全 文 ：第３０卷　第２期
　２０１２年６月　
　 　
四川农业大学学报
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
　 　
Ｖｏｌ．３０　Ｎｏ．２
Ｊｕｎ．２０１２
　　收稿日期：２０１２－０２ －２８
基金项目：国家自然科学基金项目（３０８７０１５４，３０９０００８７）；　四川省教育厅项目。
作者简介：王晓丽，副教授，博士，研究方向：植物系统与进化，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｉａｏｌｉ２８８＠１６３．ｃｏｍ。＊责任作者：周永红，教
授，博士，研究方向：植物系统与进化，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｏｕｙｈ＠ｓｉｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２６５０．２０１２．０２．００５
赖草属林下组植物ＧＢＳＳＩ基因
序列的系统发育与分子进化
王晓丽１，２，罗春莲１，沙莉娜１，周永红１＊
（四川农业大学１．小麦研究所，四川 温江　６１１１３０；　２．生命科学与理学院，四川 雅安　６２５０１４）
摘要：【目的】探讨赖草属林下组植物的种间系统关系与ＧＢＳＳＩ基因的分子进化式样。【方法】对赖草属林下组３
个类群的ＧＢＳＳＩ基因序列进行多克隆测序，并将其与来自小麦族８个代表 Ｎｓ，Ｓｔ，Ｐ，Ｆ，Ｅｅ 和Ｅｂ 基因组的二倍体
植物的ＧＢＳＳＩ序列进行序列与系统比较分析。【结果】基因序列多态性与系统发育分析表明：①Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ和Ｌ．
ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ亲缘关系密切；②不同Ｎｓ基因组供体参与多倍化物种形成可能导致Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ与Ｌ．
ｄｕｔｈｉｅｉ和Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ发生遗传分化；③赖草属林下组植物的ＧＢＳＳＩ基因序列在Ｎｓ基因组拷贝
上的多态性水平低于新麦草属植物Ｎｓ基因组序列多态性。【结论】支持Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ和Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ
互为种与变种的分类等级。复制基因ＧＢＳＳＩ在多倍体中多态性水平不平等。
关键词：赖草属；林下组；ＧＢＳＳＩ基因；系统发育分析；分子进化
中图分类号：Ｑ９４６．２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１０００－２６５０（２０１２）０２－０１４４－０６
Ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ　ａｎｄ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＧＢＳＳＩＧｅｎｅ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｉｎ
ｔｈｅ　Ｓｅｃｔｉｏｎ　Ｓｉｌｉｖｃｏｌａ　Ｃ．Ｙｅｎ　ｏｆ　Ｌｅｙｍｕｓ（Ｐｏａｃｅａｅ；Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ）
ＷＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｌｉ　１，２，ＬＵＯ　Ｃｈｕｎ－ｌｉａｎ１，ＳＨＡ　Ｌｉ－ｎａ１，ＺＨＯＵ　Ｙｏｎｇ－ｈｏｎｇ１＊
（１．Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｎｊｉａｎｇ　６１１１３０，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａａｎ　６２５０１４，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｅ　ａｉｍｓ　ｗａｓ　ｔｏ　ｅｓｔｉｍａｔｅ　ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ－
ｃｏｐｙ　ｎｕｃｌｅａｒ　ＧＢＳＳＩ　ｇｅｎｅ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　Ｓｅｃｔｉｏｎ　Ｓｉｌｉｖｃｏｌａ　Ｃ．Ｙｅｎ　ｏｆ　Ｌｅｙｍｕｓ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｗｏ　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ
ｔｈｅ　ＧＢＳＳＩ　ｈｏｍｏｅｏｌｏｇｏｕｓ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｒｅｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｃｔｉｏｎ　Ｓｉｌｉｖｃｏｌａ
ｔｈｒｏｕｇｈ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｃｌｏｎｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｏｓｅ　ｆｒｏｍ　ｅｉｇｈｔ　ｄｉｐｌｏｉｄ　ｔａｘａ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ
ｔｈｅ　Ｎｓ，Ｓｔ，Ｐ，Ｆ，Ｅｅ　ａｎｄ　Ｅｂ　ｇｅｎｏｍｅｓ　ｉｎ　Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ
ｍａｘｉｍｕｍ　ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ（ＭＬ）．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ａｎｄ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｕｇ－
ｇｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ①Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｗａｓ　ｃｌｏｓｅｌｙ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ；②Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ，Ｌ．
ｄｕｔｈｉｅｉ　ａｎｄ　Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ　ｍｉｇｈｔ　ｄｅｒｉｖｅ　ｔｈｅｉｒ　Ｎｓ　ｇｅｎｏｍｅ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｐｓａｔｈｙ－
ｒｏｓｔａｃｈｙｓ　ｓｐｅｃｉｅｓ，ｌｅａｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ　ａｎｄ　Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ａｎｄ
ｉｔｓ　ｖａｒｉｅｔｙ；③ｐｏｌｙｐｌｏｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｃｔ．Ｓｉｌｉｖｃｏｌａ　Ｃ．Ｙｅｎ　ｏｆ　Ｌｅｙｍｕｓ　ｈａｄ　ｌｏｗｅｒ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＧＢＳＳＩ　ｓｅ－
ｑｕｅｎｃｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｎｓ　ｇｅｎｏｍｅ　ｈｏｍｏｅｏｌｏｇ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉｐｌｏｉｄｓ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｉｔ　ｉｓ　ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ
ｔｏ　ｔｒｅａｔ　Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ　ａｓ　ａ　ｖａｒｉｅｔｙ　ｏｆ　Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ．Ｔｈｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｄｕｐｌｉｃａｔｅ　ＧＢＳＳＩ
ｗａｓ　ｕｎｌｉｋｅｌｙ　ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ　ｉｎ　ｐｏｌｙｐｌｏｉｄｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｅｙｍｕｓ；Ｓｉｌｉｖｃｏｌａ；ＧＢＳＳＩ；ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ
第２期 王晓丽（等）：赖草属林下组植物ＧＢＳＳＩ基因序列的系统发育与分子进化 　　　
　　淀粉是小麦籽粒的重要组成部分，分为直链淀
粉和支链淀粉。胚乳淀粉一般由２０％～３０％的直
链淀粉和７０％～８０％的支链淀粉组成［１］。在胚乳
等储藏器官中，合成直链淀粉的关键酶是颗粒结合
型淀粉合成酶（ｇｒａｎｕｌｅ－ｂｏｕｎｄ　ｓｔａｒｃｈ　ｓｙｎｔｈａｓｅ），也
叫糯蛋白，即ＧＢＳＳ。编码ＧＢＳＳ的基因也叫Ｗａｘｙ
基因，这些基因位点的缺失或突变，会使胚乳中直链
淀粉合成减少，支链淀粉含量上升，小麦胚乳表现为
糯性［２］。ＧＢＳＳＩ是最早发现的ＧＢＳＳ 同工型，其分
子量约为６０ｋＤ左右，其编码基因为单拷贝核基因，
目前已从玉米、马铃薯、大麦、水稻和豌豆中成功克
隆［３］。比较水稻与玉米、大麦的ＧＢＳＳＩ基因序列，
发现它们全长４　８００ｂｐ左右，均含有１３个内含子和
１４个外显子，外显子大小极其相近，它们之间的核
苷酸序列存在高度的同源性，序列变异表现在其内
含子大小变化不等、序列同源性较低［３］。在六倍体
小麦中，ＧＢＳＳＩ基因定位于第７同源群染色体上，
由６１５个氨基酸组成，它的蛋白质前体包括１个分
子量为７ｋＤ的转运肽，有７５个氨基酸，与其他作物
不同的是Ｎ端有１个１１个氨基酸的插入序列［４］。
在ＧＢＳＳＩ基因中，从第９外显子到第１４外显子的
序列（包括外显子和内含子序列约１　２００个碱基）被
成功用到小麦族（Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ）［５］、蔷薇科（Ｒｏｓａｃｅ－
ａｅ）［６］、荚莲属（Ｖｉｂｕｒｎｕｍ）［７］等植物的系统与进化
研究。
赖草属（Ｌｅｙｍｕｓ　Ｈｏｃｈｓｔ．）是 Ｃ．Ｆ．Ｈｏｃｈｓｔｅｔ－
ｔｅｒ［８］提出并以沙生赖草（Ｌｅｙｍｕｓ　ａｒｅｎａｒｉｕｓ （Ｌ．）
Ｈｏｃｈｓｔ．）为模式种建立的禾本科（Ｐｏａｃｅａｅ）小麦族
（Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ）多年生属，主要分布于北半球温寒地带。
根据颜济等［９］的分类系统，赖草属包括沙生组
（Ｓｅｃｔ．Ｌｅｙｍｕｓ　Ｎｅｖｓｋｉ）、草原草甸组（Ｓｅｃｔ．Ａｎｉｓｏｐｙ－
ｒｕｍ （Ｇｒｉｓｅｂ）Ｔｚｖｅｌｅｖ）和林下组（Ｓｅｃｔ．Ｓｉｌｖｉｃｏｌａ　Ｃ．
Ｙｅｎ）。生境上，沙生组植物主要生长在干旱的石质
岩坡及荒漠地带，草原草甸组植物主要生长于半干
旱的草原及开阔草甸区。与沙生组和草原草甸组植
物干旱、半干旱生境相比，林下组植物常年生长于温
暖潮湿的林下。形态上，沙生组和草原草甸组植物
普遍具有强大或匍匐的根茎，而林下组植物通常无
根茎。鉴于林下组植物与其他赖草属植物在生态和
形态上的较大差异，进行林下组植物系统学研究对
赖草属植物多样性及物种形成具有重要意义。
林下组植物包括 Ｌｅｙｍｕｓ　ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｓ （Ｂｏ－
ｌａｎｄ．ｅｘ　Ｔｈｕｒｂ．）Ｍ．Ｂａｒｋｗｏｒｔｈ，Ｌｅｙｍｕｓ　ｋｏｍａｒｏｖｉｉ
（Ｒｏｓｈｅｖ．）Ｊ．Ｌ．Ｙａｎｇ　＆ Ｃ．Ｙｅｎ、Ｌｅｙｍｕｓ　ｄｕｔｈｉｅｉ
（Ｓｔａｐｆ）Ｙ．Ｈ．Ｚｈｏｕ　＆ Ｈ．Ｑ．Ｚｈａｎｇ、Ｌｅｙｍｕｓ
ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ（Ｈａｃｋ．）Ｙ．Ｈ．Ｚｈｏｕ　＆
Ｈ．Ｑ．Ｚｈａｎｇ 及 Ｌｅｙｍｕｓ　ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ
（Ｈａｃｋ．）Ｌ．Ｊ．Ｙａｎｇ　ｅｔ　Ｂ．Ｒ．Ｂａｕｍ。Ｌ．ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｓ
分布仅限于美国加州森林区及靠近海岸荫被处。
Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ分布于我国东北及俄罗斯远东等温寒
地区，生长于山谷林下。Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ呈间断分布于尼
泊尔西部及中国西南山区，生长于海拔６００～２　０００
ｍ的山谷森林下。Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ和
Ｌｅｙｍｕｓ　ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ仅分布于日本，生长
于海拔７００～１　１００ｍ的阴湿山林和沿河的灌丛中。
细胞学研究表明赖草属林下组植物均为异源多倍体
植物，染色体倍性包括四倍体（２ｎ＝４ｘ＝２８）和八倍
体（２ｎ＝８ｘ＝５６），含有 Ｎｓ和 Ｘｍ 两个基本基因
组［９］。细胞遗传学研究［１０］、ＤＮＡ序列分析［１１－１３］、基
因组原位杂交（ＧＩＳＨ）［１０］均表明 Ｎｓ基因组来源于
新麦草属（Ｐｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓ　Ｎｅｖｓｋｉ）植物。关于Ｘｍ
基因组的起源，目前还无定论。形态学证据推测
Ｘｍ基因组可能起源于拟鹅观草属（Ｐｓｅｕｄｏｒｏｅｇｎｅ－
ｒｉａ）的Ｓｔ基因组［１４］或Ｔｈｉｎｏｐｙｒｕｍ　ｂｅｓｓａｒａｂｉｃｕｍ
的Ｅｂ基因组［１５］。细胞遗传学研究推测Ｘｍ基因组
可能起源于 Ｌｏｐｈｏｐｙｒｕｍ　ｅｌｏｎｇａｔｕｍ 的 Ｅｅ 基因
组［１６］。然而，细胞遗传学和ＤＮＡ杂交排除Ｘｍ基
因组起源于Ｅｂ和Ｅｅ基因组的可能性［１０，１７］。Ｚｈａｎｇ
等［１７］认为Ｘｍ基因组的起源可能与 Ｎｓ基因组有
关。基于单拷贝细胞核Ａｃｃ１基因和叶绿体ｔｒｎＬ－Ｆ
序列的系统分析，Ｘ．Ｆａｎ等［１２］和Ｌ．Ｎ．Ｓｈａ等［１３］推测
Ｘｍ基因组的起源可能与冰草属（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ）的Ｐ基
因组和旱麦草属（Ｅｒｅｍｏｐｙｒｕｍ）的Ｆ基因组有关。
本研 究 从 Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ、Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ 和 Ｌ．
ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ的多倍体类群个体中多
克隆测序５～６个ＧＢＳＳＩ基因序列，并将这些序列
与新麦草属（Ｐｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓ）、拟鹅观草属（Ｐｓｅｕ－
ｄｏｒｏｅｇｎｅｒｉａ）、冰草属（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ）、旱麦草属（Ｅｒｅ－
ｍｏｐｙｒｕｍ）、Ｔｈｉｎｏｐｙｒｕｍ　ｂｅｓｓａｒａｂｉｃｕｍ 和 Ｌｏ－
ｐｈｏｐｙｒｕｍ　ｅｌｏｎｇａｔｕｍ 的ＧＢＳＳＩ 序列基因进行序
列和系统比较分析。拟探讨赖草属林下组物种的种
间系统关系和ＧＢＳＳＩ基因在赖草属林下组物种中
的分子进化式样。
１　材料和方法
１．１　实验材料
本研究选用了Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ、Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ和Ｌ．
ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ　３个赖草属林下组植物
５４１
　　　 四川农业大学学报 第３０卷
作为多倍体供试材料。Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ采集于黑龙
江，Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ采集于四川崇州，Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．
ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ由日本京都大学Ｓ．Ｓａｋａｍｏｔｏ博士提
供。为了将其与近缘二倍体的ＧＢＳＳＩ基因序列进
行系统比较分析，除克隆测序了Ｐｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓ
ｈｕａｓｈａｎｉｃａ （Ｎｓ）和 Ｅｒｅｍｏｐｙｒｕｍ　ｄｉｓｔａｎｓ （Ｆ）的
ＧＢＳＳＩ基因序列外，还从 ＮＣＢＩ数据库中获得了５
个基本基因组二倍体供体物种的ＧＢＳＳＩ序列作为
参照，它们是新麦草属的Ｐｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓ
（基 因 组：Ｎｓ，ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦ０７９２７９）和 Ｐｓａｔｈｙ－
ｒｏｓｔａｃｈｙｓ　ｊｕｎｃｅａ （基 因 组： Ｎｓ， ＧｅｎＢａｎｋ：
ＡＦ０７９２８０）、拟鹅观草属的Ｐｓｅｕｄｏｒｏｅｇｎｅｒｉａ　ｓｐｉｃａ－
ｔａ（基因组：Ｓｔ，ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦ０７９２８１）、冰草属的
Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ　ｃｒｉｓｔａｔｕｍ （基 因 组：Ｐ，ＧｅｎＢａｎｋ：
ＡＹ０１１００２）、Ｔｈｉｎｏｐｙｒｕｍ　ｂｅｓｓａｒａｂｉｃｕｍ （基因组：
Ｅｂ，ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦ０７９２８３）、Ｌｏｐｈｏｐｙｒｕｍ　ｅｌｏｎｇａｔｕｍ
（基因组：Ｅｅ，ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦ０７９２８４）。Ｂｒｏｍｕｓ　ｃａ－
ｔｈａｒｔｉｃｕｓ　Ｌ．的ＧＢＳＳＩ序列 ＤＱ１５７０５５作为外类
群。所用材料的凭证标本存于四川农业大学小麦研
究所标本室（ＳＡＵＴＩ）。
１．２　ＤＮＡ提取、ＰＣＲ扩增和测序
ＤＮＡ的提取采用ＣＴＡＢ法［１８］。用于系统分析
的ＧＢＳＳＩ（９－１４ｅｘｏｎ）序列使用特异引物，进行高保
真ＰＣＲ扩增。引物由ＴａＫａＲａ公司（ＴａＫａＲａ，中国
大连）合成，引物序列：５′－ＴＧＣＧＡＧＣＴＣＧＡＣＡＡ－
ＣＡＴＣＡＴＧＣＧ－３′和５′－ＧＧＣＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＡＴＣ－
ＣＣＴＣＧＣＣ－３′。ＰＣＲ 反应体系为５０μＬ，其中含
ｄＮＴＰ　２００μｍｏｌ／Ｌ，引物１．５μｍｏｌ／Ｌ，ＭｇＣｌ２１．５
ｍｍｏｌ／Ｌ，１０×Ｅｘｂｕｆｆｅｒ，Ｅｘ　Ｔａｑ酶１．５Ｕ（ＴａＫａ－
Ｒａ），１００ｎｇ总ＤＮＡ为模板，加重蒸水至终体积为
５０μＬ。ＰＣＲ反应条件为：９４℃预变性４ｍｉｎ；以９４
℃变性４５ｓ，６５℃复性２ｍｉｎ，７２℃延伸１ｍｉｎ，进
行５个循环；再以９４℃变性３０ｓ，６５℃复性４０ｓ，７２
℃延伸４０ｓ，进行３０个循环；最后７２℃延伸８ｍｉｎ。
ＰＣＲ产物在 １．０％ 的琼脂糖凝胶上电泳 （１×
ＴＡＥ），条带分离后，用琼脂糖凝胶回收试剂盒（Ｏ－
ｍｅｇａ，Ｇｅｏｒｇｉａ，ＵＳＡ）对其进行回收。然后，将回收
产物连接到ｐＭＤ１９－Ｔ载体上，以ＤＨ１０Ｂ转化连接
产物，对转化子进行阳性筛选。每个供试材料筛选
５个阳性转化子进行测序，序列测定由华大基因（中
国上海）完成，测序结果进行手工校读。利用ＮＣＢＩ
中的Ｂｌａｓｔ软件包对ＤＮＡ序列进行比对分析，确认
ＧＢＳＳＩ序列的可靠性。
１．３　数据分析
序列多重比对用 ＭｅｇＡｌｉｇｎ软件（ＤＮＡＳｔａｒ，
Ｉｎｃ．）中的Ｃｌｕｓｔａｌ　Ｗ 算法进行［１９］，辅以手工校正。
序列分析包括碱基替代频率、颠换／转换比以及序列
变异采用 ＭＥＧＡ４（Ｋｕｍａｒ　Ｓ，Ｔａｍｕｒａ　Ｋ，Ｊａｋｏｂｓ－
ｅｎ　Ｉ，Ｎｅｉ　Ｍ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｇａｓｏｆｔｗａｒｅ．ｎｅ）进行
统计。基因序列多态性包括比对位点总数（ｎ）、分
离位点数（ｓ）、比对多态性平均数（π），分离位点多态
性平均数（θｗ），序列多态性分析由ＤｎａＳｐ４．０［２０］统
计完成。比对多态性平均数π 是 Ｔａｊｉｍａ估计
值［２１］，为每个位点上序列两两比较后的平均核苷酸
多样性。分离位点多态性平均数θｗ 是 Ｗａｔｔｅｒｓｏｎ
估计值［２２］，为每个位点上差异核苷酸的数目。
系统发育分析采用ＰＡＵＰ４．０ｂ１０软件进行最
大似然法（Ｍａｘｉｍｕｍ　ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ，ＭＬ）分析。利用
Ｍｏｄｅｌｔｅｓｔ　３．７［２３］进行模型和参数估计，基于ｈＬＲＴ
标准选择最适碱基替代模型，ＧＢＳＳＩ基因序列的最
适碱基替代模型为ＧＴＲ＋Ｇ。ＭＬ分析采用启发式
搜索（ｈｅｕｒｉｓｔｉｃ　ｓｅａｒｃｈｅｓ）和树二等分再连接（ｔｒｅｅ－
ｂｉｓｅｃｔｉｏｎ　ｒｅｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ，ＴＢＲ）进行系统树构建，并
采用自展值分析（ｂｏｏｔｓｔｒａｐｓ，ＢＳ）进行检验。
２　结果与分析
２．１　ＧＢＳＳＩ基因序列分析
本研究克隆测序了３个赖草属林下组植物（Ｌ．
ｋｏｍａｒｏｖｉｉ、Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ 和 Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．
ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ）和２个基因组二倍体供体（Ｐｓａｔｈｙ－
ｒｏｓｔａｃｈｙｓ　ｈｕａｓｈａｎｉｃａ和Ｅｒｅｍｏｐｙｒｕｍ　ｄｉｓｔａｎｓ）材料
的ＧＢＳＳＩ序列，共获得１７个ＧＢＳＳＩ序列，其中从
多倍体植物中多克隆测序共获得１５个序列。将所
有克隆获得的ＧＢＳＳＩ序列与来自ＧｅｎＢａｎｋ上代表
Ｎｓ、Ｓｔ、Ｐ、Ｆ、Ｅｅ、Ｅｂ 基因组的６个二倍体供体ＧＢ－
ＳＳＩ序列进行排序后，共得到１　３４３个排列位点，包
括５个外显子和４个内含子，其中保守位点８３７个，
可变位点４６４个，简约信息位点２５５个，碱基序列转
换数（ｓｉ）为１９，碱基序列颠换数（ｓｖ）为２４。
２．２　系统发育分析
采用 ＭＬ法进行系统发育树构建，图１显示的
是 ＧＢＳＳＩ 基 因 的 ＭＬ 树 （－Ｌｎ　ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ＝
６　０４４．５９９　２７；Ａ＝０．２２２　００，Ｃ＝０．２７１　２０，Ｇ＝
０．２９６　６０，Ｔ＝０．２１０　２０；ＧＴＲ＋Ｇ　ｍｏｄｅｌ，Ｓｈａｐｅ　ｐａ－
ｒａｍｅｔｅｒ（ａｌｐｈａ）＝０．４３０　５），分支上的数字代表自展
评估值。系统发育分析将所有２３个ＧＢＳＳＩ序列分
成３个分支（Ｃｌａｄｅ Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ）。Ⅰ支包括 Ｌ．
６４１
第２期 王晓丽（等）：赖草属林下组植物ＧＢＳＳＩ基因序列的系统发育与分子进化 　　　
ｄｕｔｈｉｅｉ的３个克隆（Ｌｅｙｍｕｓ　ｄｕｔｈｉｅｉ　Ｃｌｏｎｅ　１、２和
３）、Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ的２个克隆（Ｌｅｙ－
ｍｕｓ　ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ　Ｃｌｏｎｅ　１和２）、Ｐｓａ．
ｈｕａｓｈａｎｉｃａ、Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ 的 ２ 个 克 隆 （Ｌｅｙｍｕｓ
ｋｏｍａｒｏｖｉｉ　Ｃｌｏｎｅ　１和２）、Ｐｓａ．ｆｒａｇｉｌｉｓ和Ｐｓａ．ｊｕｎ－
ｃｅａ（７６％ＢＳ）。这些多倍体ＧＢＳＳＩ基因序列与二
倍体的新麦草属植物聚为一支，因此代表 Ｎｓ基因
组克隆类型。在Ⅰ支中，Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ、Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．
ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ和Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ的各个克隆序列分
别 形 成 单 系。Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ 和 Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．
ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ为姊妹组（１００％ ＢＳ）。Ｐｓａ．ｈｕａｓ－
ｈａｎｉｃａ与Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ聚在一起（８０％ ＢＳ）。Ｐｓａ．
ｆｒａｇｉｌｉｓ和Ｐｓａ．ｊｕｎｃｅａ处于Ⅰ支的基部。Ⅱ支包
括Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ的２个克隆（Ｌｅｙｍｕｓ　ｄｕｔｈｉｅｉ　Ｃｌｏｎｅ　４
和５）、Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ的３个克隆
（Ｌｅｙｍｕｓ　ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ　Ｃｌｏｎｅ　３、４和
５）、Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ的２个克隆（Ｌｅｙｍｕｓ　ｋｏｍａｒｏｖｉｉ
Ｃｌｏｎｅ　４和５）（１００％ＢＳ）。该支序列不与新麦草属
植物聚在一起，因此代表Ｘｍ基因组克隆类型。Ⅱ
支中，Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ和Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ先
聚在一组（９０％ＢＳ），然后再与Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ聚成一
支。Ⅲ支包括 Ｐｓｅ．ｓｐｉｃａｔａ、Ａ．ｃｒｉｓｔａｔｕｍ、Ｅ．ｄｉｓ－
ｔａｎｓ、Ｔ．ｂｅｓｓａｒａｂｉｃｕｍ和Ｌｏ．ｅｌｏｎｇａｔｕｍ （８４％ＢＳ）。
２．３　序列多态性分析
赖草属林下组植物及新麦草属植物ＧＢＳＳＩ基
因序列多态性估计列于表１。林下组植物 Ｎｓ和
Ｘｍ基因组拷贝类型的序列多态性分离位点数分别
为１３５和７６。新麦草属植物Ｎｓ基因组类型的序列
多态性分离位点数数为９４。林下组植物Ｎｓ基因组
拷贝类型的序列多态性参数为π＝０．０３８　３和θｗ＝
０．０３７　０，而Ｘｍ基因组拷贝类型的序列多态性参数
为π＝０．０２１　４和θｗ＝０．０２５　０。新麦草属植物Ｎｓ基
因组序列序列多态性参数为π＝０．０５３　４和θｗ＝
０．０５３　４。
图１　基于ＧＢＳＳＩ基因序列的赖草属及其近缘属植物的 ＭＬ系统发育树
Ｆｉｇｕｒｅ　１　Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍＧＢＳＳＩｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｕｓｉｎｇ　ｍａｘｉｍｕｍ
ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ　ｆｒｏｍＬｅｙｍｕｓ　ａｎｄ　ｉｔ　ｐｕｔａｔｉｖｅ　ｄｉｐｌｏｉｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ
７４１
　　　 四川农业大学学报 第３０卷
表１　赖草属林下组植物及新麦草属
植物ＧＢＳＳＩ基因序列多态性估计
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｓｔｉｍａｔｅｓ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｅｓｔ
ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ　ａｔ　ＧＢＳＳＩｌｏｃｕｓ　ｉｎ　Ｌｅｙｍｕｓ　ａｎｄ　Ｐｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓ
Ｓｐｅｃｉｅｓ　 Ｇｅｎｏｍｅ　 ｎ　 ｓ π θｗ
Ｌｅｙｍｕｓ　 Ｎｓ　 １　１７７　１３５　０．０３８　３　０．０３７　０
Ｘｍ　 １　１７４　７６　０．０２１　４　０．０２５　０
Ｐｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓ　 Ｎｓ　 １　１７４　９４　０．０５３　４　０．０５３　４
３　讨论
３．１　赖草属林下组植物种间关系
形态上，Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ、Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａ－
ｔｕｓ和Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ高度相似，均呈疏丛或单杆生于
林下、无根茎或具短根茎，叶片广披针形、颖常退化。
它们归为猥草属（Ｈｙｓｔｒｉｘ　Ｍｏｎｅｎｃｈ）并被作为
Ｈｙｓｔｒｉｘ　ｄｕｔｈｉｅｉ、Ｈｙｓｔｒｉｘ　ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔａ和Ｈｙｓｔｒｉｘ
ｋｏｍａｒｏｖｉｉ处理［９，２４］。根据形态和细胞遗传学证据，
颜济等［９］将Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ、Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａ－
ｔｕｓ和Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ组合形成赖草属林下组。Ｍ．
Ｄｏｅｂｅｌｉ等［２５］认为地理隔离对物种形成具有重要作
用，理论上分布邻近的属内种间物种亲缘关系较近。
自然分布上，Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ呈间断分布于尼泊尔西部及
中国西南山区，Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ分布
于日本，Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ分布于我国东北及俄罗斯远
东 地 区。 根 据 地 理 分 布，Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．
ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ与Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ的种间关系可能比
Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ和Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ的关系
近。本研究的 Ｎｓ和Ｘｍ基因组ＧＢＳＳＩ序列系统
发育 分 析 显 示 Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ 和 Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．
ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ形成姊妹组，而Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ处于该
姊妹组的外围。该结果表明地理分布上距离较远的
Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ和Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ具有密
切的亲缘关系，而地理分布上距离较近的Ｌ．ｋｏｍａｒ－
ｏｖｉｉ和Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ亲缘关系相对
较远。一种可能的解释是 Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ 与 Ｌ．
ｄｕｔｈｉｅｉ和Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ在多倍化
物种形成过程中的亲本不同所致。本研究的系统发
育分析进一步显示Ｐｓａ．ｈｕａｓｈａｎｉｃａ与Ｌ．ｋｏｍａｒｏ－
ｖｉｉ聚在一起（８０％ＢＳ），推测Ｐｓａ．ｈｕａｓｈａｎｉｃａ可能
作为Ｎｓ基因组供体参与Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ的物种形
成。Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ和Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ单
独聚在一起（１００％ ＢＳ），推测可能不是Ｐｓａ．ｈｕａｓ－
ｈａｎｉｃａ而是其他新麦草属植物参与二者的物种形
成。因此，不同亲本供体参与多倍化物种形成可能
导致Ｌ．ｋｏｍａｒｏｖｉｉ与Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ和Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．
ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ在遗传上产生了分化。本研究结果
支持Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ和Ｌ．ｄｕｔｈｉｅｉ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｅａｒｉｓｔａｔｕｓ互
为种与变种的分类等级。
３．２　赖草属林下组植物ＧＢＳＳＩ基因的分子进化
复制基因进化的动力学问题一直是进化生物学
家研究的热点问题［２６］。Ｒ．Ｌ．Ｓｍａｌ 等［２７］分析了乙
醇脱氢酶基因（Ａｄｈ）在四倍体棉花及其二倍体供体
中进化速率，发现ＡｄｈＡ－ＡｄｈＥ基因的进化速率在
四倍体棉花与二倍体中的突变速率不同。Ｍ．Ｂａｒｒｉ－
ｅｒ等［２８］发现花调控基因ＡＰＥＴＡＬＡ１（ＡＳＡＰ１）和
ＡＰＥＴＡＬＡ３（ＡＰＥＴＡＬＡ３／ＴＭ６）在多倍体物种的
进化速率比其在二倍体中的进化速率高。Ｋ．Ｓ．
Ｃａｌｄｗｅｌ等［２９］对六倍体小麦 Ｄ 基因组及其供体
Ａｅｇｉｌｏｐｓ　ｔａｕｓｃｈｉｉ（Ｄ基因组供体）的 Ｘｗｙｅ８３８和
Ｇｓｓ基因的多态性分析，发现Ｇｓｓ基因在六倍体小
麦Ｄ基因组中的多态性比Ａｅ．ｔａｕｓｃｈｉｉ的多态性明
显减少。Ｘ．Ｆａｎ等［１２］对赖草属物种及其Ｎｓ基因组
供体的单拷贝细胞核Ａｃｃ１基因多态性分析，表明多
倍体的Ａｃｃ１基因多态性水平高于二倍体的新麦草
属植物Ｎｓ基因组序列多态性水平。本研究的赖草
属林下组植物中，ＧＢＳＳＩ基因序列在Ｎｓ基因组拷
贝上的多态性水平（π＝０．０３８　３和θｗ＝０．０３７　０）明
显低于新麦草属植物Ｎｓ基因组序列序列多态性（π
＝０．０５３　４和θｗ＝０．０５３　４）。该结果与Ｋ．Ｓ．Ｃａｌｄｗｅｌ
等［２９］的研究结果一致。赖草属林下组植物ＧＢＳＳＩ
基因序列多态性水平降低暗示它们在长期相对独立
的进化过程中可能受到遗传瓶颈效应的影响。
Ａ．Ｌ．Ｌａｗｔｏｎ－Ｒａｕｈ等［３０］分析多倍体夏威夷珍
珠粟的ＡＳＡＰ１和ＡＳＡＰ３／ＴＭ６基因多态性水平
显示复制基因在该多倍体中的多态性水平不同。
Ａｄｈ基因家族的ＡｄｈＡ 和ＡｄｈＣ 在四倍体棉花的
Ｄ基因组上的多态性水平高于其在 Ａ基因组上的
多态性水平［２７］。ＲＰＢ２基因在ＳｔＨ 基因组物种的
Ｓｔ基因组上的多态性水平也被检测出高于该基因
在 Ｈ基因组上的多态性水平［３１］。本研究中，我们
发现ＧＢＳＳＩ基因在赖草属林下组植物 Ｎｓ基因组
上的多态性水平（π＝０．０３８　３和θｗ＝０．０３７　０）高于
其在Ｘｍ基因组上的多态性水平（π＝０．０２１　４和θｗ
＝０．０２５　０）。该结果与前人的研究结果并不矛
盾［２７，３０－３１］，表明复制基因在多倍体中多态性水平是
不平等的。
８４１
第２期 王晓丽（等）：赖草属林下组植物ＧＢＳＳＩ基因序列的系统发育与分子进化 　　　
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ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａ－
ｌｉｇｎｍｅｎｔ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ　ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｇａｐ
ｐｅｎａｌｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｗｅｉｇｈｔ　ｍａｔｒｉｘ　ｃｈｏｉｃｅ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅ－
ｓｅａｒｃｈ，１９９４，２２：４６７３－４６８０．
［２０］　Ｒｏｚａｓ　Ｊ，Ｓáｎｃｈｅｚ－ＤｅｌＢａｒｒｉｏ　Ｊ　Ｃ，Ｍｅｓｓｅｇｕｅｒ　Ｘ，ｅｔ　ａｌ．ＤＮＡ
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，Ｖｅｒｓｉｏｎ　４．１０．４．；ＤＮＡｓｐ４Ｃｏｍ－
ｐｕｔｅｒ　Ｓｏｆｔｗａｒｅ［Ｍ］．Ｂａｒｃｅｌｏｎａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｂａｒｃｅｌｏｎａ，Ｓｐａｉｎ，
２００５．
［２１］　Ｔａｊｉｍａ　Ｆ．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｎｅｕｔｒａｌ　ｍｕｔａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ　ｂｙ　ＤＮＡ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　１９８９，
１２３：５８５－５９５．
［２２］　Ｗａｔｔｅｒｓｏｎ　Ｇ　Ａ．Ｏｎ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ　ｓｉｔｅｓ　ｉｎ　ｇｅｎｅｔｉ－
ｃａｌ　ｍｏｄｅｌｓ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９７５，７：２５６－２７６．
［２３］　Ｐｏｓａｄａ　Ｄ，Ｃｒａｎｄａｌ　Ｋ　Ａ．Ｍｏｄｅｌｔｅｓｔ：ｔｅｓｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ
ＤＮＡ　ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｅｓ，１９９８，１４：８１７－８１８．
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ｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｉｎ　ｐｏｌｙｐｌｏｉｄ　ｗｈｅａｔ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　Ｄ－ｇｅｎｏｍｅ　ｄｉｐｌｏｉｄ　ａｎ－
ｃｅｓｔｏｒ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００４，１６７（２）：９４１－９４７．
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ｔｅｒｎｓ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｈｏｍｏｅｏｌｏｇｏｕｓ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ
ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｌｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ　Ｈａｗａｉｉａｎ　ｓｉｌｖｅｒｓｗｏｒｄ　ａｌｉａｎｃｅ
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（本文审稿：程剑平；责任编辑：秦碧雯；英文编辑：刘益平）
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