全 文 ：华南农业大学学报 2016，37(1) :46-51
Journal of South China Agricultural University
http:∥xuebao． scau． edu． cn
doi:10． 7671 / j． issn． 1001-411X． 2016． 01． 008
收稿日期:2015-04-09 优先出版时间:2015-12-07
优先出版网址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /44． 1110． s． 20151207． 1116． 016． html
作者简介:孙 涛(1989—)，男，硕士研究生，E-mail:nkxsuntao@ 163． com;孙之潭(1979—)，男，硕士，E-mail:zhitansun2001@
yahoo． com;对本文贡献相同;通信作者:钟国华(1973—) ，男，教授，博士，E-mail:guohuazhong@ scau． edu． cn
基金项目:广东省自然科学基金(05006634)
孙 涛，孙之潭，胡美英，等．鱼藤属植物内生青霉菌代谢产物的提取及杀蚜活性分析［J］．华南农业大学学报，2016，37(1) :46-51．
鱼藤属植物内生青霉菌代谢产物的
提取及杀蚜活性分析
孙 涛，孙之潭，胡美英，钟国华
(华南农业大学 昆虫毒理研究室，广东 广州 510642)
摘要:【目的】从鱼藤属 Derris植物的内生真菌中筛选代谢物具有杀虫活性的内生真菌，并验证其代谢产物的杀蚜
活性。【方法】以毛鱼藤 D． elliptica、白花鱼藤 D． alborubra、蜜花鱼藤 D． thyrisiflora 和肇庆鱼藤 D． hacei 等鱼藤属植
物的内生真菌为研究对象，采用经典形态学方法鉴定所分离内生真菌，对其代谢产物进行高效液相色谱(HPLC)检
测，筛选出目的菌株。利用不同提取方法和提取溶剂优化目的菌株代谢产物的提取，采用浸虫法研究其代谢产物
的杀蚜活性。【结果】从毛鱼藤根部筛选到 1 株代谢产物具有杀虫活性的内生青霉菌，其菌丝体的提取试验和发酵
液的萃取试验表明，三氯甲烷是最好的提取溶剂和萃取溶剂，超声波法能够有效提取内生青霉菌丝体中的杀虫活
性物质，提取率达 4. 156%。三氯甲烷提物对萝卜蚜成蚜活性最高，24 和 48 h 的 LC50分别为 1. 570 和 0. 953
mg·mL －1。【结论】确定了鱼藤属植物内生真菌代谢产物的提取方法，并证实了代谢产物具有类似鱼藤酮的杀虫
活性，其具体化学结构仍待进一步确证。
关键词:鱼藤;内生真菌;代谢产物;萝卜蚜
中图分类号:S481． 1 文献标志码:A 文章编号:1001-411X(2016)01-0046-06
Extraction of secondary metabolites of Penicillium sp． in Derris
plants and bioactivity assay against Lipaphis erysimi
SUN Tao，SUN Zhitan，HU Meiying，ZHONG Guohua
(Laboratory of Insect Toxicology，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China)
Abstract:【Objective】To screen out one strain of endophytic fungi which might produce insecticidal sec-
ondary metabolites and test its insecticidal activity against Lipaphis erysimi．【Method】Endophytic fungi in
insecticidal plants，including Derris elliptica，D． alborubra，D． thyrsiflora and D． hacei，were studied．
Endophytic fungi isolated from Derris plants were identified by classical morphological method，and their
secondary metabolites were identified using high-performance liquid chromatograph(HPLC)to obtain the
objective strains． Various extraction methods and extraction solvents were used to optimize the extraction
of secondary metabolites． Insecticidal activity against L． erysimi was studied by immersion of the insect
bodies．【Ｒesult】One strain of endophytic fungi of Penicillium sp．，which produced insecticidal metabo-
lites，was screened out from the roots of D． elliptica． Extracting tests on the mycelia and fermentation of
endophytic Penicillium sp． indicated that chloroform was the best extracting solvent，and bioactive com-
pounds could be effectively extracted using supersonic method with an extracting rate of 4. 156% ． Chloro-
form extract had the highest efficiency against the adults of L． erysimi，of which LC50 was 1. 570 mg·mL
－1
after 24 h and 0. 953 mg·mL －1 after 48 h． 【Conclusion】This study determines the extraction method of
the secondary metabolites from endophytic fungi of Derris plants，and confirmes that these metabolites
have insecticidal activity similar to rotenone． However，the specific chemical structures of the secondary
metabolites remains to be further confirmed．
Key words:Derris;endophytic fungi;metabolites;Lipaphis erysimi
为了适应复杂的生态环境，自然界中绝大多数
植物都与某类微生物共生着，形成多种形式的植
物 －微生物共生体系统［1］。随着对植物 －微生物共
生体系统的深入研究，内生真菌作为一种新的微生
物资源受到了广泛的关注。至于内生真菌的定义，根
据现在普遍接受的观点，是指那些在某一段时期生
活在植物体内，但对寄主植物组织并不引起任何明
显病害症状的真菌［2］。此定义实际上包括那些专性
寄生真菌、营表面腐生的腐生真菌、潜伏性病原真菌
和菌根真菌。内生真菌在进化过程中与植物寄主建
立了和谐的共生关系，其次生代谢产物十分丰富，具
有多种生物活性如抗肿瘤、抗虫、抗病等，其中某些
产物与宿主的次级代谢产物相同或相似［3］。自 Stro-
bel等［4］在 1993 年首次从短叶红豆杉内生真菌—安
德氏紫杉霉 Taxomyces andreanae 的发酵产物中分离
出抗癌活性物质———紫杉醇以来，从药用植物内部
筛选与开发具有药用价值的真菌资源，寻找新的抗
菌活性物质，进而为植物源药物的生产开辟新途径，
已成为该领域的研究重点与热点。
近年来，植物内生真菌及其次生代谢物在医学
方面的研究较多，在农业上应用的研究也逐渐成为
热点。目前农用内生真菌的研究主要集中在 2 个方
面:一是农作物的内生真菌对农作物本身的影响;
二是对植物内生真菌次生代谢产物的研究，重点是
发现具有农用生物活性的新化合物［5］。国外有文献
报道:从巴布达橄榄 Bontia daphnoides中可分离得到
多节孢属内生真菌 Nodulisporium sp．，该菌会产生一
种具有杀灭大苍蝇幼虫活性的吲哚二萜类球孢子酸
(Nodulisporic acids)［6］。从蓖麻 Ｒicinus communis 中
可分离到 1 株链格孢属霉 Alternaria sp．，其发酵产物
中可分离得到具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的物质，
低浓度即对斜纹夜蛾 Spodoptera litura 具有较高的致
死率［7］。从天然产物中发现新型先导化合物，是新
农药创制的重要途径。内生真菌凭借其可增强作物
抗逆性、促进作物生长和防治病虫害的特点，满足防
治效果好、环境影响低、成本较低和节省农药等植保
方面的要求，将成为新农药研发的重点方向［8］。目
前鱼藤酮主要从鱼藤的根中提取，受到自然资源相
对匮乏的限制，而组织培养的费用较高，很难应用
于农业生产实际。本研究以传统杀虫植物鱼藤的内
生真菌为研究对象，以期从中发现具有产生类似鱼
藤酮的杀虫活性物质的内生真菌，以改善鱼藤资源
匮乏的局面。
1 材料与方法
1． 1 供试菌株
鱼藤内生青霉菌 Penicillium sp．菌株及其他菌株
均为笔者从华南农业大学昆虫毒理研究室杀虫植物
标本园内的毛鱼藤 Derris elliptica、白花鱼藤 D． albo-
rubra 、蜜花鱼藤 D． thyrsiflora 和肇庆鱼藤 D． hacei
等鱼藤属杀虫植物中分离得到。
1． 2 培养基
固体培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基
(PDA)［9］。马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，琼脂 20 g，水
1 000 mL，pH自然。马铃薯去皮，切成块煮沸 2 min，
打浆 1 ～ 2 min，冲洗打浆机，再加葡萄糖和琼脂，溶
化后补足水至 1 000 mL。
液体培养基:马铃薯葡萄糖液体培养基(PD)。
1． 3 供试昆虫
萝卜蚜 Lipaphis erysimi:同翅目蚜科，采自华南
农业大学教学试验农场及昆虫毒理研究室试验菜
地，蚜虫采回后，挑选生长良好、大小一致的无翅成
蚜进行试验。
1． 4 内生真菌的分离、纯化和培养
采用内生真菌常用的分离方法:采集新鲜供试
植物的根和嫩枝，进行表面消毒。首先分别以自来
水和无菌水冲洗 3 ～ 4 次，然后用体积分数为 75%的
乙醇漂洗 5 ～ 15 min，并用无菌水冲洗 3 ～ 4 次，再置
于次氯酸钠溶液 (有效氯体积分数为 10%)漂洗 1
min，最后用无菌水冲洗 4 次。在超净工作台上将消
毒过的植物组织切割成 0. 5 cm ×0. 5 cm小片，移入
PDA平板上，于 25 ℃培养箱中恒温培养。3 ～ 5 d 待
植物样品边缘长出菌丝体后，根据菌丝体的形态特
点(包括菌丝体的颜色、形状和质地等) ，采用尖端菌
丝体挑取法对不同菌株进行分离纯化。采用组织印
迹法检验植物组织的灭菌效果:即将消毒而未切割
的植物组织与固体平板接触 3 ～ 5 min，培养 3 ～ 5 d，
根据平板上菌落的有无判定分离结果的有效性［10］。
74第 1 期 孙 涛，等:鱼藤属植物内生青霉菌代谢产物的提取及杀蚜活性分析
内生真菌的液体培养采用摇瓶发酵法。将纯化
菌株在无菌条件下接入装有 150 mL PD 培养基的
500 mL三角瓶中，将其置于摇床中(25 ～ 28 ℃，ＲH
75% ～85%，光照∶黑暗 = 12 h∶ 12 h)培养，摇床转速
120 r·min －1，培养 7 ～ 9 d。
1． 5 内生真菌活性物质的提取
用 100 目筛将菌丝体由发酵液滤出，置于 45 ℃
烘箱中鼓风烘干，得干菌丝体。
方法 1(冷浸法) :称取一定量的干菌丝体，加入
10 倍体积的甲醇。置于避光暗处，冷浸每次持续 48
h以上，浸提 3 次，提取液合并，减压浓缩得粗提物。
方法 2(组织研磨法) :称取一定量的干菌丝体，
移入研钵中，再加入适量甲醇，研磨至菌丝体完全粉
碎，然后倒出，浸泡提取，提取液减压浓缩得粗提物。
方法 3(超声波提取法) :称取一定量的干菌丝
体，加入 10 倍体积的甲醇，置于超声波仪上，在室温
下提取 3 ～ 5 min，过滤。反复提取 3 次，滤液合并，浓
缩得到超声波粗提物。
方法 4(索氏抽提法) :称取一定量的干菌丝体，
用滤纸包好放入索氏提取器中，加入 20 倍量的甲醇
回流至溶剂为无色时停止。将提取液在旋转蒸发仪
内减压浓缩，得粗提物。
1． 6 发酵液中活性物质的萃取
采用液 －液分配萃取法:量取一定量的发酵液，
用等体积的有机溶剂对发酵液萃取 3 次，然后将有
机相 45 ℃减压浓缩得粗提物，放入冰箱中备用。
1． 7 内生真菌活性物质的分析
对菌丝体甲醇提取物进行高效液相色谱分析
(HPLC) ，以筛选产鱼藤酮或其类似物的内生真菌。
HPLC的检测条件:HP-1000 型高效液相色谱仪为美
国惠普公司制造;HEWLWTT PACKAＲD 色谱柱
(ODS HYPEＲSIL，5 μm，125 mm ×4 mm) ;检测波长!
= 295 nm;流动相为 V(甲醇)∶ V(水)= 75∶ 25;流速
为 1 mL·min －1;检测灵敏度 AUFS = 0. 001;柱温为
常温;进样量为 10 μL。鱼藤酮纯品，质量分数为
97%，购自美国 Sigma公司。
1． 8 对萝卜蚜的毒杀活性测定
对萝卜蚜的毒杀活性测定采用浸虫法。挑取
30 ～ 50 头成蚜放在新鲜的芥蓝叶中，放置 1 ～ 2 h 稳
定后，在供试样品溶液中浸 3 s 后取出，用滤纸吸除
多余溶液，待溶剂干后放入垫有保湿滤纸的 9 cm 培
养皿。稀释溶剂为 V(丙酮)∶ V(水)= 1∶ 1 的溶液，按
下列公式计算死亡率和校正死亡率:
死亡率 =死亡虫数
供试虫数
× 100%，
校正死亡率 =处理组死亡率 ±对照组死亡率100 ±对照组死亡率
×100%。
2 结果与分析
2． 1 毛鱼藤等鱼藤属植物内生真菌甲醇提取物的
高效液相色谱分析
对毛鱼藤、白花鱼藤、蜜花鱼藤和肇庆鱼藤等鱼
藤属植物的内生真菌进行了分离，分离纯化的菌株
总数为 81 株。将所分离纯化的菌株进行扩大培养，
所得菌丝体甲醇冷浸提取，提取物进行高效液相色
谱分析(HPLC) ，以筛选产鱼藤酮类似活性化合物的
内生真菌。从上面供试的 81 个菌株中，筛选到 1 株
代谢产物具有鱼藤酮类似活性的内生真菌，该菌代
谢产物的 HPLC图谱中含有与鱼藤酮标样保留时间
相近的色谱吸收峰(图 1) ，其是否为鱼藤酮或其类
似物还有待进一步鉴定。该内生真菌用经典形态学
方法鉴定为青霉属真菌。该内生青霉菌株在 PDA平
板上的菌落呈墨绿色，色彩较暗，培养基背面鲜红
色，可见水珠状无色渗出液。菌丝体墨绿色、浅黄
色，表面光滑。生长的适温范围为 21 ～ 28 ℃，喜低
温，其分类鉴定地位有待进一步的研究。
A:鱼藤酮标样;B:内生青霉菌代谢产物。
图 1 鱼藤酮标样和内生青霉菌代谢产物高效液相色谱图
Fig． 1 High performance liquid chromatogram of rotenone standard sample and secondary metabolites of endophytic fungi
84 华 南 农 业 大 学 学 报 第 37 卷
2． 2 内生青霉菌不同提取方法甲醇提取物对萝卜
蚜的生物活性
用 4 种常规提取方法对内生青霉菌丝体进行提
取，提取率见表 1。
采用浸虫法，对内生青霉菌丝体不同提取方法
的甲醇提取物进行了生物活性测定，结果见表 2。从
表 2 中可以看出，4 种不同提取方法的提取物对萝卜
蚜均有一定的毒杀活性。其中，以超声波提取法提
取物的毒杀效果最强，处理蚜虫 24 和 48 h的LC50分
别为 3. 056 和 1. 848 mg·mL －1，杀虫活性随处理时
间的增加而增强。结合前面提取率的研究可以看出，
超声波提取法提取物的毒杀效果最强可能与其能够
提取内生青霉菌丝体中大量的活性物质有关。
表 1 内生青霉菌丝体不同提取方法的提取结果1)
Tab． 1 The extraction results of endophytic fungi with different extraction methods
提取方法 青霉菌丝体干质量 /g 提取物质量 /g 提取率 /% 提取物形态及颜色
冷浸法 3． 0 0． 091 ± 0． 011 3． 039 ± 0． 379 b 红褐色固体浸膏
组织研磨法 3． 0 0． 122 ± 0． 011 4． 073 ± 0． 364 a 棕红色固体浸膏
超声波提取法 3． 0 0． 125 ± 0． 011 4． 156 ± 0． 371 a 红褐色固体浸膏
索氏提取法 3． 0 0． 097 ± 0． 002 3． 236 ± 0． 067 b 棕红色固体浸膏
1)表中结果为 3 次重复的平均值，同列数据后凡是有一个相同小写字母者，表示在 5%水平差异不显著(DMＲT法) ;提取
溶剂为甲醇。
表 2 内生青霉菌丝体不同提取方法甲醇提取物对萝卜蚜无翅成蚜的毒力
Tab． 2 Toxicity of methanol extracts of endophytic fungi with different extraction methods against Lipaphis erysimi adults
提取方法 t /h 毒力回归方程1) 相关系数(r) LC50 /(mg·mL
－1) LC90 /(mg·mL
－1) LC5095%置信区间
冷浸法 24 y = － 0． 334 6 + 1． 413 2x 0． 999 6 5． 955 48． 058 5． 907 ～ 6． 004
48 y = － 0． 832 7 + 1． 602 6x 0． 968 4 4． 358 27． 480 4． 328 ～ 4． 390
组织研磨法 24 y = － 0． 479 4 + 1． 525 4x 0． 948 6 3． 909 27． 059 3． 881 ～ 3． 939
48 y = － 1． 036 5 + 1． 752 3x 0． 914 5 2． 785 15． 003 2． 763 ～ 2． 807
超声波法 24 y = － 0． 743 4 + 1． 648 0x 0． 995 0 3． 056 18． 316 3． 032 ～ 3． 080
48 y = － 0． 654 7 + 1． 731 0x 0． 989 9 1． 848 10． 163 1． 833 ～ 1． 863
索氏提取法 24 y = － 0． 452 7 + 1． 492 4x 0． 901 4 4． 503 32． 529 4． 471 ～ 4． 536
48 y = 0． 388 7 + 1． 361 0x 0． 922 3 2． 444 21． 369 2． 422 ～ 2． 467
1)x为浓度的对数值，y为死亡几率。
2． 3 内生青霉菌丝体不同溶剂提取物对萝卜蚜的
生物活性
不同溶剂对内生青霉菌丝体的提取效果如
表 3。
采用浸虫法，测定了内生青霉菌丝体 6 种溶剂
提取物对萝卜蚜成蚜的毒力，其结果见表 4。由表 4
可以看到，内生青霉菌丝体不同溶剂提取物的活性
差异较大，活性最高的是三氯甲烷提取物，24 和 48 h
的 LC50分别为 1. 570、0. 953 mg·mL
－1。活性顺序依
次是三氯甲烷 ＞甲醇 ＞正丁醇 ＞乙醇 ＞丙酮 ＞乙酸
乙酯提取物，活性最低的乙酸乙酯提取物 24 和 48 h
的 LC50分别为 4. 784、3. 631 mg·mL。
表 3 内生青霉菌丝体不同提取溶剂的提取结果1)
Tab． 3 The extraction results of endophytic fungi with different extraction solvents
提取溶剂 青霉菌丝体干质量 /g 提取物质量 /g 提取率 /% 提取物形态及颜色
甲醇 3． 0 0． 129 ± 0． 003 4． 300 ± 0． 113 a 红褐色固体浸膏
乙醇 3． 0 0． 047 ± 0． 006 1． 573 ± 0． 206 d 红褐色固体浸膏
丙酮 3． 0 0． 064 ± 0． 005 2． 149 ± 0． 161 c 棕红色固体浸膏
三氯甲烷 3． 0 0． 080 ± 0． 003 2． 673 ± 0． 087 b 深红色固体浸膏
乙酸乙酯 3． 0 0． 060 ± 0． 004 1． 992 ± 0． 135 c 红色固体浸膏
正丁醇 3． 0 0． 074 ± 0． 005 2． 466 ± 0． 162 b 黑色固体浸膏
1)表中结果为 3 次重复的平均值，同列数据后凡是有一个相同小写字母者，表示在 5%水平差异不显著(DMＲT法)。
94第 1 期 孙 涛，等:鱼藤属植物内生青霉菌代谢产物的提取及杀蚜活性分析
表 4 内生青霉菌丝体不同溶剂提取物对萝卜蚜无翅成蚜的毒力
Tab． 4 Toxicity of different solvent extracts from endophytic fungi against Lipaphis erysimi adults
提取溶剂 t /h 毒力回归方程1) 相关系数(r) LC50 /(mg·mL
－1) LC90 /(mg·mL
－1) LC5095%置信区间
甲醇 24 y = － 0． 608 9 + 1． 603 3x 0． 939 6 3． 149 19． 840 3． 126 ～ 3． 174
48 y = － 1． 068 8 + 1． 849 3x 0． 983 2 1． 912 9． 432 1． 899 ～ 1． 926
乙醇 24 y = － 2． 331 2 + 2． 061 5x 0． 931 1 3． 599 15． 062 3． 575 ～ 3． 625
48 y = － 0． 972 9 + 1． 788 2x 0． 924 3 2． 188 11． 398 2． 174 ～ 2． 203
丙酮 24 y = － 1． 544 6 + 1． 835 8x 0． 946 5 3． 672 18． 327 3． 644 ～ 3． 702
48 y = － 0． 413 2 + 1． 595 1x 0． 968 5 2． 475 15． 742 2． 458 ～ 2． 492
三氯甲烷 24 y = － 2． 552 1 + 2． 362 9x 0． 978 4 1． 570 5． 476 1． 560 ～ 1． 582
48 y = － 0． 093 1 + 1． 709 6x 0． 975 1 0． 953 5． 355 0． 946 ～ 0． 961
乙酸乙酯 24 y = － 1． 340 9 + 1． 723 1x 0． 945 0 4． 784 26． 518 4． 712 ～ 4． 858
48 y = － 1． 114 5 + 1． 717 5x 0． 972 6 3． 631 20． 240 3． 601 ～ 3． 662
正丁醇 24 y = 0． 901 2 + 1． 163 6x 0． 961 5 3． 330 42． 060 3． 293 ～ 3． 368
48 y = 0． 666 4 + 1． 296 8x 0． 973 9 2． 196 21． 380 2． 180 ～ 2． 214
1)x为浓度的对数值，y为死亡几率。
2． 4 内生青霉发酵液不同溶剂萃取物对萝卜蚜的
生物活性
内生青霉发酵液不同溶剂萃取物对萝卜蚜无翅
成蚜的毒力测定结果如表 5。内生青霉发酵液的不
同溶剂萃取物中以三氯甲烷萃取物对萝卜蚜成蚜的
毒杀活性最强，24 和 48 h 的 LC50分别为 2. 967、
1. 787 mg·mL －1。其次为正丁醇萃取物，24 和 48 h
的 LC50分别为 3. 445、2. 202 mg·mL
－1。结合前面的
活性追踪过程，三氯甲烷对内生青霉菌的活性物质
具有较好的提取效果，提取和萃取试验的活性测定
结果均证实了这一点。
表 5 内生青霉发酵液不同溶剂萃取物对萝卜蚜无翅成蚜的毒力
Tab． 5 Toxicity of different solvent extracts from endophytic fungi fermentation broth against Lipaphis erysimi adults
萃取溶剂 t /h 毒力回归方程1) 相关系数(r) LC50 /(mg·mL
－1) LC90 /(mg·mL
－1) LC5095%置信区间
三氯甲烷 24 y = － 3． 886 8 + 2． 559 3x 0． 930 0 2． 967 9． 399 2． 948 ～ 2． 987
48 y = － 3． 301 9 + 2． 552 7x 0． 988 1 1． 787 5． 678 1． 778 ～ 1． 796
石油醚 24 y = － 0． 637 1 + 1． 536 0x 0． 948 0 4． 676 31． 931 4． 643 ～ 4． 709
48 y = － 1． 799 0 + 1． 907 1x 0． 950 6 3． 673 17． 260 3． 647 ～ 3． 700
乙酸乙酯 24 y = － 2． 832 8 + 2． 177 7x 0． 958 9 3． 951 15． 318 3． 924 ～ 3． 979
48 y = － 3． 796 1 + 2． 479 2x 0． 967 2 3． 531 11． 612 3． 507 ～ 3． 556
正丁醇 24 y = － 0． 225 2 + 1． 477 2x 0． 975 1 3． 445 25． 395 3． 418 ～ 3． 472
48 y = 0． 780 5 + 1． 262 2x 0． 981 4 2． 202 22． 816 2． 181 ～ 2． 225
1)x为浓度的对数值，y为死亡几率。
3 讨论与结论
植物与内生真菌的关系是互惠共生的，一方面
植物为内生真菌提供光合产物和矿物质;另一方面
内生真菌的代谢物能刺激植物的生长发育，提高宿
主植物对生物胁迫和非生物胁迫的抵抗能力［11］。现
代的内共生理论认为，植物与内生真菌在长期的协
同进化过程中，生物化学途径的连续演化会导致信
息物质在内生真菌与宿主间的相互传递［12］。这一理
论或许能够解释某些植物内生真菌可以产生与宿主
相同或相似的生理活性成分的原因［13］。本研究便是
以传统杀虫植物毛鱼藤、白花鱼藤、蜜花鱼藤和肇庆
鱼藤等鱼藤属植物的内生真菌为研究对象，对鱼藤
内生真菌的代谢产物初步进行 HPLC 检测，从毛鱼
藤根部分离到 1 株代谢产物具有杀虫活性的内生青
霉菌，该菌代谢产物的 HPLC 图谱中含有与鱼藤酮
标样保留时间相似的色谱吸收峰，其是否为鱼藤酮
或其类似物还有待进一步鉴定。蚜虫为鱼藤酮类化
合物的敏感试虫，用鱼藤酮喷雾处理甘蓝蚜的 LC50
为 7. 44 μg·头 － 1［14］。因此本研究采用萝卜蚜进行
生物活性测定，以进一步确定鱼藤酮类似活性化合
物的产生菌。
05 华 南 农 业 大 学 学 报 第 37 卷
内生青霉菌丝体 4 种方法甲醇提取物的生物活
性测定结果表明，超声波提取法能够提取内生青霉
菌丝体中大量的活性物质，提取率为 4. 156%。内生
青霉菌丝体 6 种溶剂提取物和内生青霉发酵液 4 种
溶剂萃取物的生物活性测定结果表明，三氯甲烷是
最好的提取溶剂和萃取溶剂。三氯甲烷提取物对萝
卜蚜成蚜 24 和 48 h 的 LC50分别为 1. 570、0. 953
mg·mL －1;三氯甲烷萃取物对萝卜蚜成蚜 24 和 48 h
的 LC50分别为 2. 967、1. 787 mg·mL
－1。但本研究中
内生青霉菌的代谢产物数量较少，菌丝体甲醇提取
物的产量约为 0. 15 g·L －1。根据 HPLC检测数据结
果来看，鱼藤酮类似活性化合物在内生青霉甲醇粗
提物中仅为 1 /1 000 左右，不足以完成所有的结构鉴
定程序，因此该内生青霉菌产生的鱼藤酮类似活性
化合物的具体化学结构仍待进一步确证。
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【责任编辑 柴 焰】
15第 1 期 孙 涛，等:鱼藤属植物内生青霉菌代谢产物的提取及杀蚜活性分析