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不同浓度CPPU对欧亚旋覆花愈伤组织诱导的影响



全 文 :湖 北 农 业 科 学 2012 年
第 51卷第 6 期
2012年 3 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 51 No.6
Mar.,2012
收稿日期:2011-08-08
作者简介:周红菊(1981-),女,河北衡水人,助教,硕士,主要从事药用植物的组织培养研究,(电话)15130822569(电子信箱)zhouhongjv@126.com。
欧亚旋覆花(Inula britannica L.)是菊科多年生
草本植物,是一种中草药,含多种生物活性成分。 其
含有的乙酰大花旋覆花内酯具有和紫杉醇相似或
更强的抗癌活性,可作为一种有效的天然化学防癌
剂和治疗药物 [1],但其活性成分在原植物中的含量
极低且不稳定,产自山西的欧亚旋覆花中乙酰大花
旋覆花内酯的含量为 0.58%, 而产于河北的则为
0.34%[2]。持续地从野生欧亚旋覆花中提取有效活性
成分势必会破坏生物多样性和生态系统的平衡。 采
用植物组织培养的方法使得该类活性成分的获取
在人为可控及可持续生产的条件下进行,具有广阔
的应用前景。
调吡脲(CPPU)是一种人工合成的吡啶取代脲
类的细胞分裂素,具有诱导愈伤组织生长,促进芽
的发育、种子的萌发,保绿和延缓衰老等显著的生
理活性[3]。CPPU诱导细胞分裂和促进器官发生的活
性远远高于一般嘌呤类细胞分裂素的活性[4]。 低浓
度的 CPPU 能促进草莓愈伤组织分化 [5]、香蕉不定
芽增殖[6]等。
以欧亚旋覆花无菌苗为材料, 研究不同浓度
CPPU 对其叶片、根愈伤组织诱导的影响,为其愈伤
组织的培养提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
欧亚旋覆花无菌苗由河北医科大学组织培养
室培养所得。
1.2 方法
切取欧亚旋覆花无菌苗的根和叶片作为外植
体,接种到附加不同浓度 CPPU(0、0.05、 0.10、0.50、
1.00 mg / L)、6-BA 0.5 mg / L、NAA 1.0 mg / L 的 MS
培养基上,黑暗培养,诱导温度为(23±1)℃,40 d 后
统计愈伤组织诱导率和观察愈伤组织生长状况,每
个处理接种 35个外植体, 3次重复。研究不同浓度
CPPU对欧亚旋覆花愈伤组织的诱导情况。
不同浓度 CPPU对欧亚旋覆花愈伤组织诱导的影响
周红菊
(衡水学院生命科学学院,河北 衡水 053000)
摘要:以欧亚旋覆花(Inula britannica L.)无菌苗为材料,研究了不同浓度调吡脲(CPPU)对其叶片、根愈
伤组织诱导的影响。 结果显示,CPPU 的浓度为 0.10 mg / L 时,叶片的愈伤组织诱导率为 82.9%,且诱导出
的愈伤组织生长好。 CPPU 的浓度为 0.50 mg / L 时,根的愈伤组织诱导率最高,达 100.0%,愈伤组织生长
最好,呈浅黄绿色,部分带有红色斑点,质地疏松,具光泽。
关键词:调吡脲(CPPU);欧亚旋覆花(Inula britannica L.);愈伤组织诱导
中图分类号:Q949.783.5;Q813.1+2 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2012)06-1268-02
Influence of CPPU Concentration on Callus Induction of Inula britannica
ZHOU Hong-jü
(College of Life Science, Hengshui University, Hengshui 053000,Hebei,China)
Abstract: Using the leaves and root of Inula britannica L. aseptic seedling as explants, the effect of CPPU concentration on
the induction of callus was studied. The results showed that the callus inducing rate of leaf was as high as 82.9% when the
concentration of CPPU in medium was 0.10 mg / L; and the growth of callus was well. The callus inducing rate of root could
be up to 100% when the medium was containing 0.50 mg / L CPPU; the callus was light Kelly, loose and glossy.
Key words: CPPU; Inula britannica L.; callus induction
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2012.06.045
第 6 期
(责任编辑 田宇曦)
表 1 不同浓度 CPPU 对叶片愈伤组织诱导的影响
CPPU 浓度//mg/L
0
0.05
0.10
0.50
1.00
接种的外植体数
35
35
35
35
35
愈伤组织块数
17
9
29
2
0
愈伤组织诱导率//%
48.6
25.7
82.9
5.7
0
愈伤组织颜色
黄绿色
黄绿色
黄绿色
黄绿色
生长状况
++
++
+++
++
-
注:“-”表示有抑制作用;“+”表示生长差;“++”表示生长一般;“+++”表示生长较好;“++++”表示生长好;“+++++”表示生长最好。 下同。
表 2 不同浓度 CPPU 对根愈伤组织诱导的影响
CPPU 浓度//mg/L
0
0.05
0.10
0.50
1.00
接种的外植体数
35
35
35
35
35
愈伤组织块数
24
35
10
35
0
愈伤组织诱导率//%
68.6
100.0
28.6
100.0
0
愈伤组织颜色
浅黄绿色,部分带有红色斑点
浅黄绿色,部分带有红色斑点
浅黄绿色
浅黄绿色,部分带有红色斑点
生长状况
+++++
++++
+++
+++++
-
2 结果与分析
2.1 不同浓度 CPPU对叶片愈伤组织诱导的影响
表 1 表明,CPPU 对欧亚旋覆花叶片愈伤组织
诱导率及愈伤组织诱导出后生长有一定的作用,从
愈伤组织诱导率来看, 在不同浓度的 CPPU 中,以
0.10 mg / L 的愈伤组织诱导率最高,为 82.9%,低浓
度和高浓度的 CPPU 均导致愈伤组织诱导率降低,
CPPU 浓度为 1.00 mg / L 时已完全抑制外植体产生
愈伤组织。 从愈伤组织生长情况来看,CPPU浓度为
0.10 mg / L 时,愈伤组织生长较好,其他浓度下,愈伤
组织生长一般。 从出芽状况上看,不添加 CPPU 时,
叶脉处有腋芽生成,且生长健壮,CPPU 浓度为 0.05
mg / L时叶脉处有叶芽生成,但生长较弱,CPPU的浓
度大于 0.10 mg / L时,叶脉处无叶芽生成。 结合愈伤
组织诱导率及愈伤组织诱出后生长情况来看,各浓
度 CPPU 对叶片诱导愈伤组织情况的综合排名为
C2>C0>C1>C3>C4(C0代表不添加 CPPU,C1、C2、C3、C4依
次代表添加 0.05、0.10、0.50、1.00 mg / L CPPU,下同)。
2.2 不同浓度 CPPU对根愈伤组织诱导的影响
表 2 表明,CPPU 对欧亚旋覆花根愈伤组织有
较强的诱导作用,愈伤组织诱导率随激素浓度的不
同差异较大, 在不同浓度的 CPPU 中, 以 0.05 和
0.50 mg / L 的愈伤组织诱导率最高,为 100.0%,CP
PU 浓度为 1.00 mg / L 时,完全抑制了外植体产生愈
伤组织。 从愈伤组织生长情况来看, CPPU 浓度为
0.50 mg / L时所诱导的愈伤组织生长最好,呈浅黄绿
色,部分带有红色斑点,质地疏松,具光泽。 结合愈
伤组织诱导率及愈伤组织诱导出后生长发育情况
来看, 各浓度 CPPU对根诱导愈伤组织情况的综合
排名 C3>C1>C0>C2>C4。
3 讨论
药用植物的有效成分往往是次生代谢产物,大
量的研究表明,一些植物的细胞培养物可以产生次
生代谢产物。 到目前为止,中国科学人员已经建立
了三七、人参、紫草、甘草、红豆杉、丹参等十几种药
用植物细胞的液体培养系统,经过培养基和培养条
件的筛选已使部分药用植物的有效成分含量达到
或超过了原植株。
目前已报道的欧亚旋覆花的研究主要集中在
其活性成分的药理作用、 提取和结构鉴定等方面,
未见其植物组织培养和活性成分生物合成方面的
报道。 本试验研究了不同浓度 CPPU 对愈伤组织诱
导的影响,为欧亚旋覆花愈伤组织的培养提供理论
依据,为其有效成分的生物合成研究奠定了基础。
参考文献:
[1] HO C T,RAFI M,DIPAOLA R S,et al. Inducing cell apopto-
siss and treating cancer using 1 -O -Acetylbritannilatone or
1,6-O,O-Diacetylbritannilatone[P]. USA:US6627623B2,2003-
09-30.
[2] 王维娜,王云志,张嫡群.旋覆花 1-O-Acetylbritannilactone RP-
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[3] 李颖华,宁聪梅. 新型植物生长调节剂调吡脲[J]. 农药,1994,
33(4):18-19.
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农药,2006,45(3):151-154.
[5] 吴伟民,陈晓强,陈秀兰,等. CPPU对草莓花药愈伤组织诱导和
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[6] 罗富英, 张伟国, 黄麒参. CPPU对香蕉不定芽增殖的影响[J].
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