全 文 :收稿日期:2004-07-28;修回日期:2004-10-28
基金项目:江西省教育厅资助课题 (赣教财 [ 2003] 97号);江西科技师范学院 2003年重点资助课题相关研究
作者简介:肖伟洪 (1962-), 男 (汉), 广东人 , 副教授 , 联系电话:(0791) 3805183。
3种金缕梅科植物提取物对动物皮肤防护研究
肖伟洪1 , 杨春华2 , 徐秋林3 , 吴玉萍4
(1.江西省有机功能分子重点实验室 , 江西 南昌 330013;2.江西省皮肤病专科医院 , 江西 南昌 330001;
3.南昌市卫生防疫站 , 江西 南昌 330000;4.江西教育学院 化学系 , 江西 南昌 330006)
摘要:通过抑菌 、 热板镇痛 、 抗炎 、 皮肤刺激性和强紫外线辐射实验 , 研究了江西野生金缕梅 、 木 、 枫
香3 种金缕梅科植物的乙酸乙酯提取物对小鼠皮肤综合防护作用。实验结果表明:对实验菌株有抑制作用 ,
明显提高小白鼠痛阈 , 能极显著减少二甲苯所致的小白鼠耳廓炎症肿胀度;在实验浓度范围内对皮肤无刺
激性和过敏反应 , 外涂能明显降低组织中因强紫外线辐射产生的丙二醛的含量;该 3种金缕梅科植物的乙
酸乙酯提取物对皮肤具有抑菌 、 镇痛 、 抗炎和减轻紫外线照射引起的自由基损伤等综合防护作用。
关键词:化妆品原料;金缕梅科植物;提取物;动物皮肤
中图分类号:TQ658.2 文献标识码:A 文章编号:1001-1803(2005)01-0027-03
鞣质是金缕梅科植物的主要活性成分[ 1] 。鞣质具
有收敛性 , 能凝固微生物的原生质 , 有一定的抗菌作
用 , 鞣质外用能沉淀蛋白质 , 用作创面保护药和局部
止血药 , 治疗烧 、烫伤 , 鞣质还能作为生物碱和重金
属中毒时的化学解毒剂 , 它能与这些物质生成沉淀 ,
减少吸收或不被人体吸收[ 2] 。对江西野生金缕梅[ 3] 、
木[ 4]和枫香[ 5] 3种金缕梅科植物的乙酸乙酯提取物
进行抑菌实验以及对实验动物进行抗炎实验 、刺激性
试验 、 过敏试验及防紫外线辐射作用研究还未见报
道。作者旨在为开发对皮肤具有抑菌 、 抗紫外线辐
射 、 抗氧化 、镇痛 、 抗炎症与无刺激和过敏反应等综
合防护作用的天然化妆品原料提供实验依据 。
1 材料和仪器
动物:昆明种小鼠 (合格证号 0219602), 4 周
龄 , 平均体重 18 g±2 g , 由江西医学院动物科学部
提供 。
紫外线光源及测试仪器:SHG-250紫外线光纤
仪 , 日本;UVA和 UVB双通道紫外辐照计 , 北京师
范大学光电研究所。
植物来源和提取物:金缕梅由庐山通远植物管理
站和江西武宁县野生植物园提供;枫香 、 木采自南
昌市郊梅邻山区 , 由江西科技师范学院李以镔教授 、
江西农业大学周芝德教授和庐山植物园副馆长鲍海鸥
鉴定确定;提取物由研究小组参照文献 [ 6 ~ 8] 制
备。由于用乙醇提取易发生醇解反应 , 实验用乙酸乙
酯萃取 , 减压加热回收乙酸乙酯 , 最后得到有色提取
物 , 稀释液为 m(提取物)∶m(蒸馏水)=1∶20 (以下
称稀释液), 冷藏保存。
2 方法及结果
2.1 抑菌实验[ 9]
试验菌株:金黄色葡萄球菌 ATCC6538 , 大肠埃
希氏菌 ATCC25922由中国普通微生物菌种保藏中心
提供 , 培养代数 6代 , 抑菌环直径试验结果见表 1。
表 1 抑菌试验结果
Tab.1 Results of anti-bacteria tests
组别 抑菌环直径/mm金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 绿脓杆菌
金缕梅组 14.3±1.2 9.0±0.7 12.0±0.4
枫香组 13.3±1.2 8.0±1.1 10.0±0.4
木组 12.5±1.0 9.0±0.7 11.6±0.8
对照组 <7.0 <7.0 <7.0
注:p<0.01。
2.2 小鼠热板法镇痛实验[ 10]
在可调电热恒温水浴锅内放入一大烧杯 , 使其保
持55 ℃±0.5 ℃。将健康雌性小白鼠放入烧杯内 , 以
小白鼠舔后足反应的潜伏期为痛阈指标 , 观察并记录
其发生疼痛反应所需时间 。潜伏期小于5 s或大于30 s
的小白鼠剔除 。选用 44只小白鼠 , 随机分为 4 组 ,
每组 11只 , 然后各组分别将稀释液和蒸馏水涂于小
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第 35卷第 1 期
2005年 2 月 日 用化 学 工业China Surfactant Detergent &Cosmetics Vo1.35 No.1Feb.2005
DOI :10.13218/j.cnki.csdc.2005.01.008
白鼠四肢1 min , 30 min后再测定潜伏期时间 , 结果见
表2 。
表 2 热板法镇痛实验结果
Tab.2 Results of hot plate pain threshold tests
组别 动物数 痛阈差值(X±SD)/min
金缕梅组 11 5.23±3.481)
木组 11 4.30±3.482)
枫香组 11 4.21±2.633)
蒸馏水对照组 11 1.52±0.48
注:1) p<0.01;2) p<0.01;3) p<0.01。
2.3 小鼠耳肿胀法抗炎实验[ 11]
选取健康小白鼠 44只 , 雌雄各半 , 随机分 4组 ,
每组 11只 , 用稀释液组为0.2 mL/只 , 空白组为等量
蒸馏水 , 用二甲苯致炎0.05 mL/只 。15 min后将小白
鼠麻醉处死 , 剪下双耳用直径6 mm打孔器分别在同
一部位打下圆耳片 , 电子天平称重 , 右耳片重减去左
片重即为炎症肿胀度 。结果见表 3。
表 3 耳肿胀法抗炎实验结果
Tab.3 Results of anti-inflammation tests
组别 动物数 肿胀度/mg 抑制率/ %
金缕梅组 11 7.27±0.261) 34.67
木组 11 8.38±0.452) 35.18
枫香组 11 8.25±0.423) 31.61
对照组 11 11.86±0.65 —
注:1) p<0.01;2) p<0.01;3) p<0.05。
2.4 急性皮肤刺激性试验[ 12]
按文献选用健康家兔为受试对象 , 随机分 4组。
皮肤刺激反应评分见表 4。
表 4 皮肤刺激反应评分结果
Tab.4 Comments on skin irritative test
组别 动物数 皮肤反应 积分
金缕梅组 4 无红斑 无水肿 0
木组 4 无红斑 无水肿 0
枫香组 4 无红斑 无水肿 0
蒸馏水对照组 4 无红斑 无水肿 0
2.5 皮肤过敏试验[ 13]
方法:250 g ~ 320 g豚鼠 40只 , 均分为 4组 , 所
有动物均于实验前24 h脊柱两侧脱毛40 cm2。各组动
物的涂稀释液次数均为 3 次 , 即脱毛后24 h 、 6 d 、
14 d , 并以末次涂药后14 d各组动物分别用相应稀释
液涂于右侧脱毛区 , 6 h后去了药物 , 即刻 、 12 h 、
24 h和72 h , 动态观察皮肤过敏情况。
结果:各组动物均未出现皮肤水肿 , 质量分数为
1 %的 2 , 4-二硝基氯苯丙酮溶液组有 7只动物出现
轻度皮肤红斑 , 1只出现中度皮肤红斑;其他各组未
见任何皮损。
2.6 防紫外线辐射实验[ 14]
利用 SHG -250 紫外线光纤仪距 30 cm 照射
30 min , (强 度 254 nm:1 430μm/cm2 , 297 nm:
2 200 μm/cm2 , 365 nm: 6 800μm/cm2 , 420 nm:
4 500 μm/cm2)诱发小鼠皮肤丙二醛变化 ,外涂稀释液
对脂质过氧化产物———丙二醛(MDA)的影响(MDA试
剂盒购自南京建成生物工程研究所)见表5。
表 5 强紫外线辐射实验
Tab.5 Strong UV irradiation test
组别 处理 MDA (X±S)/nmol·mg -1
蒸馏水 外涂 16.16±1.31
金缕梅组 外涂 3.23±0.071)
木组 外涂 4.51±0.062)
枫香组 外涂 3.58±0.083)
注:1) p<0.01;2) p<0.05;3) p<0.01。
3 讨论
欧美国家主要致力于北美金缕梅提取物用于过敏
皮炎 、 皮肤病防 治 、 皮 肤收敛 化妆品 应用研
究[ 15 ~ 19] , 美国食品及药物管理局称之为 “安全有效
的收敛剂”[ 20] 。日本花王公司使用植物金缕梅提取物
开发出一种新型 “尿不湿” , 能够有效地抑制和缓解
婴儿发生皮肤斑疹的症状 。此实验研究结果提示:我
国野生金缕梅 、 木 、枫香 3种金缕梅科植物的乙酸
乙酯提取物抑菌作用与空白组比具有明显差异 (p<
0.01), 与对照组比较能显著抑制二甲苯对鼠耳肿胀
致炎作用 (p<0.05), 对炎症的早 、 中期均有明显的
抑制作用 , 热板法镇痛实验显示能明显延长小鼠痛阈
出现的时间 (p<0.01);皮肤刺激反应评分结果表
明:无刺激 , 皮肤过敏试验显示使用对象可不受限
制;防紫外线辐射实验表明:能防止 UV照射所致的
皮肤红斑等伤害 , 增加皮肤弹性和平滑度。其综合功
效性较功能单一添加剂更为优异 , 作用机理是含有的
活性成分 ———分子质量和分子结构不同植物多酚与皮
肤两种主要皮肤蛋白质 (胶原质 、 弹性蛋白)相结
合 , 增加了胶原纤维的化学稳定性和物理稳定性 。酶
作用 (如透明质酸酶 、酪氨酸酶)能防止皮肤受各种
酶的分解和暴露于紫外线辐射而导致的炎症 , 减轻脂
质过氧化物的堆积 , 对多种诱变剂 (紫外光 、化学品
等)具多重抑制活性 , 并能促进生物大分子和细胞的
·28·
研究与开发 日 用 化 学 工 业 第 35 卷
损伤修复 。鞣花型单宁聚合物 (ellagtaninpolymer)具
有非常强的抗过敏性 , 抑制化学介质如组胺等的释
放 , 从而产生对皮肤抑菌 、镇痛 、 抗炎 、抗氧化及减
轻紫外线照射引起的自由基损伤等综合防护作用 。
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Experimental study of protection animals skin of three wild
hamamelidaceae plants extract
XIAO Wei-hong1 , YANG Chun-hua2 , XU Qiu-lin3 , WU Yu-ping4
(1.Jiangxi Key Laboratory of Function Organic Molecules , Nanchang 330013 , China;2.Jiangxi Hospital of Skin Diseases ,
Nanchang 330001 , China;3.Nanchang Center of Health &Epidemic Prevention , Nanchang 330001 , China;
4.Departement of Chemistry Jiangxi Education Institute , Nanchang 330006 , China)
Abstract:Three kinds of wild plant grown in Jiangxi province , namely Hamamelis mollis , Corylopsis sinensis and Liq-
uidambar formosana were studied for their comprehensive protection effects on the skin of guinea-pigs.Samples of the plants
were extracted using ethyl acetate as solvent and the extracts were treated separately by a series of tests , including bacteria
restraining test , hot plate pain threshold test , anti-inflammation test , skin irritative test and strong UV irradiation test.
The experimental results indicate that the extract has restraining effect on the bacteria used in the experiment , can enhance
markedly the guineas pain threshold , can alleviate the inflammation of guinea pigs ears induced by dimethylbenzene remark-
ablely.There were no skin irritative and allergic reactions under the experimental conditions.Smearing the extraction content
could significantly reduce the concentration of malondialdehyde in UV irradiation induced in the guineas skin.Obviously ,
the extract from these three plants using ethyl acetate as solvent have good comprehensive protection effects on restraining bac-
teria , analgesia , anti-inflammation and alleviate free radicals injury of guinea pigs skin resulted from UV irradiation.
Key words:raw material of cosmetics;hamamelidaceae;extract;animals skin
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第 1期 肖伟洪等:3 种金缕梅科植物提取物对动物皮肤防护研究 研究与开发