全 文 ：＊湖南省计划生育委员会课题No.2002-14
新疆软紫草四种溶媒系统提取物紫草素含量
测 定 及 急 性 毒 性 的 实 验 研 究＊
戴　冰　周新蓓　尹爱武1　盘玉淑2　邹双华2
(湖南中医学院第一附属医院·长沙 410007　1湖南计划生育药具物质管理站·长沙 410007
　2 湖南中医学院药学系 2000 级实习生·长沙 410007)　
摘　要　目的:通过 4种溶媒石油醚 、乙酸乙酯 、乙醇 、水系统提取新疆软紫草。考察各溶媒提取物中紫草
素的含量及小鼠的最大耐受量。方法:室温下渗漉法系统提取软紫草 , 用紫外分光光度仪测定 4 种溶媒系
统提取物中紫草素的含量 ,并对各提取物进行急性毒性实验。结果:软紫草 4种溶媒中紫草素含量的高低
依次为石油醚 、乙酸乙酯 、乙醇提取物 ,水提取物中基本不含紫草素;且各提取物最大耐受量(顺序同上)分
别为:2.0g/kg、12.5g/kg、19.5g/kg 、23.4g/kg 。结论:4种溶媒系统提取物中 , 石油醚提取物中紫草素含量最
高。
主题词　新疆软紫草/分离和提纯　紫草素/分析　紫草素/毒性
　　紫草为紫草科植物新疆软紫草 Arnebiaeuchroma(Royle)
Johnst.紫草 Lithospermum erythrorhizon Sieb , et Zucc.或内蒙紫
草 Arnebia guttata Bunge 的干燥根 , 紫草的有效化学成分主要
分为两大类 ,一类是脂溶性很强的萘醌类色素 , 主要包括紫
草素及其衍生物;二类是水溶性成分 , 主要是多糖 , 含量在
2%左右[ 1] 。然研究证明 , 紫草不同成分的特性及其含量因
提取时所用紫草品系 , 提取方法 ,提取所用溶媒 、温度 、时间
及浸渍次数 ,原药材粉碎度及入药部分的不同而不同 , 从而
也导致软紫草毒性作用的大小不同。同时 , 用不同溶媒提取
软紫草时 , 在何种溶媒中紫草素的含量最高 、最低? 贮存后
其含量有无变化;这些不同溶媒系统提取物的急性毒性作用
如何 ,尚未知晓 , 为究其差异 , 选择了 4种不同溶媒用系统溶
剂法提取软紫草 , 对各提取物中紫草素的含量进行了比较 ,
同时还进行了各提取物急性毒性作用的实验研究。
1　实验材料
1.1　实验动物　昆明种未生育小鼠 , 体重 18 ～ 22g , 由湖南
中医学院动物室提供。
1.2　原料　新疆软紫草(符合2000版中国药典要求)。
1.3　试剂　石油醚:湖南师范大学试剂厂 , 批号 20010404。
乙酸乙酯:长沙安泰精细化工实业有限公司 , 批号 0220803。
乙醇:湖南师范大学试剂厂 , 批号 20001218。水(新鲜蒸馏
水):湖南中医学院第一附属医院药剂科。吐温-80:上海大
众药业有限公司 ,批号 200010317。
1.4　仪器　VV-2401　紫外分光光度仪;电子天平:VS-
J120电子天平。
2　实验方法
2.1　样品的制备
2.1.1　原料的制备　将原药材软紫草 1000g 于 50℃条件下 ,
干燥 3h , 粉碎过筛 ,得干燥品 818g 。
2.1.2　样品制备　用石油醚 、乙酸乙酯 、乙醇 、水作溶媒依
次渗漉提取已干燥软紫草 ,得其石油醚提取物 32.9g、乙酸乙
酯提取物40.8g、乙醇提取物8.4g、水提取物 10.5g。
2.2　紫草素含量的测定　按《中国药典》 2000 版一部附录
VB紫外光光度法测定紫草素的吸光度 A , 测定波长 516nm ,
按左旋紫草素(C16H1605)的吸收系数 E%为 242 计算。得出
不同溶媒提取物 0 个月和放置两个月紫草提取物紫草素的
含量 。
2.3　急性毒性实验
2.3.1　软紫草石油醚提取物溶液的配制　称取一定量的软
紫草石油醚提取物 , 加入 4%的吐温-80 , 再加纯净水至刻
度 , 然后将其置水浴(80℃)上加热溶解即得。
2.3.2　软紫草乙酸乙酯提取物溶液的配制　称取一定量的
软紫草乙酸乙酯提取物 ,于乳钵中碾成极细粉 , 过 100目筛 ,
反复 3 次 , 收集后加纯净水至刻度。
2.3.3　最大耐受量　因受试药物的浓度限制 , 预计 1次给药
无法测出 LD50 , 故做 1日内最大耐受量试验 ,取 18 ～ 22g 左右
的小鼠 , 雌雄各半 , 每组 16 只 , 以动物能耐受的最大体积的
药量 , 将紫草各提取物的最大药物浓度灌服小鼠 1 次 , 每次
0.5mL, 1 日内连续 2次给药 , 观察 7d 内动物的中毒反应 , 并
以死亡为主要指标 ,以不出现死亡之组的用药量为小鼠的最
大耐受量。计算出总给药量(g/kg 系折合生药量计算)。
3　实验结果
3.1　软紫草 4 种溶媒系统提取物紫草素含量测定　见附
表。
由附表可见 ,软紫草的 4 种溶媒系统提取物中 , 其石油
醚提取物中紫草素的含量最高(1.38%), 其次为乙酸乙酯提
取物(0.62%)、乙醇提取物(0.01%),软紫草水提取物中则测
不到紫草素。
·168· 中国中医药科技 2005年 5 月第 12 卷第 3期 May.2005 Vol.12 No.3
附表 软紫草四种溶媒系统提取物中紫草素的含量
软紫草提取物 时间(0)
取样量
()
吸光度
A
含量
%
平均含量
%
原药材 0月 0.54033
0.51190
0.5485
0.5040
2.10
2.03 2.06
石油醚提取物
0月 0.6218
0.6226
0.4148
0.4152
1.38
1.38 1.38
1月 0.6467
0.6407
0.4230
0.4224
1.35
1.36 1.35
3月 1.1206
1.1193
0.7115
0.7107
1.31
1.31 1.31
乙酸乙酯提取物
0月 0.4225
0.4125
0.1234
0.1230
0.61
0.62 0.62
1月 0.5028
0.5020
0.1442
0.1436
0.59
0.59 0.59
3月 0.5024
0.5010
0.1224
0.1221
0.50
0.50 0.50
乙醇提取物
0月 2.4423
2.4384
0.0158
0.0151
0.01
0.01 0.01
1月 2.5708
2.5319
0.0177
0.0175
0.01
0.01 0.01
3月 2.5202
2.5143
0.0151
0.0146
0.01
0.01 0.01
水提取物
0月 1.9577
1.9546
0.0004
0.000
—
—
—
—
1月 1.9865
1.9554
0.0011
0.0009
—
—
—
—
3月 1.9499
1.9523
0.0005
0.0009
—
—
—
—
　　各提取物剂量已折算成生药剂量
3.2　软紫草 4种溶媒提取物急性毒性测定
软紫草的石油醚提取物 ,乙酸乙酯提取物 , 乙醇提取物 ,
水提取物的最大耐受量分别 2g/ kg、12.5g/ kg、19.5g/ kg、
23.4g/kg , 提示:软紫草石油醚提取物的毒性作用最为明显且
随着剂量的增大而增大 ,而其它溶媒的提取物毒性作用不明
显。
4　讨论
实验中发现软紫草的 4 种溶媒系统提取物中紫草素含
量有高低之分 ,其原因是 , 紫草素是脂溶性很强的萘醌类色
素 ,从它的结构特点可知其微溶于水 ,在乙醇中溶解度增大 ,
在石油醚及氯仿中溶解度最大;选择水作为溶媒 , 虽然存在
增溶和助溶的现象 ,但比用有机溶媒提取得到的紫草各类成
分要低得多。故提取紫草时 4 种溶媒提取物中紫草素含量
由高到低顺序依次为石油醚提取物 、乙酸乙酯提取物 、乙醇
提取物 、水提取物。
用系统溶剂法提取紫草中紫草素时 , 发现其石油醚 , 乙
酸乙酯 , 乙醇提取物中紫草素含量分别为 1.38%, 0.62%,
0.01%,也可能与实验中用石油醚渗漉提取时 , 并没有提取
至石油醚几乎无色有关 ,由于提取后药渣中石油醚残留液仍
成紫红色 ,导致药渣中残留紫草素 , 所以当用乙酸乙酯提取
药渣时提取物中仍含有一定量的紫草素 , 同理 , 乙醇提取物
中也含有少许紫草素;但由于紫草素在水中的溶解度较小 ,
且又经前三种溶媒系统提取 , 药渣中几乎已无紫草素 , 故当
用水提取时其提取物中紫草素含量无法测出。 但用石油醚
提取紫草至药渣中石油醚残留液无色 , 再用乙酸乙酯 , 乙醇
提取时 , 该两者提取物中紫草素含量如何? 是有 、是无? 有
待进一步研究。
进行急性毒性实验中发现当每次灌服软紫草石油醚提
取物的剂量大于 2.0g/kg 时 , 小鼠有呼吸急促 , 倦卧 ,活动及
体重明显减少的毒性反应 , 马上开腹腔发现有少量渗血 , 灌
胃 4 ～ 24h后即出现死亡的现象;而其乙酸乙酯 、乙醇 、水的
提取物 , 暂未见上述毒性反应 , 实验表明:新疆软紫草中确有
一定的毒性作用 ,当灌药量超过其某一剂量时 , 可导致小鼠
死亡 ,且这毒性作用的相关成分可能主要存在于新疆软紫草
石油醚的提取物中。
配制软紫草石油醚提取物溶液时发现以 4%, 2%的比例
加入吐温-80 时 ,石油醚提取物的最大耐受量不同 ,分别为
2.0g/ kg , 2.6g/ kg ,这可能与作为增溶剂吐温-80 剂量的大小
也可影响该提取物中脂溶性成分的活性 , 从而导致毒性反应
的程度不同有关。
上述各提取物密封阴凉处放置两个月后测得紫草素含
量尽管均有所降低 , 但降低幅度微弱 , 说明紫草素于低温密
封放置时较稳定 , 这与温度对萘醌类色素影响较大 , 高于
60℃可使其成分大部分破坏[ 2] , 与文献报道相符;其含量降
低微弱的原因可能为实验过程中操作损耗所致;然各提取物
低温储存时未密封放置 ,或密封时间超过六个月其紫草素含
量如何变化? 有待进一步探究。
提取软紫草时的温度也是很重要的因素。而以往即使
在使用同一溶媒石油醚提取时 , 有的用索氏提取[ 3] , 有的用
回流提取[ 4] 、有的用冷浸萃取[ 5]方式提取 , 前二者提取时的
温度远远高于 60℃,有些成分受到了破坏 , 因而导致同一溶
媒不同温度提取时 , 所含软紫草的成分也不相同。油浸法
(70℃)提取时对相关成分有一定破坏;油炸法一般都是
200℃左右操作 , 时间虽短 , 对软紫草成分的影响还是较大
的。故本实验采用渗漉法于室温提取软紫草。
　　参考文献
1　卢贺起.紫草实验研究进展.中国中医药信息 1998;5(1):20
2　谢秀琼.对制剂中紫草及其相关的成分和提取工艺的探讨.中国
药房 1997;8(2):25
3　李立荣.对紫草中紫草色素的初步研究.湖南中医学院学报
2000;20(2):25
4　刘晓华.紫草提取工艺优选及稳定性研究.中药材 2001;24(5):
357
5　付善林.新疆软紫草中萘酯色素的研究.中草药 1986;17(10):2
(收稿:2004-04-28)
·169·中国中医药科技 2005 年 5月第 12 卷第 3 期 May.2005 Vol.12 No.3