介:韦银凤(１９９０Ｇ),女,陕西铜川人,硕士研究生,主要从事植物生物技术与分子生物学研究,(EＧmail)weiyinfeng９０＠１２６．com.
∗通讯作者:陈崇顺,博士,硕士生导师,主要从事植物生物工程与分子生物学研究,(EＧmail)chenchongshun＠njnu．edu．cn.
　　洋桔梗(Eustomagrandiflorum),原产于美国
南方和墨西哥,又名草原龙胆,为龙胆科草原龙胆属
多年生宿根草本花卉,生产上常作一、二年生栽培
(李竹英等,２０１１).它的许多性状通过传统育种技
术改良(Thiruvengadametal．,２００９)后,如今的商
用植株株态轻盈潇洒,花色典雅明快,花形别致可
爱,已成为国际上时尚的盆花和切花种类(Chenet
al．,２０１０),并跻身世界十大切花之列(ThiruvengadＧ
ametal．,２００９;李军萍等,２０１３).‘圣剑’(ExcaliＧ
burBluePicotee)洋桔梗,花复色,白底紫边,２００７
年开始推出,现已成为秋季主要品种.
有性杂交是洋桔梗传统的主要育种方法,而植
物基因工程可在基因水平上改变植物的遗传物质,
能定向、高效地改造植物遗传性状,从而改变传统花
卉的种类、颜色、品质,创造新奇的变异品种(崔兴
国,２０１１).对于植物基因工程育种研究,大多需要
建立优良的植株再生体系(董福双等,２０１１).有关
洋桔梗叶片离体再生体系建立的研究表明,其基因
型依赖性强,不同品种间差异大,再生频率低(陈奇
等,２０１０).另一方面,在进行遗传转化时,最常用的
遗传标记基因为NPTII基因,该基因编码的新霉
素磷酸转移酶能使植物产生抗卡那霉素特性(吕梦
雨等,２０１０).因此,对转化体的筛选一般需要确定
受体植物对抗生素的敏感性,其中大多涉及不定芽
再生的卡那霉素最低浓度的测定(王玉华等,２００９;
刘苗霞等,２０１１).本研究以‘圣剑’洋桔梗品种叶片
作为外植体,建立其植株高频再生体系,并确定抑制
不定芽再生的卡那霉素最低浓度,为进一步开展相
关基因工程研究奠定重要基础.
１　材料与方法
１．１材料
１．１．１植物材料　洋桔梗‘圣剑’(EustomagrandiＧ
florum )包衣种子,购于昆明缤纷园艺种子公司.
１．１．２生化试剂　６Ｇ苄氨基嘌呤(６ＧBenzylaminopuＧ
rine,６ＧBA)、αＧ萘 乙 酸 (Naphthaleneaceticacid,
NAA)、吲哚丁酸(IndoleＧ３Ｇbutyricacid,IBA),均购于
中国医药(集团)上海化学试剂公司;卡那霉素(KanaＧ
mycin,Km),购于南京丁贝生物科技有限公司.
１．２方法
１．２．１无菌苗的获得　参照金雪花等(２００９)的方法,
将‘圣剑’包衣种子置于用细纱布制成的纱布袋中,
在１０g􀅰LＧ１洗衣粉溶液(２００mL)中浸泡８min,在
自来水下冲洗８min;在超净台中用７０％乙醇浸泡
６０s后,再于浓度为０．１％ 的HgCl２中浸泡１０min;
最后用无菌水冲洗５次,每次３min.用无菌滤纸
吸干包衣种子表面水滴,然后将其播于 MS基本培
养基(含３％蔗糖,０．６％琼脂,灭菌前pH 值调为
６．０;在０．１Mpa,１２１℃下,灭菌２０min)上,置于培
养室萌发生长.培养室温度(２５±２)℃,光照强度
６０μmol􀅰mＧ２sＧ１,光周期１６h/８h.如无特殊说明,
以下培养基配制及培养条件则均与此相同.
１．２．２不定芽的再生　参照杨燕燕等(２００７)的方法,
以上述生长４~５个月的无菌苗为试材,自上而下取
其第三对及以下的叶片,切去四边,即按照“五刀切”
法,将叶片切成５mm×５mm的叶块.将叶块背面
朝下接种于含６ＧBA(０、０．１、０．５、１．０mg􀅰LＧ１)和
NAA(０、０．０１、０．０５、０．１０mg􀅰LＧ１)完全组合共１６
种处理的 MS培养基上,并用镊子轻轻按压叶块,使
其与培养基充分接触.每种处理８瓶,每瓶５个叶
块,试验重复３次.以星期为单位定期观察,在培养
７周时,记录再生不定芽生长状态,统计各处理的不
定芽再生率.不定芽再生率＝(再生不定芽叶块总
数/接种叶块总数)×１００％.
１．２．３芽苗的增殖　将再生不定芽接于 MS基本培养
基,进行均一化生长.将长高的芽苗切成带一对叶片
的茎段,转接于 MS＋０．１mg􀅰LＧ１６ＧBA＋０．０５mg􀅰
LＧ１NAA培养基中进行增殖(杨燕燕等,２００７).４周
后,再将获得的芽苗切下,转接于 MS基本培养基中;
过渡培养２周后,进行不定根的诱导.
１．２．４不定根的诱导　将培养在上述 MS基本培养基
中、高度３cm左右的芽苗,接入１/２MS基本培养基
并分别附加IBA(０．２、０．４、０．６、０．８mg􀅰LＧ１)或NAA
(０．２、０．４、０．６、０．８mg􀅰LＧ１)的完全培养基中,进行不
定根的诱导(以１/２MS基本培养基为对照).共９种
处理,每处理接１０瓶,每瓶接３个芽苗,试验重复
３次.以星期为单位定期观察,在培养７周时,记录
再生不定根生长状态,统计各处理中各重复的芽苗生
根率.进一步研究了较低浓度 NAA(０、０．０２、０．０４、
０．０６、０．０８、０．１mg􀅰LＧ１)对诱导芽苗再生不定根的影
响,试验设计同上,观测芽苗生根率、平均每芽苗生根
数量、根平均长度、根生长状态等指标;芽苗生根率＝
(生根芽苗总数/接种芽苗总数)×１００％;平均每芽苗
生根数量＝芽苗生根总数/生根芽苗总数;根平均长
度＝芽苗根长度总和/芽苗生根总数.
１２１１期　　　　　　韦银凤等:‘圣剑’洋桔梗植株高频再生体系建立及卡那霉素敏感性测定
１．２．５卡那霉素敏感性的测定　参照相关文献(杨燕
燕等,２００７;郑阳霞等,２００９),在 MS＋０．５mg􀅰LＧ１
６ＧBA培养基中,分别加入０、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５
mg􀅰LＧ１的Km,以测定抑制不定芽再生的Km最低
浓度.为避免叶片大小不一而造成误差,如上所述,
采用“五刀切”将叶片切成５mm×５mm左右的叶
块.每个处理接６瓶,每瓶接５个叶块,试验重复
３次.以星期为单位定期观察,在６周时,统计各处
理的不定芽再生率、每叶块平均不定芽数(再生不定
芽总数/再生不定芽叶块数).
１．２．６试验数据的统计分析 　利用SPSS１７．０软件,
对研究所得数据分别进行单因素方差分析或双因素
方差分析(对于百分数类型的数据,在进行方差分析
前先进行适当的变换).在分析结果中,标有不同小
写字母的处理间差异显著(α＝０．０５).
２　结果与分析
２．１不同浓度６ＧBA与NAA的组合对不定芽再生的
影响
在培养１周左右,叶块切口处开始膨大;在培养
２~３周时,叶块切口处开始出现不定芽;在７周时,
不定芽再生率及不定芽生长状态如表１和图１所
示.双因素方差分析结果显示:添加６ＧBA和０．０５
~０．１mg􀅰LＧ１NAA能明显提高不定芽再生率,且
６ＧBA的作用比NAA更为显著.综合表１结果,６Ｇ
BA０．５mg􀅰LＧ１＋ NAA０．０１mg􀅰LＧ１为‘圣剑’叶
片不定芽再生最适培养基.
表１　不同浓度６ＧBA与NAA的组合对不定芽再生的影响
Table１　Effectsofdifferentcombinationsof６ＧBAandNAAonadventitiousbudregeneration
处理 Treatment
(６ＧBA,NAA)
(mg􀅰LＧ１)
平均不定芽再生率 (％)
Averageregenerationrate
ofadventitiousbuds
　　　　不定芽生长状态
　　　　Growthofadventitiousbuds
１:(０．０,０．００) ２．５±１．４４d 不定芽极少、小、黄绿色,易与叶块分离
２:(０．０,０．０１) ５．０±１．４４d 不定芽很少、小、黄绿色、玻璃化;有少量不定根
３:(０．０,０．０５) １５．０±２．５０c 不定芽在不定根后生出,部分正常、叶片舒展;部分黄绿色;较多不定根
４:(０．０,０．１０) ３２．０±３．００b 不定芽在不定根后生出,大部分为黄绿色、玻璃化;
５:(０．１,０．００) ８９．２±１．６７a 不定芽由叶盘突起直接生出,叶片舒展,不定芽大;少部分为玻璃化
６:(０．１,０．０１) ８６．７±３．６３a 大部分不定芽从愈伤组织上生出,较大,叶片偏黄绿色;部分为玻璃化
７:(０．１,０．０５) ９３．３±１．６７a 不定芽从愈伤组织上生出,多为丛生状,大部分玻璃化,较脆;有的为正常芽
８:(０．１,０．１０) ９１．７±２．２０a 不定芽从愈伤组织上生出,多为丛生状,大部分为黄绿色、玻璃化,较脆
９:(０．５,０．００) ９０．０±２．８９a 部分不定芽较分散,叶片舒展;部分为愈伤组织上生出,丛生、黄绿色、玻璃化
１０:(０．５,０．０１) ９０．８±１．６７a 不定芽多为叶块突起直接生出,分散,叶片舒展,少部分玻璃化
１１:(０．５,０．０５) ９２．５±１．４４a 不定芽为愈伤组织上生出,芽丛生状,几乎全部为黄绿色、玻璃化
１２:(０．５,０．１０) ９３．３±０．８３a 不定芽为愈伤组织上生出,芽丛生状,几乎全部为黄绿色、玻璃化
１３:(１．０,０．００) ８９．２±３．００a 不定芽为愈伤组织上生出,芽丛生状,小,黄绿色,玻璃化
１４:(１．０,０．０１) ９３．３±３．００a 不定芽为愈伤组织上生出,芽丛生状,小,黄绿色,玻璃化
１５:(１．０,０．０５) ９０．０±０．８３a 不定芽为愈伤组织上生出,丛生状,很小,与愈伤组织很难分离,黄绿色,玻璃化
１６:(１．０,０．１０) ９１．７±３．６３a 不定芽为愈伤组织上生出,丛生状,很小,与愈伤组织很难分离,黄绿色,玻璃化
　注:标注不同小写字母的处理间具有显著性差异(在α＝０．０５水平).下同.
　Note:Differentlowercaselettersshowsignificantdifferenceatα＝０．０５．Thesamebelow．
２．２不同浓度NAA与IBA对芽苗不定根再生的影响
NAA四种不同浓度(０．２、０．４、０．６、０．８mg􀅰
LＧ１)的处理中(图２:AＧD),芽苗基部均先形成大量
愈伤组织,而后由愈伤组织生出不定根,且不定根空
脆、易断,整个植株玻璃化现象严重,不能正常生长.
由此可见,较高浓度 NAA不利于‘圣剑’芽苗不定
根再生及植株正常生长.因此,设计较低浓度(０、
０．０２、０．０４、０．０６、０．０８、０．１mg􀅰LＧ１)的 NAA处理,
从平均生根率、单株均根数、平均根长及再生根生长
状态等方面,进一步研究了 NAA对诱导芽苗生根
的影响(表３,图２:ⅠＧⅥ).结果表明,就生根率而
言,０．０４~０．１０mg􀅰LＧ１的NAA处理,生根率明显
高于对照;０．０２mg􀅰LＧ１的NAA处理,生根率与对
照组差异不显著.就单株平均根数而言,０．０６mg􀅰
LＧ１NAA比其它浓度处理及对照能诱导再生更多的
根(１３．３条/株).就平均根长而言,以０．０２mg􀅰LＧ１
NAA处理效果为最好.就根生长状态而言,较低
浓度NAA处理诱导的不定根均表现出先端锐尖、
空脆、易断的特点.由此可见,NAA浓度高或低均
不适于植株进一步的生长.
IBA四种不同浓度(０．２、０．４、０．６、０．８mg􀅰
LＧ１)的 处 理 中(图２:EＧH,表２),芽 苗 平 均
２２１ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷
图１　不同浓度６ＧBA与NAA的组合对不定芽再生的影响　１~１６号:６ＧBA(０、０．１、０．５、１．０mg􀅰LＧ１)分别与 NAA(０、０．０１、
０．０５、０．１mg􀅰LＧ１)的完全组合.
Fig．１　Efectsofdiferentcombinationsof６ＧBAandNAAonadventitiousbudregeneration　１－１６:Completecombinationof６Ｇ
BA(０,０．１,０．５,１．０)andNAA(０,０．０１,０．０５,０．１mg􀅰LＧ１)．
图２　不同浓度NAA与IBA对芽苗不定根再生的影响　A~D:NAA为０．２、０．４、０．６、０．８mg􀅰LＧ１;E~H:IBA为０．２、０．４、０．６、
０．８mg􀅰LＧ１;I为对照;I~VI:各处理NAA浓度分别为０、０．０２、０．０４、０．０６、０．０８、０．１０mg􀅰LＧ１.
Fig．２　EfectsofdiferentconcentrationsofNAAandIBAonrooting　AＧD:NAA０．２,０．４,０．６,０．８;EＧH:IBA０．２,０．４,０．６,０．８mg􀅰
LＧ１;I:Thecontrol;IＧVI:NAAineachtreatmentis０,０．０２,０．０４,０．０６,０．０８,０．１０mg􀅰LＧ１．
表２　IBA对芽苗不定根再生的影响
Table２　EffectsofdifferentconcentrationsofIBAonrooting
IBA浓度
ConcentrationofIBA(mg􀅰LＧ１)
平均生根率
Averagerootingrate(％)
　　　　不定根生长状态
　　　　Growthofadventitiousroot
０．２ ８８．９±２．２３a 根由茎部直接发出,根分散,粗细均匀,附生根毛
０．４ ９０．０±１．９１a 根由茎部直接发出,根分散,较短簇,附生根毛
０．６ ９１．１±１．１０a 根部有少量愈伤组织,根较粗,有根毛,少部分透明状,较易断
０．８ ８８．９±２．２３a 根部有少量愈伤组织,根较粗,部分透明状,较易断
０(CK) ８１．１±２．９４b 根由茎部直接发出,根较细长、附生根毛
生根率(８８．９％~９１．１％)均显著高于对照,但不同
浓度间差异不显著.当IBA浓度为０．２mg􀅰LＧ１
时,芽苗再生的不定根与茎直接相连,粗细均匀,数
量多,韧性好,植株明显比在其它处理下长得高,长
得好.当IBA为０．６和０．８mg􀅰LＧ１时,芽苗基部也
出现形成愈伤组织的现象,再生的不定根也变得较
脆、易断.因此,‘圣剑’最适生根培养基为１/２MS
＋０．２mg􀅰LＧ１IBA.
２．３抑制不定芽再生的卡那霉素最低浓度的确定
不同浓度Km对不定芽再生的影响,见图３和
表４.在 Km 浓度为０时,平均不定芽再生率为
９５．６％;随着Km浓度不断升高,叶块不定芽再生受
３２１１期　　　　　　韦银凤等:‘圣剑’洋桔梗植株高频再生体系建立及卡那霉素敏感性测定
图３　不同浓度Km对不定芽再生的影响　a~h:各处理Km浓度为０,５,１０,１５,２０,２５,３０,３５mg􀅰LＧ１.
Fig．３　EfectsofdifferentconcentrationsofKmontheregenerationofadventitiousbuds
aＧh:Kmineachtreatmentis０,５,１０,１５,２０,２５,３０,３５mg􀅰LＧ１．
表３　NAA对诱导芽苗生根的影响
Table３　Effectsofdifferentlowerconcentrations
ofNAAonrooting
NAA浓度
Concentration
ofNAA
(mg􀅰LＧ１)
平均生根率
Averagerooting
rate(％)
单株均根数
No．ofroots
perplant
平均根长
Averageroot
length
(cm)
０(CK) ７４．４±４．８２b ３．０±０．４１c ０．５５±０．１９c
０．０２ ８０．０±３．８７ab ２．３±０．６３c １．６４±０．３２a
０．０４ ８８．９±２．２０a ９．０±１．０８b ０．９２±０．１８b
０．０６ ９０．０±３．８７a １３．３±１．１１a ０．８３±０．１９bc
０．０８ ８８．９±２．９４a ８．０±１．２９b ０．６８±０．２０bc
０．１０ ９１．１±１．１０a ９．３±１．３１b ０．５８±０．１１c
表４　不同浓度Km对不定芽再生的影响
Table４　EffectsofdifferentconcentrationsofKm
onregenerationofadventitiousbud
Km浓度
Concentrationof
Km(mg􀅰LＧ１)
平均不定芽再生率
Averageregeneration
rateofadventitious
buds(％)
平均不定芽数/叶块
No．ofadventitious
budsperleaf
０(CK) ９５．６±２．２３a １１．８８±０．６４a
５ ７３．３±５．７７b ５．２０±０．９６b
１０ ３６．７±３．８３c １．４２±０．６８c
１５ １０．０±１．９０d ０．２０±０．１９d
２０ ４．４±２．９４de ０．０７±０．１１d
２５ ０±０．００e ０±０．００d
３０ ０±０．００e ０±０．００d
３５ ０±０．００e ０±０．００d
抑制程度也逐渐加深,叶块边缘变黄、变褐,而且逐
渐向叶块中央扩展(图３).当Km浓度为２５mg􀅰
LＧ１(图３中的f)时,只有极少数叶块出现小的芽点,
但最终未见不定芽的形成;而当 Km ;３０mg􀅰LＧ１
时,则完全没有不定芽的再生.统计分析结果(表
４)显示:随着 Km浓度逐渐升高,平均不定芽再生
率和平均不定芽数/叶块的值都逐渐下降,且各处理
间存在显著差异.表４结果显示,抑制‘圣剑’洋桔
梗叶片不定芽再生的最低 Km浓度为２５mg􀅰LＧ１.
３　结论与讨论
植物生长物质能以极微小的量影响植物的各项
生理生化活动,对植物离体培养起决定性作用(袁学
军等,２０１１).通常将细胞分裂素与生长素以不同浓
度进行组合诱导不定芽再生,且二者之间存在平衡
关系,一旦打破这种平衡,就会明显减弱再生效果
(龚明霞等,２００８;刘冰等,２０１１).本研究结果与此
相吻合.通常,较低浓度的６ＧBA能有效促进不定
芽的再生和增殖;而过高浓度的６ＧBA则促使不定
芽过度再生,并呈矮簇状和玻璃化状态.相较于其
他相关研究(金雪花等,２００９;钟波,２０１２),本研究不
仅以“平均不定芽再生率”作为评价指标,而且以“不
定芽生长状态”作为检测指标,以能否进一步正常生
长为评价标准,筛选适宜的培养基.
NAA和IBA广泛用于诱导生根.一般生长素
浓度低时,能促进生根;生长素浓度高时,往往先诱
导形成愈伤组织,而后从愈伤组织上生根.这样的
不定根,一般不与茎的导管相通,吸收的营养物质难
以运输,不利于植株生长(杨永刚等,２００１).因此,
本研究在利用生长素诱导生根时,不仅考虑到平均
生根率,而且考虑到不定根的生长状态.张子学等
(２００５)研究所得NAA最适生根浓度对于‘圣剑’洋
桔梗来说偏高而不利其生根.进一步研究较低浓度
NAA对诱导芽苗生根的影响,发现再生出的不定
根也均表现出某种程度的先端锐尖、空脆、易断的特
４２１ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷
点.而利用较低浓度IBA处理时,生出的根则粗细
均匀,略呈绿色,较为坚韧.因此,本研究认为IBA
诱导洋桔梗生根的效果优于 NAA,这与毛元荣等
(２００４)的研究结果一致.而对于其它洋桔梗品种,
是否也存在此规律,有待深入探讨.
不同种植物的不同外植体对卡那霉素的敏感程
度不同,即使同种植物的不同品种对其敏感性也存
在差异.本研究得出２５mg􀅰LＧ１ Km 为抑制‘圣
剑’洋桔梗叶片不定芽再生的最低浓度,这与
‘DoubleMariachiPink’洋桔梗相同(杨燕燕等,
２００７).而抑制‘DeepBlue’洋桔梗叶片不定芽再生
的Km最低浓度为４５mg􀅰LＧ１(郑阳霞等,２００９).
因此,对受体植物进行抗生素敏感性测定是遗传转
化的必要先行步骤.
本研究建立了‘圣剑’洋桔梗的高频再生体系,
为后期介导基因转化、品种改良,进而实行商品化生
产奠定重要基础.
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