全 文 ：( 7 ) 一9 88 ~9 9 1
十字花科独行菜属 z碑 z〕 id i“ m用 e ye n i i是一种分
布在秘鲁高海拔地区的植物 , 其梨形块茎胚轴具有
很高的营养价值 。 当地印第安人用其治疗贫血 、 肺
结核 、 不育以及疲劳等病症 。 本次首次采用高效液
相色谱法 , 以从中分离到的 5 个化合物为主要指标 ,
对 么 m ey en l’ 进行 了定性和定量研究 。
材料和方法 : ①对照品 l ( 10 , 12 一二烯一 14一酮一 18
酸 ) 、 2 ( N 一节基一 1 0 , 1 2一二烯一 14 一酮一 18 酞氨 ) 、 5 ( N -
节基一 16 酞氨 ) 由本实验室经过柱层析和制备型液相
由原药材中分离得到 , 并经过薄层色谱 、 光谱和质
谱数据确认其结构 。 对照品 3 (亚麻酸 ) 和 4 ( 亚油
酸 ) 从 lA idr hc 公司购得 。 ②供试品溶液的制备 : 取
药材或成品制剂 1 . 009 , 用 3mL 甲醇超声提取 3 次 ,
每次 10而 n , 将提取液离心 (3 0() 0 r ) 10而 n , 上清
液用甲醇定容至 or mL
, 过 .0 45 林m 微孔滤膜即得 。
③色谱条件 : S y n e r g〕 M xA
~
R p s叭 ( 巧。~ x 4 . 6~ ,妞m ) 色谱柱 ; 流动相为 A 含 .0 025 % T E A 的水 , B
含 .0 025 % 1下A 的乙睛 , 梯度洗脱 , 35 而 n 内 B 由
55% 线性变化到 95 % ; 流速 1 1l lU而 n , 柱温 4 0℃ ;
检测波长 2 10 lun 和 280 ln ; 进样体积 or 林L 。
结果和讨论 : 在以上色谱条件下 , 各化合物达
到良好分离 , 化合物 1 和 2 的检测波长为 2 80 mn ,
化合物 3一 5 的检测波长为 1Z 0n m 。 化合物 l 、 2 和 5
的线性范围为 2 . 1~ 50 林岁】征 , 化合物 3 和 4 的线性
范围为 .6 2一 1 5 0 0林g/ m山 , 各标准曲线的相关系数均
大于 .0 9 9 9 。 各色谱峰的纯度均经过 PD A 检测器检
查 , 没有杂质峰的干扰 。 加样回收率分别为 10 2 , 5 6%
( l )
、
9 7
.
1 1% ( 2 )
、
10()
.
0 2% ( 3 )
、
10
.
3 7% ( 4 ) 和
9 9
.
2 8% ( 5 )
。 该方法简便准确 。
\ (赵宇新摘译 )
08 0 超临界流体萃取和液相色谱一电喷雾质谱分析
长春花中的长春碱 〔英〕 / C h io Y … / C he m P h ar m
B ul l一20 2
,
5 0 ( 9 ) 一 1 2 9 4一 12 9 6
由 于 长 春碱 和 长春 新碱 在 原 植物 长春 花
( aC ht
“ ar n ht “ : or se “ : ) 中的含量较低 , 难 以对其进
行提取和分析 。 本次试图采用超临界流体萃取 ( SFE )
方法对长春花中的长春碱和长春新碱进行提取 , 并
通过液相色谱一电喷雾质谱 ( H P L C 一E S fI M )S 对其进
行分析 。
材料和方法 : ①有机溶剂提取 : 取长春花地上
部分和根 ( 20 0mg ) , 分别用甲醇提取 , 将提取液真
空干燥 , 提取物用甲醇溶解后过 .0 45 林M 微孔滤膜 。
②超临界流体萃取 : CO : ( 9 .9 %纯度 ) , 40 ℃ 、 60 ℃
或 80 ℃ , 压力 or 一 34 .O M aP 。每次提取样品 Zo mg ,限制器温度 80 ℃ , 静态提取 5 0而 n , 动态提取时使
用 C O : 总量为 5 0 m L , 流速 l m L /而 n 。 为了评估不同
修饰剂 ( 甲醇 、 含 10% 二乙胺的甲醇和含 10% 三
乙胺的甲醇 ) 对提取效果的影响 , 在 80 ℃ 、 34 .0 M aP
条件下 , 通过注射泵分别于提取器 中连续注入不同
浓度 ( 1% 、 5% 、 10 % 、 2 0% ) 修饰剂 。 提取物用含
有 10 n止 甲醇的容器收集 , 蒸干 甲醇 , 用 1l l l L 甲醇
将残余物重新溶解 , 过 .0 45 林M 微孔滤膜后备用 。 ③
H PL C
一
E S I八 15 分析 : A ig len t n o 液相色谱仪 ( D A D
检测器 , 自动进样器 , 柱温箱 , 脱气机 ) ; 2泊r b a x B on us
RP
~
1 8 ( 15 0m m X Z
.
l
m
,
s p M ) 色谱柱 , 柱温 4() oC ,
ZOmM 的乙酸钱一乙睛梯度洗脱 ( 0而 n , 7 0 二 30 ;
3 0而 n , 2 5 : 7 5 ; 4 5而 n , 2 5 : 7 5 ) , 流速 0 . 2 n正j而 n ;
进样 5匹 、 检测器为带有电喷雾接口的 A igl en t n o
CL M/ S D 离子阱质谱仪 。 氮气雾化 , SU m i n , 压力
2即 5 1 , 温度 3 5 0 oC , 电压一 1 . I K v , E S l lM s 采用阳离
子模式分析 , 在 琳全10 0一 1 5 0 0 范围内扫描 。
结果 : ①与 U V 检测比较 , 采用 E S I /M S 阳离子
模式分析长春碱和长春新碱更为灵敏 , 最低检测限
为 1 . Ogn 。 ②质谱数据表明 , 在阳离子模式下 , 长春
碱和长春新碱均显示 〔M + H 〕 一的分子离子峰 , ”收
分别为 s n 和 8 2 5 , 采用提取离子流的方式进行检测 ,
2 个化合物标准曲线的相关系数分别为 0 . 9 965 和
0
.
9 9 5 1
。 测得原植物地上部分 中长春碱的含量为根中
含量的 7 倍 , 而两个部分中的长春新碱均为痕量 。
③在 S FE 提取过程中 , 温度和压力的增加未能明显
提高长春碱的提取率 , 而碱性修饰剂的加入可 以有
效提高长春碱的溶出率 。 最佳提取条件为 C O Z一甲醇 -
三 乙胺 ( 8 0 : 18 : 2 ) , 温度 8 0 oC , 压力 3 4 . oM p a ,
提取率为甲醇提取的 7 6 . 6% 。
(赵宇新摘译 )
08 1 肉众蓉的生药学研究 ( 3) ; 基于质体甲s2 基因
和 , 116 一 , 114 基因间隔序列分析列当科植物的生
源关系 〔英 〕 /T oa m nN … /Bi
ol h Pr a m Bl ul 一0 0 2 2
,
2 5 ( 2 ) 一2 18一 2 2 2
中国药典中记载药材肉从蓉的原植物仅为列 当
科植物 C i s at cn he de se r t ic o la , 而中药材市场上存在
一定数量的生药来自 C : a lsa 和 C ut b “ lo sa , 难以从
形态学和化学特征加以鉴别 。 本次通过比较其 , s2
基因和 塑 1 6一 rP l 4 基因间隔区的核昔酸序列 , 分析
这些植物的分类和生源关系 。
以植物总 D N A 作模板 , 以烟草 ( iN co t ia n a
at ba
c u m )和 EP 扣 g u s v e 塔i n ia n a 的 , 5 2基因为标准
设计引物 , 从所有样品中均获得了具有理想大小的
约 s o ob p 的 rP sZ 基因片段 , 以常用的合成引物和植
物总 D N A P C R 得到理想的 rP l l6 ~ , 114 间区的约
s o b p 的序列片段 , 从而成功地进行核昔酸序列比
较分析 。 将肉从蓉样品可分成 6 种基因类型 ( C D 一 C 、
C S
一
C x
、
C S
一
C n
、
C S
一
T
、
C T
一
C x
、
C -T P )
, 并概要列
出基因间差异核昔酸的数目 。 6 种基因型中 , rP sZ
基因有 5 个位点存在碱基置换 , 对于 rP l l6 一 rP l 4
基因间区序列 , 5 个基因型中有 32 个位点存在碱基
置换 ( 在 , 116 的 3’端外显子与 rP l l4 基因间区内有
18 个位点存在碱基置换 ) 。基于 , s2 基因和 rP l 6一
rP l 4 间区序列的同源性树图分析显示 , 所有肉从蓉
样品被分成两大簇 , 如 e D 、 e s 群 (含 C de s e rt i e o l a
和 C : a l s a 样品 ) 和 C T 群 (含 C t u b u ot s a 样品 ) 。
此外 , C . : al sa 和 C ut bu lo sa 因产地不同而存在种
间 变 异 。 基于序列数据 重建 的 N J 树 显 示 C
de se rt ic
o la 和 C sa ls a 高度同源 。 这些结果与其解
音J学和化学特征区分法一致 。 结果表明 , 肉从蓉种
类可 以根据 rP sZ 基因和 , 1 6一 rP l l4 间区的核昔酸
序列进行区别 。
(鲍 雷摘译 张宁宁校 )
0 82 应用内部简单重复序列 ( sI S R )扩增的大麻
D N A 指纹 图谱 〔英 〕 / K oj o aln M … / lP a nt a
M e d一 20() 2
,
6 8 ( 1 )
一6 0~ 6 3
利用 H P L C 方法可将 3 种不伺的大麻样品分成
四氢大麻酚类 ( T H C ) 和大麻二酚类 ( C B D ) 2 种化
学类型 , 但有 2 种样品不能区分同属 C B D 型 。 本次
利用 is SR 指纹图谱进行鉴别 。
材料和方法 : ①植物样品 : 不同地区的 3 种大麻
椒X ) l 、 椒拓 6 和 荆润4 用于指纹鉴定和化学成分分析 。
② D N A 提取 : D N A 用修饰的 O 队 B 法从生长 4d0 的
新鲜大麻叶 ( 巧o grn ) 中提取 , 纯化后用无菌水调至
终浓度 .0 5呵匹 。 ③ S s R 引物 : 使用 4 种引物 :
80 8 ( A G )厂 、 8 1 1 (G A )8C 、 8 2 7 (A C ) 8G 、 8 3 4 (A G ) Y T
( Y
: 喀陡 ) 。 ④ CP R 扩增及 PC R 产物电泳检测 。
结果 : ① HPL C 分析 : # 0 0 1 富含 T H C l( . 41 %一
1
.
6 6% )而少含 C B D ( 0 . 1 1%一 0 . 2 3% ) , #加 6 和 #0 以
则富含 C B D ( 分别为 .0 5 3% 一 1 . 49 % 和 .0 34 % 一
.0 9 4% ) 而少含 T HC ( 分别为 .0 05 % 一 0 . 18 %和
.0 0 8% ~ 0
.
19 % )
。
#0 0 6 和 # 0 0 4 的色谱图极其相似 ,
无法区别 。 ② IS S R 分析 : 从最初的 81 S S R 引物来
看 , 4 个 S S R 引物均产生清晰的可复制条带 , 因此
被用于鉴别 3 个不同的样品 。 用 N o . 8 0 8 、 8 1 1、 8 2 7 、
8 3 4 引物可分别得到 8 、 4 、 4 、 9 个清晰条带 。 25 个
条带中 , 其中 2 个具有多态性。 # 0 0 1与 #0 6 6 的遗
传不相似指数为 0 . 3 , 润 4 4 与 们 0 1 和 湘6 组的遗
传不相似指数为 .0 60 。 各种大麻均可基于 IS S R 指纹
图谱分为独特的遗传类型 , 尤其是对无法用 H P L C
法区分的 #以 4 和 #肠 6 样品进行比较时 , 可用 sI SR
指纹图谱区分 。 结果表明 , IS S R 指纹图谱法适合用
于评价大麻样品间的遗传差异 。
(鲍 雷摘译 张宁宁校 )