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两种狗脊属药材的鉴别研究



全 文 :� 3312 � 中华中医药杂志(原中国医药学报)2014年10月第29卷第10期 CJTCMP , October 2014, Vol . 29, No. 10
·研究报告·
两种狗脊属药材的鉴别研究
刘霞,张小慧,冯玛莉,席啸虎,王世伟,仝立国
(山西省中医院,太原 030012)
摘要:目的:对单芽狗脊蕨Woodwardia unigemmata(makino)Nakai及狗脊蕨Woodwardia japonica(L.F.)
Smith的带叶柄残基的根茎进行鉴别研究。方法:收集不同产地的狗脊蕨贯众、单芽狗脊蕨贯众药材及饮片,通过
原植物形态、性状、显微鉴别确定品种基源。采用薄层色谱法对单芽狗脊蕨及狗脊蕨进行定性鉴别。结果:建立
了单芽狗脊蕨贯众、狗脊蕨贯众专属性的薄层鉴别方法。结论:建立的鉴别方法可以有效区分单芽狗脊蕨贯众和
狗脊蕨贯众。
关键词:单芽狗脊蕨贯众;狗脊蕨贯众;性状鉴别;显微鉴别;薄层鉴别
基金资助:山西省中药材、中药饮片地方标准研究(No.2011036A)
Identifi cation study of two kinds of Woodwardia
LIU Xia, ZHANG Xiao-hui, FENG Ma-li, XI Xiao-hu, WANG Shi-wei, TONG Li-guo
( Shanxi Province Hospital of TCM, Taiyuan 030012, China )
Abstract: Objective: To study the identifi cation of rhizome with Petiole residues of Woodwardia unigemmata (makino)
Nakai and Woodwardia japonican (L.F.) Smith. Methods: Woodwardia japonica (L.F.) Smith, Woodwardia unigemmata (makino)
Nakai herbs and pieces from diff erent origin were collected, and the varieties base resource was discriminated through botanical
morphology, characteristics and microscopic characters. They were discriminated by using thin layer chromatography (TLC)
method. Results: The special identifi cation method was established to discriminate Woodwardia unigemmata (makino) Nakai
and Woodwardia japonica (L.F.) Smith. Conclusion: The identification method could effectively discriminate Woodwardia
unigemmata (makino) Nakai and Woodwardia japonica (L.F.) Smith.
Key words: Woodwardia unigemmata (makino) Nakai Crassirhizoma; Woodwardia japonica (L.F.) Smith
Crassirhizoma; Characteristics identifi cation; Microscopic identifi cation; TLC
Fund assistance: Chinese Herbal Medicine Standards of Shanxi Province (No.2011036A)
通讯作者:刘霞,太原市并州西街46号山西省中医院药剂科,邮编:030012,电话:0351-4668308,E-mail:liuxia650829@126.com
乌毛蕨科狗脊属植物约12种,分布于亚洲、欧洲、美洲的
温带至亚热带地区。我国有5种,分别为单芽狗脊Woodwardia
u n i g e m m a t a(makino)Naka i、珠芽狗脊(胎生狗脊蕨)
Woodwardia prolifera Hook、东方狗脊Woodwardia orientalis
Sw、狗脊贯众Woodwardia japonica (L.F.)Smith、滇南狗脊
Woodwardia magnifica Ching,产于长江以南各地,向西达喜
马拉雅[1]。其中单芽狗脊蕨贯众和狗脊蕨贯众在多个地方中药
材标准均有收载,如上海1994年(单芽狗脊蕨贯众和狗脊蕨贯
众)、江西1996年(狗脊蕨贯众和胎生狗脊蕨贯众)、河南1993
年(单芽狗脊蕨贯众和狗脊蕨贯众)、内蒙(单芽狗脊蕨贯众)。
《新编中药志》[2]和《中草药彩色图谱》[3]也有收载。因该属植
物具有抗菌抗病毒作用、促凝血、子宫抑制和杀蛔虫作用[4],有
进一步的开发利用价值。由于单芽狗脊蕨贯众和狗脊蕨贯众的
干燥品形态相近,难以辨认,地方标准对其鉴定仅包括性状鉴
别及理化鉴别,专属性不强,不能有效区分二者,在实际工作中
给药材使用造成困难。为此本研究从原植物形态、性状鉴别、
显微鉴别、薄层鉴别等方面系统研究了两种植物的区别,为正
确利用该药材资源提供参考。
材料
1. 药材 10批狗脊贯众(单芽狗脊蕨贯众、狗脊蕨贯众各5
批),包括采集品与市场购买的中药饮片,样品信息见表1。其中
作为对照药材的单芽狗脊蕨贯众(批号:2012101)和狗脊蕨贯众
(批号:2012201)均为采集品,采自重庆金佛山,经重庆药用植
物研究所韦波、周卯勤研究员做基原鉴定。
2. 试剂 山奈酚对照品(批号:110861-200606),中国药品
生物制品检定所,二氯甲烷、甲醇、冰醋酸等均为分析纯。
3. 仪器 OLYMPUS BX51显微镜。
方法与结果
1. 原植物形态主要特征 单芽狗脊蕨为多年生草本,高约
1m。根茎粗大,倾斜,密被棕褐色膜质披针形鳞片及黑色细
� 3313 �中华中医药杂志(原中国医药学报)2014年10月第29卷第10期 CJTCMP , October 2014, Vol . 29, No. 10
根。叶近生;叶片卵状长圆形,近革质或厚纸质,在叶轴顶部和
羽片着生处下面有1个(偶有2个)具红棕色鳞片包被的芽孢,2
回深羽裂,羽片长18-25cm,宽5-7cm,基部对称,羽裂达4/5,
孢子囊群着生在近主脉两侧的一行网脉上,囊群盖长肾形,褐
色,成熟时向内开裂。
表1 狗脊贯众样品收集信息
样品
名称 批号 购进/采集地 产地
采集/购进
日期
单芽
狗脊蕨
贯众
2012101 采自重庆金佛山 金佛山 2011-12-16
2012102 购自陕西西安药材市场 四川德阳 2012-6-26
2012103 购自安徽亳州药材市场 江西吉安 2012-4-2
2012104 购自河北安国药材市场 辽宁抚顺 2012-7-2
2012105 购自陕西西安药材市场 贵州苗岭 2012-6-26
狗脊蕨
贯众
2012201 采自重庆金佛山 金佛山 2012-2-15
2012202 购自陕西西安药材市场 四川绵阳 2012-3-24
2012203 采自江西吉安 江西吉安 2012-4-2
2012204 采自重庆金佛山 金佛山 2012-8-25
2012205 采自重庆金佛山 金佛山 2012-10-26
狗脊蕨植物形态与单芽狗脊蕨近似,主要区别是叶轴顶部
无牙孢,羽片基部不对称,羽裂较浅约1/2。见图1。
图1 单芽狗脊蕨、狗脊蕨叶片外观形态
2. 性状鉴别
2.1 单芽狗脊蕨 本品呈长柱形或短柱形,稍弯曲,上端较
钝,下端较尖。长6-30cm,直径2-7cm,表面红棕色至黑褐色。
根茎粗,密被短粗的叶柄基、鳞片及须根;鳞片棕红色,片状,
全缘,须根棕黑色。叶柄基横断面类四方形,有3-10个分体中
柱,内侧一对较大,呈“八”字形排列,棕色分泌物较多。根茎
背面叶柄呈肋骨状排列,腹面呈短柱状竖直排列,质坚硬,不
易折断,每一叶柄基常有丛生较细的须根。气微,味淡,微涩。
见图2。
2.2 狗脊蕨 主要特征为叶柄基横切面呈半圆形或近三角
形,有2-4个分体中柱,内侧一对较大,呈“八”字形排列。根茎背
面叶柄呈肋骨状排列,腹面呈短柱状竖直排列,质坚硬,不易折
断,每个叶柄基部常有须根1条。气微,味淡,微涩。见图2。
3. 显微鉴别
3.1 叶柄基部横切面 单芽狗脊蕨贯众、狗脊蕨贯众叶柄
横切面显微特征大致相同,单芽狗脊蕨贯众棕色分泌物较多。
光镜下叶柄横切面显微图,见图3。
图2 单芽狗脊蕨、狗脊蕨根茎及横切面特征
图3 狗脊蕨贯众(药材)叶柄横切面显微图(×10)
注:1. 韧皮部;2. 木质部。
3.2 粉末显微特征 本品粉末棕色。淀粉粒众多,单粒类
圆球形,脐点裂缝状;厚壁细胞窄长,先端钝圆或稍斜尖,壁
微木化或非木化,具斜纹孔。棕色块状物呈不规则形,散在。
见图4。
图4 狗脊蕨贯众(药材)叶柄横切面显微图(×40)
10μm
10μm 10μm
4. 薄层鉴别
4.1 以山奈酚为对照品的薄层鉴别 取本品粉末0.5-2.0g,
加水20mL,盐酸2.5mL,水浴1h,取出,放冷,用乙酸乙酯提
取2次,每次30mL,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1mL使
溶解,作为供试品溶液。另取狗脊贯众对照药材(或单芽狗脊
贯众对照药材)1g,同法制成对照药材溶液。再取山奈酚对照
品,加甲醇制成每1mL约含0.2mg的溶液,作为对照品溶液。照
2010年版《中华人民共和国药典》一部(附录ⅥB)薄层色谱法
试验,吸取供试品溶液5-15μL、对照药材溶液和对照品溶液
各5-10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-
甲酸(20∶14∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试
液,热风吹干,置紫外光灯(365nm)下检视。单芽狗脊蕨贯众在
� 3314 � 中华中医药杂志(原中国医药学报)2014年10月第29卷第10期 CJTCMP , October 2014, Vol . 29, No. 10
与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,而狗脊
蕨贯众未检出山奈酚斑点。见图5。
图5 狗脊贯众薄层色谱图(甲苯-乙酸乙酯-甲酸20∶14∶1)
注:1-4. 单芽狗脊蕨贯众(批号:2012101-2012104,以
2012101为对照药材);5. 山奈酚对照品;6-10. 狗脊蕨贯众(批号:
2012201-2012205,以2012201为对照药材)。
4.2 以单芽狗脊蕨贯众或狗脊蕨贯众为对照药材的薄层鉴
别 取药材粉末2g,加甲醇20mL,超声处理20min,滤过,滤液
蒸干,残渣加水10mL使溶解,加乙酸乙酯振摇提取2次,每次
10mL,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供
试品溶液。另取狗脊蕨贯众对照药材1g(或单芽狗脊蕨贯众对
照药材1g),同法制成对照药材溶液。照2010年版《中华人民共
和国药典》一部薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取各供试品溶
液5-15μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以二氯甲烷-甲
醇-冰醋酸(25∶3∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯
(254nm和365nm)下检视,并喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃
加热至斑点显色清晰,日光下检视。供试品色谱中,在与对照药
材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。见图6。
图6 狗脊贯众薄层色谱图(二氯甲烷-甲醇-冰醋酸25∶3∶1)
注:1. 狗脊蕨贯众(批号:2012202);2. 狗脊蕨贯众对照药材
(批号:2012201);3. 单芽狗脊蕨贯众对照药材(批号:2012101);
4-6. 单芽狗脊蕨贯众(批号:2012102-2012104)。
1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6
UV254nm UV365nm 日光
讨论
本实验关键在于样品的正确收集,市场上购买的饮片多为
斜切,直径较大的饮片还可依据中柱维管束数目多少辨认,而
直径较小的饮片就无法辨认,以致在收集过程中出现了品种确
定不了的困难。为避免收集品种可能出现的混淆,本实验以产
地为重庆金佛山的采集品作为对照药材进行鉴别研究,并根据
狗脊属植物的化学成分进行薄层鉴别方法研究。文献报道,单
芽狗脊蕨贯众和狗脊蕨贯众均含有山奈酚鼠李糖苷[5-6]、三萜
类、甾醇类、儿茶酚衍生物、氨基酸和酚酸类物质及狗脊蕨素
等。为此薄层色谱方法主要以黄酮类和三萜类成分进行研究。
以山奈酚为对照品的薄层鉴别结果表明,单芽狗脊蕨贯众含有
山奈酚,而狗脊蕨贯众未含有,可能与收集样品有限,还不能
代表所有狗脊蕨贯众所含成分,此种方法要水解,破坏植物原
有化学成分的结构,特征性不强。为进一步有效区分二者,以甲
醇超声提取,乙酸乙酯萃取,多种展开系统尝试,如正丁醇-醋
酸-水(3∶2∶1)、三氯甲烷-甲醇-水(6.5∶3.5∶0.5)系统,其展
开效果存在特征斑点较少或背景干扰重,使用三氯甲烷-甲醇
系统,并逐渐调整系统极性,最终以一种展开系统同时将两种
植物区分,专属性强,薄层结果表明,单芽狗脊蕨贯众与狗脊蕨
贯众的甲醇提取物中,有相同成分,也有不同成分,以单芽狗脊
蕨贯众所含成分多。以硅胶GF254为薄层板,二氯甲烷-甲醇-冰
醋酸(25∶3∶1)展开,紫外光灯(254nm)下检视,单芽狗脊蕨
贯众薄层斑点较多,而狗脊蕨贯众几无薄层斑点;置紫外光灯
(365nm)下检视,两种不同的贯众薄层行为明显不同,可有效
区分二者;喷以10%硫酸乙醇显色,日光下检试,同样可区分二
者。本实验采用传统鉴别方法将两种药材区分开,重复性良好,
可作为两种药材的鉴别依据。
参 考 文 献
[1] 吴兆洪.中国植物志(第四卷第二分册.蕨类植物门).北京:科
学出版社,1999:199-205
[2] 肖培根.新编中药志第一卷.北京:化学工业出版社,2001:
615-617
[3] 徐国钧.中草药彩色图谱.福州:福建科学技术出版社,
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[4] 马秉智,高增平.狗脊属植物化学成分药理作用的研究进展.
药品评价,2004,1(5):383-384
[5] 奕欣,王浩,温远影.狗脊化学成分研究.热带亚热带植物
学报,2002,10(4):361-365
[6] 杨明惠,杨雪琼,张凤梅,等.单芽狗脊蕨的化学成分.中草药,
2009,40(10):1546-1549
(收稿日期:2013年8月30日)