全 文 ：书收稿日期:2012-06-25; 修订日期:2012-11-01
基金项目:浙江省自然科学基金( No． LY12C19005)
作者简介:黄巧珍( 1991-) ，女( 汉族) ，浙江湖州人，现为浙江海洋学院学生．
* 通讯作者简介:关丽萍( 1970-) ，女( 满族) ，吉林蛟河人，现任浙江海洋
学院副教授，博士学位，主要从事天然先导化合物的结构优化研究工作．
杨梅叶总黄酮类化合物抗抑郁活性研究
黄巧珍1，赵东海2，裘观荣1，甘西西1，关丽萍1*
(1．浙江海洋学院食品与药学学院，浙江 舟山 316000;
2．吉林医药学院，吉林 吉林 132013)
摘要:目的 对杨梅叶中总黄酮进行抗抑郁活性研究。方法 采用乙醇浸提，借助于超声波萃取得到总黄酮，对提取的总
黄酮采用经典的小鼠强迫游泳实验和悬尾实验抑郁模型，小鼠行为绝望的不动时间作为指标，考察杨梅叶总黄酮抗抑郁
活性。结果 药理实验结果显示，杨梅叶总黄酮低、中、高剂量组均能减少小鼠强迫游泳和悬尾不动时间，与空白组比较
差异有统计学意义( P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) 。结论 杨梅叶总黄酮具有显著的抗小鼠实验性抑郁作用。
关键词:杨梅叶; 总黄酮; 抗抑郁; 绝望行为
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 01． 022
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 01-0049-02
Study on Antidepressant Effect of Total Flavonoids from Bayberry ( Myrica rubra Sieb． et
Zucc． ) Leaves
HUANG Qiao-zhen1，ZHAO Dong-hai2，QIU Guan-rong1，GAN Xi-xi1，GUAN Li-ping1*
( 1． Food and Pharmacy College，Zhejiang Ocean University，Zhoushan，316004，China; 2． Jilin Medical
College，Jilin Jilin 132013，China)
Abstract: Objective To study the antidepressant effect of the total flavonoids from Bayberry ( Myrica rubra Sieb． et Zucc． )
leaves in mice． Methods The total flavonoids were extracted by ethanol with ultrasonic． To investigate the antidepressant activity
of the total Flavonoids from Bayberry leaves by the forced swimming test and the tail suspension test，with behavioral despair mice
in the immobility time as an indicator in this paper． Ｒesults The different dose groups of the total flavonoids from Bayberry leaves
could significantly reduce the immobility time of mice during the forced swimming test and the tail suspension test，compared with
that of the control group ( P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) ． Conclusion The total flavonoids from Bayberry leaves possessed the significant
antidepressant effects．
Key words: Bayberry leaves; Total flavonoids; Antidepressant effect; Behavioral despair
杨梅叶属杨梅科常绿乔木杨梅(Myrica． rubra Sieb． et Zucc)
的干燥叶片［1］，为我国特产，主要分布于长江流域以南，以江苏、浙
江、福建等省为主要产区。其主要活性成分之一酚类物质中黄酮
类化合物具有多种药理活性，如杨梅叶中含有的杨梅素、槲皮素等
均具有抗氧化作用、清除体内活性氧自由基功能，具有降血压、抗
炎、抑菌、抗氧化活性等多种功效［2，3］，具有很高的药用价值。
抑郁症是一种以显著而持久的心境低落为主要特征的综合
症，已经成为危害现代人类健康的重要疾病之一，据世界卫生组
织预测，到 2020 年抑郁症将成为仅次于心脏病的第二大疾病［4］。
目前抑郁症主要采用化学药物治疗，存在疗效较低，不良反应较
大的弊端。因此，国内外在抗抑郁药物的研制与开发方面逐渐重
视传统药物和天然药物［5］。
黄酮类化合物是一类分布广泛的天然产物，具有广谱的药理
活性和较低毒性，如抗肿瘤、抗氧化、抗炎、对心血管的调节功能
以及抗菌作用，已成为国内外天然药物开发利用研究的热
点［6 ～ 8］。近年来，有关黄酮类化合物的抗抑郁作用陆续有了研究
报道［9 ～ 12］。如郑莉［13］研究报道，从贯叶金丝桃中分离得到的槲
皮苷及芒果苷元体外实验能强烈抑制单胺氧化酶 A 的活性，具
有潜在的抗抑郁作用。王卫星等［10］研究报道，金丝桃苷等 10 个
天然黄酮类化合物具有不同程度缩短小鼠游泳时间，显示不同程
度抗抑郁活性。目前尚未见关于杨梅叶中黄酮类化合物抗抑郁
活性研究报道，鉴于杨梅树叶在资源上具有明显的优势，因此充
分开发利用杨梅叶中的黄酮类化合物具有十分重要的现实意义。
为了有效利用杨梅叶中黄酮类物质，本文利用溶剂浸提，借助于
超声波萃取［14］，并对其抗抑郁活性进行研究，为杨梅叶的开发利
用提供科学依据。
1 仪器与试药
BS323S型精密电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公
司) ;HWS12 型电热恒温水浴锅(上海 －恒科技有限公司) ;S53
型紫外 －可见分光光度计(上海凌光技术有限公司) ;ＲE － 2000
型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂) ;SHB 型循环水式多用真
空泵(河南省太康科教器材厂) ;JP300 超声波提取仪(武汉嘉鹏
电子有限公司)。
杨梅叶:采集于浙江舟山白泉。盐酸氟西汀(美国 Lilly 公
司)用前用 2%羧甲基纤维素钠水溶液配制成 1g /L，备用;乙醇、
石油醚、氯仿、正丁醇为分析纯。
雄性昆明种小鼠(20 ± 3)g，由延边大学实验动物科提供，
在饲养环境下适应 1 周后使用。
2 方法
2． 1 杨梅叶总黄酮的制备 干燥的杨梅叶，粉碎过 80 目筛，4 倍
量乙醇浸泡 24 h后，超声波辅助萃取 45 min，连续提取 3 次，合
并提取液，回收溶剂至浸膏，浸膏分散于水，分别用石油醚、氯仿、
正丁醇萃取，取正丁醇萃取部分，溶于水经 D101 型大孔树脂纯
化，15%乙醇、35%乙醇、65%乙醇洗脱，取 35%乙醇洗脱液回
收，真空干燥，得总黄酮粉末。经含量测定，黄酮的总浸出率可达
98． 4%，杨梅叶中的黄酮含量为 8． 09%。总黄酮粉末用 2%羧甲
基纤维素钠溶液分别配制一定的浓度，备用［14］。
2． 2 实验动物分组及药品处理 取雄性小鼠 50 只，随机分为 5
组，每组 10 只，分别为空白对照组、盐酸氟西汀、杨梅叶总黄酮
低、中、高剂量组。盐酸氟西汀剂量为 30mg /kg;杨梅叶总黄酮
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 1 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 1 期
书低、中、高剂量分别为 100，200，400 mg /kg;空白对照组灌服同体
积的 2%羧甲基纤维素钠水溶液，连续灌胃 7 d，1 次 /d。于末次
给药后 1 h，进行小鼠行为学测试实验。
2． 3 小鼠强迫游泳实验 将小鼠放入 XSC －小鼠恒温游泳仪内
［水深 10 cm、直径 34 cm的桶内，水温(25 ± 2)℃) ］，观察 6 min
内小鼠游泳情况，统计小鼠后 4 min 内游泳累积不动时间(不动
即小鼠停止挣扎或小鼠呈漂浮状态，小鼠四肢有轻微动作以保持
头部在水面)［15］。
2． 4 小鼠悬尾实验 距小鼠尾尖部约 1cm 处用胶布贴于悬尾箱
(30 cm × 30 cm × 25 cm)支架上，使小鼠成倒挂状态，其头部离箱
底约 5cm，1 次悬挂 2 只小鼠，中间用隔板隔开。悬挂时间为
6min，统计小鼠后 4 min内悬尾累积不动时间(不动状态即小鼠
停止挣扎不动或无任何活动)［16］。
2． 5 小鼠自主活动实验 于给药前和末次给药后 1 h，分别测小
鼠的自主活动。方法采用 XZC － 4 小鼠自主活动测定仪，将小鼠
放入测定仪适应 5 min后开始测定，以 10 min 内小鼠于给药前后
的活动次数之差为指标，比较各组小鼠自主活动强度。
2． 6 数据统计处理 实验结果均以 珋x ± s 表示，采用单向方差分
析(ANOVA )检测。P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。
3 结果
3． 1 杨梅叶总黄酮对小鼠强迫游泳不动时间的实验 结果见
表 1。由表 1 可以看出，与空白对照组相比，杨梅叶总黄酮高、中、
低剂量组都能够显著降低小鼠强迫游泳的不动时间，具有统计学
意义(P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01)。而对照药盐酸氟西汀组小鼠后 4 min
的不动时间明显缩短，具有统计学意义(P ＜ 0． 001)。
表 1 杨梅叶黄酮对小鼠强迫游泳不动时间的影响(珋x ± s)
组别 剂量 /mg·kg －1 不动时间 / s 不动减少时间(%)
空白对照 － 138． 4 ± 24． 5 －
盐酸氟西汀 30 70． 4 ± 9． 7＊＊＊ 49． 13
总黄酮低剂量 100 112． 6 ± 18． 3* 18． 64
总黄酮中剂量 200 98． 7 ± 13． 6＊＊ 28． 68
总黄酮高剂量 400 95． 8 ± 11． 7＊＊ 30． 78
与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01，＊＊＊P ＜ 0． 001;n = 10
3． 2 杨梅叶总黄酮对小鼠悬尾不动时间的影响 结果见表 2。
由表 2 可以看出，与空白对照组比较，杨梅叶总黄酮高、中、低剂
量组都能够降低小鼠后 4 min 的不动时间，具有统计学意义(P ＜
0． 05，P ＜ 0． 01) ，从小鼠不动减少时间趋势上看，和给药剂量呈
一定相关性。而盐酸氟西汀组小鼠后 4 min 的不动时间明显缩
短，具有统计学意义(P ＜ 0． 01)。
表 2 杨梅叶黄酮对小鼠旋尾不动时间的影响(珋x ± s)
组别 剂量 /mg·kg －1 不动时间 / s 不动减少时间(%)
空白对照 － 141． 7 ± 26． 2 －
盐酸氟西汀 30 86． 4 ± 12． 5＊＊ 39． 03
总黄酮低剂量 100 114． 6 ± 17． 4* 19． 12
总黄酮中剂量 200 107． 8 ± 15． 6* 23． 93
总黄酮高剂量 400 98． 5 ± 13． 5＊＊ 30． 49
与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;n = 10
3． 3 杨梅叶总黄酮对小鼠自主活动的影响 结果见表 3。由表 3
可以看出，与空白对照组比较，盐酸氟西汀组小鼠自主活动次数
显著减少，具有统计学意义(P ＜ 0． 01) ，杨梅叶总黄酮高、中、低
剂量组小鼠自主活动次数明显减少，有统计学意义(P ＜ 0． 05)。
表 3 杨梅叶黄酮对小鼠自主活动的影响(珋x ± s)
组别 剂量 /mg·kg －1 自由活动次数
空白对照 － 28 ± 64
盐酸氟西汀 30 123 ± 59＊＊
总黄酮低剂量 100 97 ± 66*
总黄酮中剂量 200 118 ± 89*
总黄酮高剂量 400 110 ± 92*
与空白对照组比较，* P ＜ 0． 05;n = 10
4 讨论
本实验采用经典的“小鼠强迫游泳实验”和“小鼠悬尾实验”
研究杨梅叶提取物总黄酮的抗抑郁作用。小鼠强迫游泳实验
(FST)和悬尾实验(TST)［15，16］模型提供了一个无法回避的压迫
环境，实验中小鼠所体现出来的不动状态，反映了一种被称之为
“行为绝望和扭曲”或“对强压环境适应的失败”状态［17］。这两
种行为绝望模型对绝大多数抗抑郁药敏感，操作简单快捷，被广
泛用于筛选和观察抗抑郁药物常用的实验方法。动物在强迫这
一应激条件下，经挣扎后出现绝望表现即不动状态，而抗抑郁剂
可以减少动物的不动时间，提高对应激的耐受性。
本实验采用这两个经典模型对杨梅叶总黄酮进行了初步的
抗抑郁活性筛选，实验研究结果显示:杨梅叶总黄酮能明显缩短
强迫游泳小鼠和悬尾绝望小鼠后 4 min内的不动时间，从小鼠不
动减少时间趋势上看和给药剂量呈一定相关性。杨梅叶总黄酮
能明显减少小鼠自主活动次数，具有镇静作用;说明杨梅叶总黄
酮能够增强实验动物的应激耐受性，减少绝望动物的不动时间，
具有明显的抗小鼠实验性抑郁作用。杨梅叶资源丰富，其有效成
分和药理作用的研究已经引起广泛关注。本研究结果对于促进
杨梅叶资源利用有一定的参考价值。
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 1