全 文 ：广 西 植 物 Ｇｕｉｈａｉａ ３２（３）：３６７－３７０ ２０１２年５月
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－３１４２．２０１２．０５．０１７
菘蓝ＡＰＸ基因克隆及序列分析
孙晓东＊，李爱玲，韩立敏
（陕西教育学院 生物科学与技术系，西安７１００６１）
摘 要：为进一步研究菘蓝ＡＰＸ基因的功能，构建了菘蓝ＡＰＸ 基因真核表达载体。从菘蓝植株中提取总
ＲＮＡ，逆转录为ｃＤＮＡ，根据ＡＰＸ基因在该类植物中的同源性设计简并引物，利用ＰＣＲ方法钓取目的基因，
将目的基因与Ｔ载体连接，ＰＣＲ检测阳性克隆，同时菌液送往测序公司进行测序。结果表明：测序片段的生
物信息学分析证实了该序列与ＧｅｎＢａｎｋ登录的ＡＰＸ基因一致。说明成功构建了菘蓝ＡＰＸ重组质粒和克隆
鉴定了菘蓝ＡＰＸ基因，可进一步用于基因表达和表达产物的功能研究。
关键词：菘蓝；ＡＰＸ基因；真核表达载体；基因克隆
中图分类号：Ｑ９４３，Ｊ５２２．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００－３１４２（２０１２）０３－０３６７－０４
＊ Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＰＸ
ｇｅｎｅ ｆｒｏｍＩｓａｔｉｓ ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ
ＳＵＮ Ｘｉａｏ－Ｄｏｎｇ＊，ＬＩ Ａｉ－Ｌｉｎｇ，ＨＡＮ Ｌｉ－Ｍｉｎ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａａｎｘｉ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｘｉ′ａｎ ７１００６１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄ ｏｆ ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ／ＡＰＸ．ＡＰＸｇｅｎｅ ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｏｆ Ｉｓａｔｉｓ ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ ｂｙ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）．ＡＰＸｇｅｎｅ ｗａｓ ｔｈｅｎ ｉｎｓｅｒｔｅｄ ｉｎｔｏ
ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ ｅｕｋａｒｙｏｔｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ．Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｌｏｎｉｅｓ ｗｅｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．
Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅ ＡＰＸｗｈｉｃｈ ｗａｓ ａｂｏｕｔ １ ２５７ｂｐ，ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ－ＡＰＸ ｗｅｒｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．
Ｔｈｅ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＡＰＸｇｅｎｅ ｗａｓ ａｓ ｔｈｅ ｓａｍｅ ａｓ ｔｈｅ ＡＰＸｇｅｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ Ｇｅｎｅｂａｎｋ．
ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ－ＡＰＸ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄ－
ｙ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｉｓａｔｉｓ ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ；ＡＰＸｇｅｎｅ；ｅｕｋａｒｙｏｔｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ；ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ
菘蓝（Ｉｓａｔｉｓ ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ）主产于河北、江苏、浙
江、河南、湖北等地，为十字花科（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ）菘蓝属
（Ｉｓａｔｉｓ）两年生草本植物，是目前常用的大众药材，
干燥根入药称板蓝根（Ｒａｄｉｘ Ｉｓａｔｉｄｉｓ），干燥叶入药
称大青叶（Ｆｏｌｉｕｍ ｉｓａｔｉｄｉｓ），板蓝根和大青叶都具
有清热解毒、凉血、消斑的功效（李玲等，１９９６）。菘
蓝的有效成分能较好地抑制甲型流感病毒的增殖，
是一种有效的抗流感病毒的中药成分（Ｚｈｅｎｇ等，
２００６）。
需氧生物细胞在其代谢过程中总会产生一些有
毒害作用的活性氧物质。活性氧可引起蛋白质、膜
脂和其它细胞组分的损伤，进而导致细胞及组织死
亡。因此，植物本身会逐步地产生一些保护机制来
清除过多的活性氧，包括超氧化物歧化酶、抗坏血酸
过氧化物酶、过氧化氢酶、抗坏血酸等活性和含量的
调节。抗坏血酸过氧化物酶（ａｓｃｏｒｂａｔｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，
ＡＰＸ）是植物活性氧代谢中重要的抗氧化酶之一，
又是维生素Ｃ代谢的主要酶类。若使其活性极显
＊ 收稿日期：２０１２－０１－２４ 修回日期：２０１２－０４－１８
基金项目：陕西省教育厅科研计划项目（０９ＪＫ３４１）；陕西教育学院科研基金（１１ＫＪ００６）［Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｊｅｃｔ ｏｆ Ｓｈａａｎｘｉ
Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ（０９ＪＫ３４１）；Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｕｎｄ Ｐｒｏｊｅｃｔ ｏｆ Ｓｈａａｎｘｉ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ（１１ＫＪ００６）］
作者简介：孙晓东（１９６２－），女，陕西西安人，副教授，主要从事植物生理学教学及相关研究工作，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｓｘｄ６２＠１６３．ｃｏｍ。
＊通讯作者（Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）
著升高，则可使超氧阴离子自由基（Ｏ－２．）产生速率极
显著下降，脂质过氧化作用减弱，从而提高植物体内
抗氧化酶活性及增强抗氧化代谢的水平（Ａｓａｄａ，
１９９２）。ＡＰＸ主要存在于高等植物中，已发现ＡＰＸ
存在于菠菜、豌豆、浮萍、美国梧桐、棉花、黄瓜、蓖麻
子、向日葵、茶叶、小麦、大麦、玉米、烟草、西葫芦等
植物的叶片中，同时在豆科植物的根癌、蓖麻等油料
植物种子、马铃薯块茎以及藻类（真核藻类及某些蓝
藻）中均检测出 ＡＰＸ活性（Ｉｓｈｉｋａｗａ等，２００８），但
在菘蓝中尚无该基因的报道。同时，ＡＰＸ在植物中
的克隆和鉴定也缺乏相关的研究。因此，本研究通过
基因工程的方法利用ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ载体构建了菘蓝
ＡＰＸ基因的重组质粒，克隆和鉴定菘蓝的ＡＰＸ 基
因，为研究菘蓝ＡＰＸ基因功能奠定基础。
１ 材料与方法
１．１材料与主要试剂
供试菘蓝购自西安市长安区；菘蓝基因组
ＤＮＡ；ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ质粒；感受态细菌Ｅ．ｃｏｌｉ，ＤＨ５α
均为本实验室保存。
Ｔ４ＤＮＡ 连接酶 （ＴａＫａＲａ）；ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ：
Ｄ２０００（ＴＩＡＮＧＥＮ 有 限 公 司）；琼 脂 糖 （ＧＥＮＥ
ＴＥＣＨ）；Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶（ＴａＫａＲａ）；卡那霉素（使
用浓度１００Ｕ／ｍＬ）；ＤＮＡ 凝胶回收试剂盒（Ｇｅｌ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ，Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司产品）。
１．２试验方法
１．２．１ ＡＰＸ目的基因的扩增 选取新鲜、茁壮的菘
蓝叶片，采用 ＴＲＩＺＯＬ方法（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈ－
ｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ）提取总 ＲＮＡ，逆转录合成ｃＤ－
ＮＡ。根据 ＧｅｎＢａｎｋ提供的ＡＰＸ 基因序列，应用
Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５软件设计一对简并引物，Ｐ１序列
为５′－ＡＴＧＧＧＫＮＡＡＲＷＮＹＴＡＹＣＣＮＡＣＹＧＴ－３′；
Ｐ２序列为５′－ＴＴＡＡＧＣＮＴＣＡＧＣＡＡＡＮＣＣＮＡＲ－
ＴＴＣＡＧＴ－３′，引物由北京三博远志生物技术有限公
司合成。
利用Ｐ１和Ｐ２引物进行ＰＣＲ扩增，扩增体系
为５０μＬ，包括２×Ｄｒｅａｍ Ｔａｑ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ
Ｍｉｘ ２５μＬ；上游引物、下游引物各１μＬ；ＤＮＡ １
μＬ；ｄｄＨ２Ｏ２１μＬ。采用退火梯度，优化ＰＣＲ反应
条件，应程序为９４℃预变性５ｍｉｎ；９５ ℃变性１
ｍｉｎ；５５－５６－５７－５８－５９－６０－６１－６２℃退火１ｍｉｎ；７２℃
延伸１ｍｉｎ；进行３５个循环后，７２℃继续延伸１０
ｍｉｎ，４℃保存扩增产物。扩增产物经１％琼脂糖
（含溴化乙锭０．５ｇ／ｍＬ）电泳鉴定。
１．２．２ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ－ＡＰＸ１的构建与鉴定
１．２．２．１回收酶切产物 ＰＣＲ产物经１％琼脂糖电
泳，收集含ＤＮＡ片段的凝胶切片至１．５ｍＬ离心
管，称重，加入等体积溶液ＢＤ；６５℃水浴１０ｍｉｎ；凝
胶溶液置于 ＤＮＡ纯化柱，静置２ｍｉｎ，１２ ０００ｒ·
ｍｉｎ－１离心６０ｓ，弃去滤液；加入溶液ＰＥ，１２ ０００ｒ·
ｍｉｎ－１离心６０ｓ，弃去滤液；ＤＮＡ纯化柱置于新离
心管；加入６０℃预热的溶液Ｅ １００μＬ，静置２ｍｉｎ，
１２ ０００ｒ·ｍｉｎ－１离心６０ｓ，管底即为回收的ＤＮＡ，
－２０℃保存。回收的ＤＮＡ经１％琼脂糖电泳鉴定。
１．２．２．２感受态细胞的制备 从３７℃培养１６ｈ的
平板中挑取单菌落，转到一个含有１００ｍＬ ＬＢ培养
基的摇瓶中。于３７℃剧烈振摇培养３ｈ（旋转摇床，
３００ｒ·ｍｉｎ－１）。无菌条件下将细菌转移到一个无
菌、一次性使用的、用冰预冷的５０ｍＬ聚丙烯管中，
在冰上放置１０ｍｉｎ，使培养物冷却至０℃。４℃，以
４ ０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，回收细胞。倒出培养
液，将管倒置１ｍｉｎ，使最后残留的痕量培养液流
尽。以１０ｍＬ用冰预冷的０．１ｍｏｌ／Ｌ ＣａＣｌ２ 重悬每
份沉淀，冰浴。４℃以４ ０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，
回收细胞。倒出培养液，将管倒置１ｍｉｎ，使最后残
留的痕量培养液流尽。每５０ｍＬ初始培养物用２
ｍＬ用冰预冷的０．１ｍｏｌ／Ｌ ＣａＣｌ２ 重悬每份细胞沉
淀。将细胞分装成小份，放于－７０℃冻存。
１．２．２．３ＤＮＡ连接及转化 利用Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司
产品ＰＣＲ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ进行，建立连接反应体系：５
×连接酶缓冲液６μＬ；Ｔ４连接酶１μＬ；Ｖｅｃｔｏｒ
ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ ０．１８ｐｍｏｌ（３μＬ）；胶回收的ＰＣＲ产物
０．５４ｐｍｏｌ（５μＬ）；加入三蒸水至３０μＬ；２２℃，连接
１６ｈ；次日将连接产物转化入感受态细胞接种到ＬＢ
固体选择性培养基（含卡那抗性１００μｇ／ｍＬ）３７℃
过夜，挑取在选择性培养基上生长的菌落制备菌液，
一部分作为模板用针对目的基因ＡＰＸ 的引物做
ＰＣＲ，通过琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆，克隆阳性
的菌液送至生物公司进行序列测定。
２ 结果与分析
２．１ＰＣＲ扩增菘蓝茎叶ＡＰＸ基因
用Ｐ１和Ｐ２引物对ＡＰＸ 基因进行扩增，琼脂
糖电泳。图１显示５７℃时扩增的条带最长，与预期
８６３ 广 西 植 物 ３２卷
图１ ＡＰＸ基因的ＰＣＲ扩增产物
Ｆｉｇ．１ ＡＰＸｇｅｎｅ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ
图２ 重组质粒菌落ＰＣＲ结果
Ｆｉｇ．２ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｏｌｏｎｙ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄ
１泳道为２ ０００ｂｐ ＤＮＡ标准分子量 Ｍａｒｋｅｒ；
其余泳道均为ＡＰＸ基因ＰＣＲ扩增产物。
Ｌａｎｅ １：２ ０００ｂｐ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ；ｏｔｈｅｒｓ：ＡＰＸＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ．
片段大小一致，有可能是我们需要钓取的基因
ＡＰＸ，胶回收该片段，准备连入Ｔ载体。
２．２ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ／ＡＰＸ重组表达质粒构建与鉴定
用含氨苄青霉素的ＬＢ培养基筛选生长的菌落
制备菌液进行ＰＣＲ，琼脂糖电泳初步筛选阳性克
隆，结果见图１。可见ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ／ＡＰＸ阳性重组质
粒，经ＰＣＲ扩增，随机挑选的１０个单克隆中９个扩
增出目的片段。
２．３ＡＰＸ核苷酸序列分析
总共挑取了１５个克隆，只有２个克隆的测序符
合ＰＣＲ产物的长度；ＡＰＸ测序结果与Ｇｅｎｂａｎｋ登
录的ＡＰＸ基因碱基、氨基酸序列完全一致，并对其
ＯＲＦ框进行分析，包含２５５个氨基酸，证实目的基
因已成功插入真核表达载体ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ中。
３ 结论与讨论
ＡＰＸ作为植物体内抗氧化酶类，其活性的增强
可植物增加耐逆性。转基因植物中ＡＰＸ的过量表
达可以提高转基因植物的抗性（Ｍｉｔｔｌｅｒ等，２０１０）。
在棉花、拟南芥等植物中的研究表明，克隆ＡＰＸ 基
因并进行转基因后，可有效增加植物的耐逆性。例
图３ ＮＣＢＩ提供的ＯＲＦ阅读框分析
Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ＯＲＦ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＡＰＸｆｒｏｍ ＮＣＢＩ
如，拟南芥中ｔＡＰＸ的过量表达可增强对除草剂
（Ｐａｒａｑｕａｔ）诱导的光合氧化胁迫和氧化氮诱导的细
胞死亡的抗性（Ｍｕｒｇｉａ等，２００４）。此外，番茄中细
胞质ＡＰＸ（ｃＡＰＸ）基因的过量表达，可显著提高转基
因番茄的抗寒和抗盐能力（Ｗａｎｇ等，２００５）。辣椒
ＡＰＸ基因转入烟草，同样提高可转基因烟草的抗氧
９６３３期 孙晓东等：菘蓝ＡＰＸ基因克隆及序列分析
化胁迫与抗真菌能力（Ｓａｒｏｗａｒ等，２００５）。因此，
ＡＰＸ基因在植物耐逆性的研究中有着重要的意义。
在分子克隆的过程中，利用Ｔａｑ酶具有的非模
板依赖性末端转移酶活性，将ＰＣＲ产物３′末端加入
一个脱氧腺嘌呤核苷（Ａ）。同时将克隆载体平端线
性化后，在其３′末端加入一个脱氧胸腺嘧啶核苷
（Ｔ）（本研究中所用的ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ载体已有商品化
供应）。从而根据Ｔ／Ａ碱基互补配对原理，可以将
加Ａ后的ＰＣＲ产物直接克隆入Ｔ载体，这种方式
称为 ＴＡ 克隆 （于永利等，１９９４）。本研究利用
ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ载体，利用ＴＡ克隆的方法成功地构建
了ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ／ＡＰＸ重组质粒，为采用Ｔ载体克隆
其它目的基因扩增片断提供了经验；同时，菘蓝
ＡＰＸ基因重组质粒的构建，可为下一步深入研究
其作用机制及其临床应用奠定基础。
参考文献：
Ｙｕ ＹＬ（于永利），ＭＡＴＨ（麻彤辉），Ｙａｎｇ ＧＺ（杨贵贞）．１９９４．
ＴＡ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃ－
ｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ
（ＴＡ克隆及双链ＤＮＡ测序：介绍一种快速克隆及分析ＰＣＲ
产物的方法）［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（中国免疫学杂志），１０
（１）：５－７
Ｌｉ Ｌ（李玲），Ｙａｎｇ ＧＪ（杨根金），Ｄｏｎｇ ＴＹ（董同义），ｅｔ ａｌ．１９９６．
Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｏｆ Ｄｙｅｒｓ Ｗｏａｄ（Ｉｓａｔｉｓ ｔｉｎｃ－
ｔｏｒｉａ）（菘蓝化学成分研究）［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｔｒａｄ Ｈｅｒｂａｌ Ｄｒｕｇｓ（中
草药），２７（７）：３８９－３９１
ＡｓａｄＡＫ．１９９２．Ａｓｃｏｒｂａｔｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ－Ａｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ－ｓｃａｖ－
ｅｎｇｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｌａｎｔ，８５（２）：２３５－２４１
ＩｓｈｉｋａｗＡＴ，ＳｈｉｇｅｏｋＡＳ．２００８．Ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ａｓｃｏｒｂａｔｅ ｂｉｏ－
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ａｓｃｏｒｂａｔｅ ｐｅｒｏｘｉ－
ｄａｓｅ ｉｎ ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｚｉｎｇ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏ－
ｃｈｅｍ，７２（５）：１ １４３－１ １５４
Ｍｉｔｔｌｅｒ Ｒ，Ｂｌｕｍｗａｌｄ Ｅ．２０１０．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｍｏｄｅｒｎ ａｇ－
ｒｉｃｕｌｔｕｒｅ：ｃｈａｌｅｎｇｅｓ ａｎｄ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ［Ｊ］．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐｌａｎｔ Ｂｉ－
ｏｌ，６１：４４３－４６２
Ｍｕｒｇｉ ＡＩ，Ｔａｒａｎｔｉｎｏ Ｄ，Ｖａｎｎｉｎｉ Ｃ，ｅｔ ａｌ．２００４．Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ
ｐｌａｎｔｓ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｈｙｌａｋｏｉｄａｌ ａｓｃｏｒｂａｔｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｓｈｏｗ ｉｎ－
ｃｒｅａｓｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｐａｒａｑｕａｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｈｏｔｏｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ
ｔｏ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｅｌ ｄｅａｔｈ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｊ，３８（６）：９４０－９５３
Ｓａｒｏｗａｒ Ｓ，Ｋｉｍ ＥＮ，Ｋｉｍ ＹＪ，ｅｔ ａｌ．２００５．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ
ｐｅｐｐｅｒ ａｓｃｏｒｂａｔｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ－ｌｉｋｅ １ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ ｐｌａｎｔｓ ｅｎ－
ｈａｎｃｅｓ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ
Ｓｃｉ，１６９（１）：５５－６３
Ｗａｎｇ ＹＪ，Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉ Ｍ，Ｍｅｉｌａｎ Ｒ，ｅｔ ａｌ．２００５．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ａｓｃｏｒｂａｔｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｉｎ ｔｏｍａｔｏ ｃｏｎｆｅｒｓ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ ｃｈｉｌ－
ｉｎｇ ａｎｄ ｓａｌｔ ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｈｏｒｔｉｃ Ｓｃｉ，１３０（２）：１６７－１７３
Ｚｈｅｎｇ ＷＦ，Ｃｈｅｎ ＣＦ，Ｃｈｅｎｇ ＱＰ，ｅｔ ａｌ．２００６．Ｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ
ｅｘｏｐｏｌｙ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒｏｍ Ａｐｈａｎｏｔｈｅｃｅ ｈａｌｏｐｈｙｔｉｃａ（Ｃｈｒｏｏｃｏｃ－
ｃａｌｅｓ）ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚＡｖｉｒｕｓ（Ｈ１Ｎ１）－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｎｅｕ－
ｍｏｎｉＡｉｎ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍ，６（７）：
檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽
１ ０９３－１ ０９９
（上接第３３９页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ ｆｒｏｍ ｐａｇｅ ３３９）
ｗａｔｅｒ ｄｅｆｉｃｉｔ：Ｉｆ ｎｏｔ ｆｏｒ ｃａｒｂｏｎ ｇａｉｎ，ｗｈａｔ ｉｓ ｆａｃｕｌｔａｔｉｖｅ ＣＡＭ ｇｏｏｄ
ｆｏｒ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｂｏｔ，１０３（４）：６４５－６５３
Ｈｕｂｒｉｃｋ ＫＴ，Ｆａｒｑｕｈａｒ ＧＤ．１９８９．Ｃａｒｂｏｎ ｉｓｏｔｏｐｅ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｃａｒｂｏｎ ｇａｉｎｅｄ ｔｏ ｗａｔｅｒ ｌｏｓｔ ｉｎ ｂａｒｌｅｙ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ［Ｊ］．
Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ，１２（８）：７９５－８０４
Ｈｕｃ Ｒ，Ｆｅｒｈｉ Ａ，Ｇｕｅｈｌ Ｍ．１９９４．Ｐｉｏｎｅｅｒ ａｎｄ ｌａｔｅ ｓｔａｇｅ ｔｒｏｐｉｃａｌ ｒａｉｎ－
ｆｏｒｅｓｔ ｔｒｅｅ ｓｐｅｃｉｅｓ（Ｆｒｅｎｃｈ Ｇｕｉａｎａ）ｇｒｏｗｉｎｇ ｕｎｄｅｒ ｃｏｍｍｏｎ ｃｏｎｄｉ－
ｔｉｏｎｓ ｄｉｆｅｒ ｉｎ ｌｅａｆ ｇａｓ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｃａｒｂｏｎ ｉｓｏｔｏｐｅ ｄｉｓｃｒｉｍｉ－
ｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｅａｆ ｗａｔｅｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ［Ｊ］．Ｏｅｃｏｌｏｇｉａ，９９（３－４）：２９７－３０５
Ｊｏｈｎｓｏｎ ＨＢ，Ｐｏｌｙ ＨＷ，Ｍａｙｅｒｕｘ ＨＳ．１９９３．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ＣＯ２ａｎｄ
ｐｌａｎｔ－ｐｌａｎｔ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｅｆｅｃｔｓ ｏｎ ｎａｔｕｒａｌ ｖｅｇｅｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｖｅｇｅｔａ－
ｔｉｏ，１０５（１）：１５７－１７０
Ｋｌｕｇｅ Ｍ，Ｔｉｎｇ ＩＰ．１９７８．Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａｎ ａｃｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｍ］／／Ａｎａｌ－
ｙｓｉｓ ｏｆ ａｎ ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｄａｐｔａｔｉｏｎ．Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｖｏｌ ３０．Ｂｅｒｌｉｎ，
Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ
Ｌａｕｔｅｒｉ Ｍ，Ｂｒｕｇｎｏｌｉ Ｅ，Ｓｐａｃｃｉｎｏ Ｌ．１９９３．Ｃａｒｂｏｎ ｉｓｏｔｏｐｅ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａ－
ｔｉｏｎ ｉｎ ｌｅａｆ ｓｏｌｕｂｌｅ ｓｕｇａｒｓ ａｎｄ ｉｎ ｗｈｏｌｅ－ｐｌａｎｔ ｄｒｙ ｍａｔｔｅｒ ｉｎ Ｈｅｌｉ－
ａｎｔｈｕｓ ａｎｎｕｕｓｓ ｇｒｏｗｎ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｗａｔｅｒ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｍ］／／
Ｅｈｌｅｒｉｎｇｅｒ ＪＲ，Ｆａｒｑｕｈａｒ ＧＤ（ｅｄｓ）．Ｓｔａｂｌｅ Ｉｓｏｔｏｐｅｓ ａｎｄ Ｐｌａｎｔ Ｃａｒ－
ｂｏｎ－Ｗａｔｅｒ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓ．Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ：ＣＡ Ａｃａｄｅｍｉｃ：９３－１０８
Ｌüｔｔｇｅ Ｕ，Ｂｅｃｋ Ｆ．１９９２．Ｅｄｏｇｅｎｏｕｓ ｒｈｙｔｈｍｓ ａｎｄ ｃｈａｏｓ ｉｎ ｃｒａｓｓｕ－
ｌａｃｅａｎ ａｃｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔａ，１８８：２８－３８
Ｌüｔｔｇｅ Ｕ．２００４．Ｅｃｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａｎ Ａｃｉｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ
（ＣＡＭ）［Ｊ］．Ａｎｎ Ｂｏｔ，９３（６）：６２９－６５２
Ｎｉｎｇ ＹＦ（宁有丰），Ｌｉｕ ＷＧ（刘卫国），Ｃａｏ ＹＮ（曹蕴宁）．２００２．
Ｈｏｗ ｄｏｅｓ ｔｈｅ ｃａｒｂｏｎ ｉｓｏｔｏｐｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｔｈｅｃｌｉｍａｔｅｄ
ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｉｎｇ（植物生长过程中碳同位素分馏对气
候的响应）［Ｊ］．Ｍａｒ Ｅｃｏｌ Ｑｑｕａｔ Ｇｅｏｌ（海洋地质与第四世纪地
质），２２（３）：１０５－１０８
Ｏｓｍｏｎｄ ＣＢ．１９７８．Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａｎ ａｃｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：ａ ｃｕｒｉｏｓｉｔｙ ｉｎ
ｃｏｎｔｅｘｔ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２９：３７９－４１４
Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ Ｕ，Ｓｃｈｌｉｗａ Ｕ，Ｂｉｌｇｅｒ Ｗ．１９８６．Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ ｏｆ
ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｎｏｎｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ ｗｉｔｈ ａ ｎｅｗ ｔｙｐｅ ｏｆ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ［Ｊ］．Ｐｈｏ－
ｔｏｓｙｎｔｈ Ｒｅｓ，１０（２）：５１－６２
Ｓｈｕｌｚｅ ＥＤ．１９８６．Ｗｈｏｌｅ－ｐｌａｎｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｄｒｏｕｇｈｔ［Ｊ］．Ａｕｓｔｒ Ｊ
Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ，１３（１）：１２７－１４１
Ｕｒｅｙ ＨＣ．１９４７．Ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｉｓｏｔｏｐｉｃ ｓｕｂ－
ｓｔａｎｃｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，１５２：５６２－５８１
Ｗａｌｔｅｒ Ａ，Ｃｈｒｉｓｔ ＭＭ，Ｒａｓｃｈｅｒ Ｕ，ｅｔ ａｌ．２００８．Ｄｉｅｌ ｇｒｏｗｔｈ ｃｙｃｌｅｓ
ｉｎ Ｃｌｕｓｉａ ｓｐｐ ａｒｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｃｈａｎｇｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｃ３ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ａｎｄ Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａｎ Ａｃｉｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｄｕｒｉｎｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｄｕｒ－
ｉｎｇ ｗａｔｅｒ ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ，３１：４８４－４９１
Ｗｉｎｔｅｒ Ｋ，Ｈｏｌｔｕｍ ＪＡＭ，Ｅｄａｗｒｓ ＧＥ，ｅｔ ａｌ．１９８２．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｏｗ
ｒｅｌａｔｉｖｅ ｈｕｍｉｄｉｔｙ ｏｎδ１３ Ｃ ｖａｌｕｅ ｉｎ ｔｗｏ Ｃ３ｇｒａｓｓｅｓ ａｎｄ ｉｎ Ｐａｎｉｃｕｍ
ｍｉｌｉｏｉｄｅｓ，ａ Ｃ３－Ｃ４ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ ｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｅｘｐ Ｂｏｔ，３３（１）：
８８－９１
Ｗｉｎｔｅｒ Ｋ，Ｓｍｉｔｈ ＪＡＣ．ｅｔ ａｌ．１９９６．Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａｎ ａｃｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ
［Ｍ］／／Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｅｃｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ
ｓｔｕｄｉｅｓ ｖｏｌ １１４．Ｂｅｒｌｉｎ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ
Ｚｈａｏ ＢＺ，Ｋｏｎｄｏ Ｍ，Ｍｅａｄａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．２００４．Ｗａｔｅｒ－ｕｓｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ
ａｎｄ ｃａｒｂｏｎ ｉｓｏｔｏｐｅ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｗｏ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｏｆ ｕｐｌａｎｄ ｒｉｃｅ
ｄｕｒｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅｓ ｕｎｄｅｒ ｔｈｒｅｅ ｗａｔｅｒ ｒｅｇｉｍｅｓ
［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ ＆Ｓｏｉｌ，２６１（２）：６１－７５
０７３ 广 西 植 物 ３２卷