全 文 ：北方园艺 2008(11):43 ～ 46 ·试验研究 ·
第一作者简介:王颖(1974-),女,吉林延吉人 ,在读博士 ,主要从事
果树种质资源研究工作。 E-mail:lanmao1282@sina.com。
通讯作者:董文轩。 E-mail:w xdong63@126.com。
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30370985)。
收稿日期:2008-07-28
苹果属皱叶型植株实生后代倍性鉴定研究
王 　颖 , 周 　攀 , 王玉 霞 , 魏 　鑫 , 董文 轩
(沈阳农业大学园艺学院 ,辽宁沈阳 110161)
　　摘　要:利用染色体计数方法和流式细胞仪对皱叶型植株的 13株实生后代进行了倍性鉴
定。结果表明:实生后代苗中出现皱叶和光叶 2种类型 ,2种鉴定方法获得的结果一致。实生后
代中出现二倍体 、三倍体和四倍体。其中 8株光叶型全部为三倍体 ,5株皱叶类型中 1株二倍体 ,
3株三倍体和 1株四倍体。这为丰富苹果无融合生殖砧木的育种理论 ,获得新的无融合生殖砧木
提供有益的借鉴。
关键词:皱叶株系;倍性鉴定;实生后代;平邑甜茶;苹果属
中图分类号:S 661.04+.3　文献标识码:A　文章编号:1001-0009(2008)11-0043-04
　　苹果属(MalusMill.)属于蔷薇科(Rosaceae)苹果亚
科(Maloideae),全世界约有 38种。我国苹果属植物的
种质资源十分丰富 ,丰富的资源对培育新品种或砧木将
起着重大的作用[ 1] 。束怀瑞[ 2] 认为充分发掘和利用丰
富的砧木资源 ,选育适应不同生态条件下的各类苹果砧
木已成为果树育种的一项重要内容。
平邑甜茶(Malus hupehensis(Pamp.)Rehd.var.
pingyiensis Jiang)为湖北海棠的一个变种 ,原产于我国山
东省平邑县 ,具有非常高的无融合生殖能力 ,其无融合
生殖率在 95%以上 ,树性乔化 ,耐荫 、抗涝能力强 ,嫁接
苹果的亲和力强 ,是目前苹果生产中已被广泛应用的乔
化砧木[ 1] 。扎矮山定子(Zhaai Shandingzi(Malus.Bac-
cata(L.)Borkh.)发现于内蒙古自治区呼伦贝尔盟扎兰
屯 ,是普通山定子的矮生型突变;它与普通山定子或苹果
品种杂交后代中的高株与矮株比例为1∶1 ,并可以保持
高抗寒性[ 3] 。董文轩等[ 4] 以平邑甜茶为母本与扎矮山定
子杂交 ,共获得 100多株有性杂交后代 ,以期得到既具有
矮化抗寒特性 ,又具有无融合生殖特性的苹果砧木资源。
在以前工作基础上 ,以平邑甜茶与扎矮山定子杂交
后代中分离出来的皱叶型植株单系为试验材料 ,对皱叶型
株系自然授粉后代实生苗进行了倍性鉴定 ,以期加深对苹
果属植物进化及亲缘关系的认识 ,为苹果砧木育种特别是
无融合生殖型砧木育种提供新的依据。
1　材料与方法
1.1　植物材料
平邑甜茶(母)与扎矮山定子(父)杂交后代皱叶型株
系 10#(四倍体)的自然实生后代 1 a 生皱叶和光叶实生
苗;生长于沈阳农业大学园艺学院苹果育种基地 ,正常的
田间管理。
1.2　植株倍性鉴定
1.2.1　细胞学鉴定　上午 10时左右从再生植株上剪取
1 cm长的顶梢 ,用饱合对二氯苯水溶液在18℃下处理6 ～
7 h ,在卡诺溶液固定2～ 24 h后用70%的乙醇保存。将样
品放在5 mol/L盐酸溶液中解离2 min ,用蒸馏水洗净 ,取
1 mm左右茎尖分生组织进行压片和染色 ,每个材料检测
分散好的分裂细胞30个。
1.2.2　流式细胞倍性分析　参照吴雅琴[ 5]报道的测定方
法 ,以二倍体山定子为对照;采用美国Beckman 公司的流
式细胞仪测定 DNA含量。试验在河北省昌黎果树研究
所进行。称取100mg幼叶 ,在滴有2mL提取缓冲液的培
养皿中研碎 ,500目尼龙网过滤 ,滤液用标准试管收集 ,再
加入2mL染色缓冲液 ,暗处常温下染色30 min ,随即上机
测定。
2　结果与分析
2.1　细胞学鉴定
10#皱叶型株系的自然授粉实生后代苗中出现皱叶
和光叶2种类型 ,进行茎尖染色体数目鉴定 ,结果表明:
对照植株山定子茎尖染色体数目是 2n=2x=34 ,皱叶型
株系的自然授粉实生后代植株茎尖染色体数目为:2n=
2x=34 ,2n=3x=51 ,2n=4x=68。其中 ,染色体数目 34
条的 1株(图 1-A),51条的 11株(图 1-B),68条的 1株
(图 1-C)。
2.2　流式细胞仪倍性分析
取植株的嫩茎叶用流式细胞仪进行鉴定。结果表
明:对照山定子在 C区均有峰值 ,1个植株在 C区均有
峰值(图2-A)。11个植株在D区均有峰值(图2-B),1个
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·试验研究· 北方园艺 2008(11):43～ 46
植株在 E区有一个单峰(图2-C)。试验获得的结果与细 胞学鉴定一致。
2.3　皱叶型植株后代倍性确定
　表 1　皱叶型株系 10#自然授粉后代实生苗倍性鉴定
试材编号 倍性
10-06-2 3X
10-06-3 3X
10-06-4 3X
10-06-5 3X
10-06-6 3X
10-06-7 3X
10-06-8 3X
10-06-9 3X
10-06-10-皱 3X
10-06-11-皱 4X
10-06-12-皱 2X
10-06-14-皱 3X
10-06-15-皱 3X
　　通过细胞学和流式细胞仪鉴定 ,2种方式获得的结
果一致 ,可以确定 ,四倍体10#皱叶型株系的自然授粉实
生后代中出现二倍体、三倍体和四倍体。其中光叶型为
三倍体 ,皱叶类型中出现二倍体 ,三倍体和四倍体。二
倍体为 1株 ,三倍体为 11株 ,四倍体为1株(表 1)。
3　讨论
倍性鉴定在植物遗传育种中具有十分重要的作用。
特别是苗期倍性鉴定可以大大减少育种工作量。目前倍
性鉴定方法主要有 2种类型。直接鉴定法 ,即染色体计数
方法 ,这是确定倍性最基本和最精确的方法[ 6-8] 。间接鉴
定法 ,主要有流式细胞测定法 、气孔大小及保卫细胞叶绿
体数目。采用倍性分析仪进行鉴定 ,即用流式细胞测定法
迅速测定叶片单个细胞核内DNA含量。根据 DNA含量
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北方园艺 2008(11):43 ～ 46 ·试验研究 ·
的曲线图推断细胞的倍性 ,从而快速鉴别植株的染色体
倍性水平。流式细胞测定法的特点是制样简单 ,灵敏
度、分辨率及准确性较高 ,数据的可重复性好 ,测试速度
快 ,并且 DNA含量变异可在分布图上直观地看出。
马爱红等[ 9]使用德国 Partec公司的倍性分析仪 ,采
用流式测定法测定单个细胞核的 DNA含量 ,对葡萄进行
倍性鉴定 ,结果分布图上出现了不同的峰值 ,有二倍体、混
倍体 、四倍体峰值刚好是二倍体的 2倍。李赟等[ 12] 利用
FAC Scan流式细胞光度计的研究结果表明 ,虽然同一倍
性内不同苹果品种细胞核 DNA含量存在一定的差异 ,倍
性间细胞核DNA含量成倍数性差异 ,这说明利用流式细
胞仪测定核 DNA 含量来鉴定倍性是可行的。此研究是
首次对果树诱变植株细胞核 DNA含量进行了测定 ,这些
诱变植株均存在两群细胞核DNA含量成倍数性差异的
细胞。刘庆忠等[ 10] 采用倍性分析仪的 DNA含量结果分
布曲线也可以清楚地看出 ,所要测定的诱导材料的峰值比
对照峰值高出1倍。蒋洪恩和刘孟军[ 11]对经秋水仙碱处
理过的枣的外植体采用 Partec DPAC软件对倍性分析仪
测定的DNA含量分布曲线的分析表明 ,变异株中均存在
DNA含量加倍的细胞 ,而且第 1峰(二倍体的峰)与第 2
峰(处理的峰)的对应值之比为1∶2。
迄今 ,流式细胞技术在果树上已被成功地用于草
莓[ 12] 、柑橘[ 13] 、野生葡萄[ 14] 、李属[ 15] 和猕猴桃[ 16] 等的倍
性鉴别上。与其他传统鉴定方法相比 ,具有不可替代的
优势 ,流式细胞仪技术被认为是最有前途的倍性鉴定方
法。但由于流式细胞仪不适用于粘度过高的植物材料 ,
因此材料状态 、取材部位是需要考虑的重要问题。必须
选择新鲜 、幼嫩的植物材料并通过提取方法的改进来消
除材料本身的粘性。总之 ,随着流式细胞仪组件的不断
改进 ,以及应用经验的不断积累 ,流式细胞仪将会越来
越广泛地应用于植物的倍性鉴定中。
具有无融合生殖特性的材料 ,多是多倍体野生苹果
种 ,如湖北海棠(M.hupehensis)、三叶海棠(M.sieboldii)、
变叶海棠(M.toringoides)、锡金海棠(M.sikkimensis)、沙
氏海棠(M.sargenti)等[ 1] 。孟素琴[ 17] 通过几年观察得
知 ,这些种均属兼性无融合生殖种。自然或人工授粉后
一般的杂种率为 5%～ 25%,实生后代绝大多数同于
母本。
具有平邑甜茶基因的皱叶型株系自然授粉后代实
生苗中 ,出现二倍体 ,三倍体和四倍体 ,其中三倍体居
多 ,二倍体和四倍体所占比例很小。出现二倍体和三倍
体的植株有光叶型和皱叶型2种 ,而所有四倍体都出现
在皱叶类型中。三倍体的出现可能是在自然环境下 ,四
倍体的皱叶型株系与田间的二倍体株系自然授粉得到
的。通过倍性鉴定 ,可以判断 ,皱叶型株系实生后代中
矮生皱叶型四倍体植株可能是由无融合生殖而来 ,这一
点在胚胎学观察中也能得到证明。皱叶型株系实生后
代不同程度地遗传了无融合生殖能力。这为丰富无融
合生殖型实生砧木的育种理论 ,获得新的苹果无融合生
殖型砧木提供有益的借鉴。
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·试验研究· 北方园艺 2008(11):46～ 48
不同追肥措施对有机桃产量及品质的影响
李艳萍1, 2 , 贾小 红2 , 陈 　清3
(1.石河子大学农学院 ,新疆石河子 832000;2.北京市土肥工作站 ,北京 100029;3.中国农业大学资源与环境学院,北京 100094)
　　摘　要:研究追施不同有机肥 、生物肥和叶面肥等对有机栽培条件下 5 a生桃(品种:北京 24
号)产量及品质的影响。结果表明:在每个处理基施45 t/hm2 羊粪的基础上 ,后期追施有机肥、生
物肥 、喷叶面肥处理均能显著增加有机桃的产量 ,尤以追施有机肥并同时喷施叶面肥处理的桃产
量最高;不同施肥处理对桃果实中的总糖含量和可溶性固形物含量影响差异不显著;追施不同肥
料的处理显著地降低桃果 Vc含量 ,但对桃果硬度的影响正好相反。
关键词:有机桃;产量;品质;追肥
中图分类号:S 662.1　文献标识码:A　文章编号:1001-0009(2008)11-0046-03
　　有机果品是一项新兴的产业 ,正在世界范围迅速发
展[ 1] 。有机桃就是在此过程中孕育而生的 ,近几年来有
机桃的发展非常迅速 ,但是对于桃树有机生产 ,尤其是
生产中如何协调好营养生长与生殖生长过程中不使用
化肥而达到桃树对营养需求方面的研究还较少 ,仅有部
分学者研究了有机肥[ 2] 、生物肥[ 3] 和叶面肥[ 4]对烤烟[ 2] 、
柑桔[ 3] 和葡萄[ 4] 等产量、品质方面的影响 ,结果也不太一
致 ,对于桃树的有机生产没有具体的指导意义。为此 ,
对有机桃生产的肥料施用进行了研究 ,以期为实际指导
第一作者简介:李艳萍(1982-),女 ,陕西宝鸡人,硕士 ,研究方向为
果树栽培生理。E-mail:lypmm@126.com。
通讯作者:贾小红。 E-mail:jiaxiaohong@china.com。
基金项目:农业部948 资助项目(2006-G30);北京市农业技术试验
示范资助项目(20060115)。
收稿日期:2008-06-07
有机桃的生产提供参考。
1　材料与方法
1.1　试验设计
试验于 2003年11月至2004年 9月在北京市平谷
区进行 ,试材为 5 a生桃园 ,品种为北京 24号 ,株行距
3 m×4 m 。果园土壤有机质含量为23.8 g/kg ,全氮1.4
g/kg ,碱解氮含量141 mg/kg ,有效磷 78.3 mg/kg ,速效
钾 306 mg/kg ,pH为 7.5;基肥于 2003年11月 15日以
腐熟羊粪施入 ,施用量为 45 t/hm2 ,追肥按照表 1的试
验设计进行。
试验设 6个处理 ,3次重复 ,每重复5棵树。试验设
计如表 1所示。有机肥品种由丸京创味肥料有限公司
提供 ,肥料由蹄角粉 、鱼粉 、骨粉 、蚕蛹粉、大豆粕 、草木灰
等有机和天然原料加工制成 ,全氮含量为 6.67%、全磷
(P2O5)8.36%、全钾(K2O)3.99%、有机质 51.6%、水分
7.56%、pH值 7.9。生物肥料由北京世纪阿姆斯生物技
Chromosome Ploidy Identification of the Seedling Plants from the
Leaf-wrinkled and Dwarf Plants inMalus.
WANG Ying , ZHOU Pan , WANG Yu-xia,WEI Xin , DONG Wen-xuan
(College of Horticulture, Shenyang Ag ricultural University , Shenyang , Liaoning 110161 , China)
Abstract:Chromosome number and polyploidy level identification were made on 13 seedling plants of the leaf-wrinkled and
dw arf plants in Malus.by using the general pressed method and f low cy tometry.The results of the two methods both
indicated that there were two types which were leaf-w rinkled type and leaf-smooth type in these seedling plants from the
leaf-w rinkled and dwarf plants.8 seedling plants in the leaf-smooth type were all triploid.In the leaf-wrinkled types , 1
seedling plants w as diploid , 3 seedling plants were t riploid and 1 seedling plants w as tet raploid.This research enriched
the breeding methods and offered some new apomictic stocks in malus.for the utilization in fruit production.
Keywords:Leaf-wrinkled;Ploidy identification;Seedling plants;Malus hupehensis;Malus Mill.
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