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0 46人凝血恶烷受 体 cD N A的 克 隆 与表达
〔英 〕 /H ir at a M… / /N at r u e.一 1 9 9 1,
3 4 9 ( 6 3 1 0 )
. 一 6 1 7一 6 2 0
凝血恶烷 ( T X A : ) 是一种极不 稳定的花生四
烯酸盐代谢物 。 本文作者使用寡核普酸探针从人胎
盘里获得了编码 T X A : 受体的 c D N A , 并从培养的
人巨核细胞性自血病细胞得到部分克隆 .
首先用能6b p H in c ! M E G片段作为探针筛选
人胎盘 c D N A 文库 , 分离了一个含有整个编码 区域
的 2 . g k b 擂入休的阳性克隆 H P L , 其开架阅读框
( l o Zo b p )编码 3 4 3个氨基酸 , 相对分子量为 3 7 4 2 。 ,
M E G覆盖了 H P L 的 58 1一 1 94 1核普酸 。 H P L 有 2 个
N 糖基化部位 , 无信号肤 , 7 个疏水支链代表跨膜
结构域 , 与视紫质类受体其他成 员 有 显 著的同源
性 , 尤其是跨膜区域 , 因而此受体属于视紫质受体
家族成员 . 与视紫质和 P 物质受体一样 , 在T X A :
受体第 3 个跨膜结构域内无 A sP , 此残基可能是肾
上腺素能受体结合氨基的基因 , 而且 T X A : 受体具
有A r g 29 5 , 类似于牛视紫质受体的 L y s Z” , 这可
能提示 T X A Z受休的配体具有酸性特征 . 第 3 个胞
浆环仅有不到 30 个氨基酸 , 其 N 末端与视紫质有显
著的同源性 , 但此环中的 C 末端缺乏其他受体具有
的碱性氨基酸簇 . 这些区域参与决定与偶连 G 蛋白
结合及其特异性 。 短的 C 末端尾巴含有 6 个 S er 和
T h r残基 , 可能参与信号通路中激 活剂诱导的脱敏
作用 , T X A : 受沐对激活剂刺激敏感 .
作者把克隆了 H P L 2 . ok b片段的表达载体C D M
8 转染到 C O S 一 7细胞 , 用 T X A : 受沐选择性拮抗
剂 〔3 H ) S 一飞45 和激动剂 S T A : 实验确定了 H P L编
码T X A : 受体 . T X A : 受体的刺激可引起磷脂酸肌
醇转换和 C a Z + 动员 , 这表明 H P L 编 码 的蛋 白上有
T X A : 受体的特征性配体结合特性 。
N o1’ ht er n 分析 T X A :受体m R N A的表达 , 发现
胎盘和肺富含 T X A , 受体的代表性组织 , 主要杂交
带为 2 . sk b , 胎盘 R N A 最强 , 次要带型为 3 . sk b,
并且在血小板前体细胞和富含血管的 细胞里也可能
存在相同 m R N户i 。
(黄仕 和摘 秦椿华校 )
047 通过巷因转染在猫细胞内表达钙调索以
提离对长春花属生物碱的敏感性 (英〕
/ Id o M… / /aC n e e r R e s一 19 9 0 , 5 0 一6 5
5 4~ 9 5 5 8
ca
, +和钙调素 ( C a M ) 的含量与癌细胞的药物
敏感性一直是个悬而未决的问题 。 为了明确 C a M的
含量的改变是否能影响对药物的敏感性 , 作者采用
基因转染技术将鸡的C a M 基因转染入小鼠乳腺癌细
胞株 ( 1C 2 7 ) , 并获得了两株高度表达C a M的细胞
克隆 ( C Z , c 3 ) . 克隆 C Z和 c 3 分别 4 0和 3 。倍地表
达 C a M m R N A , C a M 蛋 白分别为 s和 s 倍。 通过测
定 72 h 抑制 50 帕细胞生长的药物浓度 I C S 。来检测该
细胞对长春新碱 、 长春花碱 、 博菜霉素和 阿霉素的
敏感性 . C Z和 C 3对于长春新碱 , I C 。 。分别为 6 . 27 土
。 , 58 n m和 6 . 6 。士 0 . 弱 n m , 而常规亲 代G 27 细胞的
I C , 。为 1 3 . 9土 。 , 7 o n m , 转染入空白载体的 G 27 细
胞为 1 4 . 。士 1 . 5 5n m 。 长春花碱对 C Z和 C 3细胞增殖
抑制所用的浓度也很低 。 C Z和 C 3的 I C s 。约为常规
亲代 G 2 7 或转染空 自载体 G 27 细胞的一半 。 然而
对 D N A 一结合药物如博莱霉素和阿 霉 素 , 其敏 感
性无大差异 . 与常规亲代 C 1 27 细胞比较 , ( 3 H ) 长
春花碱的摄取在C Z和 C 3 细胞分别增加了 1 . 6和 2 . 8
倍 , 且〔 3 H 〕 长春花碱丢失在C Z和 C 3细胞系也减少 。
结果表明 , C Z和 C 3细胞系中 C a M 表达的增加
与这些细胞对长春花属生物碱的敏感性 提高有关 。
敏感性的提高表现在细胞内长春花属 生物碱浓度的
增加 , 这是由于对药物的摄取量增多而 流失减少 。
此外 , 克隆C Z和 C 3对长春花属生物碱类药物的敏感
性具有特异性 , 因为对 D N A 一破坏药物 , 如阿霉素
和博莱霉素则无平行效应 。
(刘 杰摘 田志 刚 崔正 言校 )
0 4 8 胃和食管腺癌的基因扩增 〔英 ) / aJ ne
H o u l d s w o r t h … / / C a n e e r eR s . 一 19 9 0 ,
5 0
. 一 6廷17~ 6 42 2
人肿瘤发生发展中能观察到的遗传变 化之一筑
是基因扩增 . 扩增的检测方法包括 : 细胞遗传分析
检测双微小休或中期分裂时的均质染色区 , 以及用
专一性原痛基因作为探针进行D N A杂交检验 . 前两
种方法可测知未知序列的基因扩增 , 而探针法专测
原癌基因的扩增 . 有假说认为原癌基因产物的积累
可能在癌症的发展中起一定作用 . 作者在 2 8例处于
低度到中度分化期的胃腺癌和食管腺癌的 病例中 ,
检测到21 肠发生了基 因的扩增 。
首先作者发现细胞遗传分析 阳 性 的 5 个样本
,
2 4 8
。