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【责任编辑： 黄玲】
收稿日期： 2015-09-07
作者简介： 李景（1988-），女，硕士研究生；E-mail：994274916@qq.com
通讯作者： 董燕（1969-），女，研究员，博士研究生导师；E-mail：dondy001@gzucm.edu.cn
基金项目： 国家自然科学基金项目（编号：81573672）
青藤碱对细菌内毒素刺激的小鼠及巨噬细胞嘌呤
受体 A2A、 P2X7表达的影响
李景， 吴阳阳， 周海松， 朱瑞丽， 易浪， 董燕， 王培训
（ 广州中医药大学临床药理研究所免疫研究室， 广东广州 510405）
摘要 ：【 目的】 探讨青藤碱（sinomenine，SIN）对细菌内毒素（LPS）刺激的小鼠内毒素血症模型及巨噬细胞 RAW264.7细胞炎症
模型嘌呤受体 A2A、P2X7表达的影响。【 方法】 选用 BALB/c 小鼠设空白对照组，模型组，青藤碱组（剂量分别为 40、80、
160 mg/kg），青藤碱组给予腹腔注射青藤碱 30 min后，模型组和青藤碱组给予腹腔注射 LPS（剂量为 15 mg/kg）建立内毒素血
症小鼠模型，采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平；逆转录—聚
合酶链反应（RT-PCR）检测肝脏、脾脏嘌呤受体 A2A、P2X7的表达。RAW264.7细胞设空白组、LPS组、青藤碱组，青藤碱
组给予青藤碱（300 μmol/L）干预 2 h后，LPS 组和青藤碱组均给予 LPS（剂量为 100 ng/mL），继续培养 8 h后，采用 ELISA
法检测上清 TNF-α分泌量，RT-PCR法检测细胞 P2X7、A2A mRNA表达。【 结果】 在 LPS刺激下，小鼠血清 TNF-α和 IL-6
水平显著上升，肝脏、脾脏组织中嘌呤受体 A2A、P2X7的表达显著升高，青藤碱能下调 TNF-α和 IL-6水平，并抑制 A2A、P2X7
的表达（均 P<0.05）；体外 LPS 刺激下，RAW264.7细胞分泌 TNF-α增加，A2A、P2X7的表达增加，青藤碱可抑制TNF-α的
分泌，并下调 P2X7的表达（均 P<0.05），但对 A2A 的表达有促进作用。【 结论】 青藤碱对 LPS刺激的小鼠肝脏、脾脏及体外
巨噬细胞中嘌呤受体 P2X7的表达增加均表现抑制作用，而对不同组织细胞中 A2A表达的影响不同，相关机制有待深入。
关键词： 青藤碱/药理学；嘌呤受体；脂多糖；细胞因子；基因表达调控；细胞培养；疾病模型，动物；小鼠
中图分类号： R285.5 文献标志码： A 文章编号： 1007-3213（2016）01 - 0097 - 07
DOI： 10． 13359/j． cnki． gzxbtcm． 2016． 01． 024
广州中医药大学学报
Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine
2016 年 1 月第 33 卷第 1 期
January 2016，Vol. 33，No. 1 97
C M Y K
青藤碱（sinomenine，SIN）是属于吗啡喃型的一
种单体生物碱，也是中药青风藤的主要活性成分，
有抗炎、抗风湿、免疫抑制、镇痛、镇静等多种药
理作用[1]。临床多用其盐酸盐制剂，用于治疗类风
湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）等免疫性疾
病疗效较好，逐渐成为治疗风湿病的一线药物 [2]。
也有研究报道青藤碱对细菌内毒素（LPS）诱导的
肝炎和急性肺损伤动物模型有干预和保护作用[3]。
嘌呤受体参与调控机体的免疫应答，包括 P1
受体、P2受体。其中 P1受体又称腺苷受体，属于
G蛋白偶联受体家族，分为 A1、A2A、A2B、A3
4种，主要是由腺苷激活。P2 受体又可分为 P2X
和 P2Y，P2X属于配体门控离子通道，P2Y则是一
类 G 蛋白偶联受体。嘌呤受体的组织分布广泛，
其中又以免疫系统表达最为丰富，发挥重要的免
疫调节作用[4]。青藤碱发挥抗炎作用是否影响嘌呤
受体及其内在机制尚不清楚。
嘌呤受体 A2A、P2X7与炎症反应密切相关[5-6]。
本研究通过检测 LPS刺激的内毒素血症小鼠和巨
噬细胞炎症模型的炎性因子及嘌呤受体 A2A、
P2X7 mRNA的表达变化，观察青藤碱的抗炎作用
及对 A2A、P2X7表达的影响，现报道如下。
1 材料与方法
1. 1 实验动物及细胞株 健康 SPF级 BALB/c 小
鼠，雄性，体质量（20 ± 2）g，购于广东省动物中
心，合格证号：SCXK（粤）2014-0035。RAW264.7
细胞株小鼠巨噬细胞株，引自武汉大学保藏中心。
1. 2 主要药物、 试剂与仪器 细菌内毒素（LPS）
（美国 Sigma公司）；青藤碱（分析标准品，HPLC≥
970 mg/g，美国 Aladdin 公司）；盐酸青藤碱
（Melonepharma 大连美仑生物公司）；完全培养液
RPMI-1640、胎牛血清（FBS）（美国 Gibco公司）；
青霉素、链霉素（美国 Sigma 公司）；酶联免疫吸
Effect of Sinomenine on Expression of Purinergic Receptors A2A and P2X7 in
Mouse Model and In-vitro Macrophages Stimulated
by Lipopolysaccharide
LI Jing， WU Yangyang， ZHOU Haisong， ZHU Ruili，
YI Lang， DONG Yan， WANG Peixun
（Institute of Clinical Pharmacology，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405 Guangdong，China）
Abstract：Objective To investigate the effect of sinomenine on the purinergic receptors A2A and P2X7 in
endotoxemia mouse model and RAW264.7 macrophage model stimulated by lipopolysaccharide（LPS）. Methods
BALB/c mice were randomly divided into blank control group， model group and sinomenine group. Thirty
minutes after the rats of sinomenine group were pretreated with intraperitoneal injection of sinomenine
（40，80，160 mg/kg）， the mice were given intraperitoneal injection of 15 mg/kg LPS to induce endotoxemia
model. The serum levels of tumor necrosis factor-alpha（TNF-α）and interleukin-6（IL-6）were measured by
enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）. The expression levels of purinergic receptor A2A and P2X7 in
the liver and spleen were detected by reverse transcription - polymerase chain reaction（RT-PCR）. RAW264.7
macrophages were divided into blank control group，LPS group and sinomenine group. Sinomenine group was firstly
treated with sinomenine（300 μmol/L）for 2 h，and then LPS group and sinomenine group were treated with LPS
（100 ng/mL）for another 8 hours. TNF-α in the cell supernatant was measured by ELISA，and the expression
levels of A2A and P2X7 in RAW264.7 cells were detected by RT-PCR. Results Stimulation with LPS could
induce the increase of the mouse serum levels of TNF-α and IL-6 as well as the expression of A2A and P2X7 in
mouse liver and spleen，and sinomenine had a counteraction on the above indexes（P<0.05） . In-vitro stimulation
with LPS could induce the increase of the content of TNF-α and the expression of A2A and P2X7 in RAW264.7
cells， and sinomenine decreased TNF -α content and P2X7 expression （P<0.05），but had an effect on
enhancing A2A expression. Conclusion Sinomenine suppresses the expression of purinergic receptor P2X7 in
mouse spleen and liver as well as in RAW264.7 macrophages，but its effect on the expression of A2A in various
tissues and cells varies，whose related mechanism is needed further study.
Key words：sinomenine/pharmacology；purinergic receptors；lipopolysaccharide；cytokines；gene expression
regulation；cell culture；disease models，animal；mice
广州中医药大学学报 2016 年第 33 卷98
C M Y K
附（ELISA）检测试剂盒（美国 Ebioscience 公司）；
Trizol（美国 Invitrogen 公司）；琼脂糖（西 班 牙
Biowest 公司）；逆转录试剂盒（美国 Invitrogen 公
司）；PCR试剂盒（Transgen北京全式金生物公司）；
A2A、P2X7及内参基因 β-actin引物均由生工生物
工程公司合成。Tanon1600全自动数码凝胶图像分
析系统（Tanon上海天能公司）；Synergy HT多功能
酶标仪（美国 BioTek 公司）；5810R 高速冷冻离心
机（德国 Eppendorf 公司）；Du730 紫外—可见分
光光度计（美国 Beckman 公司）；164-5070 电泳
仪（美国 Bio-Rad公司）。
1. 3 动物分组、造模[7]及给药 BALB/c小鼠 40只，
随机分为 5组：空白组（10 只）、模型组（10 只）、
青藤碱 40 mg/kg 组（10 只）、青藤碱 80 mg/kg组
（5只）、青藤碱 160 mg/kg组（5只），编 1 ～ 10（或
1 ～ 5）号。模型组一次性腹腔注射 LPS（剂量为
15 mg/kg），各剂量青藤碱组于注射 LPS前 30 min
腹腔注射不同剂量青藤碱，空白对照组腹腔注射等
量磷酸盐缓冲液（PBS）。
1. 4 动物标本采集及指标检测 小鼠摘眼球采血
0.5 mL 左右，LPS 刺激 1 h 时，以上 5 组小鼠的
1 ～ 5号采血用于检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）；
3 h 时，空白组、模型组、青藤碱 40 mg/kg 组的
6 ～ 10 号小鼠采血用于检测白细胞介素-6（IL-6）。
血液室温静置 1 h，离心（4℃、900 r/min，15 min）
取上清，用于 ELISA检测。空白对照组、模型组、
青藤碱 40 mg/kg组的 6 ～ 10号取血后，脱颈椎处
死小鼠，摘取肝脏、脾脏置于-70℃冰箱保存，用
于逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）检测。
1. 5 细胞培养及给药 RAW264.7 细胞采用含体
积分数 10%胎牛血清的 RPMI-1640 培养液培养，
调整细胞浓度为 1×105/mL，每孔加 1 mL入 24孔板，
设空白组、LPS组、青藤碱 300 μmol/L组，每组 3
个复孔。37℃、体积分数 5%CO2细胞培养箱中培
养过夜后换新的 RPMI-1640液 1 mL，青藤碱组加
含青藤碱（300 μmol/L）的培养液干预 2 h 之后，
LPS 组及青藤碱组加 LPS 至终浓度 100 ng/mL，
空白组加入等体积的 PBS。继续培养 8 h后，分别
收集上清用于 ELISA检测，再收集细胞 RNA裂解
液，每孔加入 500 μL Trizol裂解液，吹打细胞裂
解后收集至 EP管中，-70℃保存待测。
1. 6 各组小鼠血清TNF-α、 IL-6及细胞上清中
TNF-α检测 取小鼠血清或细胞上清，适当稀释
后，按照 ELISA检测试剂盒说明书进行 TNF-α或
IL-6的检测，采用多功能酶标仪检测吸光度。
1. 7 各组嘌呤受体A2A、 P2X7 mRNA的表达检测
采用 Trizol裂解肝脏、脾脏组织及巨噬细胞，提
取总 RNA，按照逆转录试剂盒说明书进行逆转录。
RT-PCR中所用的引物由生工生物工程公司合成。
P2X7：上游 5’-ATTATGGCACCGTCAAGTGG-3’，
下游 5’-TCAGTAGGACACCAGGCAGA-3’，产物 4
39bp；A2A：上游5’-CCTGCACATCATCAACTGCT -3’，
下游 5’-TGCTCCTGGGTAAGAAGCTC-3’，产物 411
bp； β -actin： 上 游 5’-TATGCCAACACAGT
GTTGTCTG G -3’，下 游 5’-TACTCCTGCTTGCT
GATCCACAT-3’，产物 206 bp。反应体系为 PCR
Super Mix 12.5 μL、上游引物 1 μL、下游引物 1 μL、
ddH2O 5.5 μL、cDNA模板 5 μL。PCR 扩增条件：
94℃预变性 3 min，然后 94℃变性 30 s，60℃退火
30 s，72℃延伸 1 min，共 40个循环；然后 72℃、
5 min，最后 4℃无限循环，反应结束。使用 15 g/L
的琼脂糖凝胶电泳，电泳条件为：恒压 110 V，50
min。使用 Tanon 1600全自动数码凝胶图像分析系
统进行拍照及分析。
1. 8 统计方法 实验数据用 SPSS 17.0 for windows
统计软件处理分析，统计方法使用 One -Way
ANOVA及 LSD检验，数据用均数 ±标准差（ x ± s）
表示，以 P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 青藤碱对内毒素血症模型小鼠血清TNF-α、
IL-6含量的影响 图 1 结果显示：给予 LPS 刺激
1 h时，模型组血清 TNF-α含量显著高于空白组，
青藤碱 40 mg/kg 组、80 mg/kg 组、160 mg/kg 组
TNF-α含量显著低于模型组，差异均有统计学意
义（P<0.05），并呈一定的剂量效应关系。图 2结果
李景， 等． 青藤碱对细菌内毒素刺激的小鼠及巨噬细胞嘌呤受体 A2A、 P2X7表达的影响
ρ T
N
F
-
α
/
（
p
g
·
m
L-
1 ）
6000
4000
2000
0
①
②
②
②
①P<0.05，与空白组比较；②P<0.05，与模型组比较
图1 不同剂量青藤碱对小鼠血清TNF-α含量
的影响 （ x ± s， N=5）
Figure 1 Effect of different concentrations of sinomenine
on serum level of TNF-α in mice
模
刑
组
空
白
组 SIN
40
mg
/kg
组 SIN
80
mg
/kg
组 SIN
160
mg
/kg
组
第 1 期 99
C M Y K
显示：给予 LPS刺激 3 h时，模型组血清 IL-6含
量显著高于空白组，青藤碱组 IL-6含量显著低于
模型组，差异均有统计学意义（P<0.05）。
①P<0.05，与空白组比较；②P<0.05，与模型组比较
图2 青藤碱对小鼠血清IL-6含量的影响 （ x ± s， N=5）
Figure 2 Effect of sinomenine on serum level
of IL-6 in mice
2. 2 青藤碱对LPS刺激的RAW264.7细胞分泌TNF-
α的影响 图 3结果显示，给予 LPS刺激时，LPS
组血清 TNF-α含量显著高于空白组，青藤碱（300
μmol/L）组 TNF-α含量显著低于 LPS组，差异均
有统计学意义（P<0.05）。
2. 3 青藤碱对小鼠肝脏、 脾脏嘌呤受体A2A表达
的影响 图 4、图 5结果显示：在小鼠肝脏、脾脏
扩增到 250 ～ 500 bp大小的产物，与预期扩增 A2A
的 411 bp目的条带一致。内参 β-actin为 206 bp。
经相对表达量的计算，表 1结果显示：模型组小鼠
肝脏、脾脏 A2A受体的表达水平显著高于空白组，
青藤碱组小鼠肝脏、脾脏 A2A受体的表达水平显
著低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。
M. marker；1、2. 空白组；3、4. 模型组；5、6. SIN组
图4 小鼠肝脏A2A mRNA的RT-PCR电泳图
Figure 4 RT-PCR electrophoretogram of A2A mRNA
in mouse liver
M. marker；1、2. 空白组；3、4. 模型组；5、6. SIN组
图5 小鼠脾脏A2A mRNA的RT-PCR电泳图
Figure 5 RT-PCR electrophoretogram of A2A mRNA
in mice spleen
表1 各组小鼠肝脏、 脾脏A2A mRNA相对
表达量比较
Table 1 Comparison of relative expression of
A2A mRNA in the mouse liver and spleen
in different groups （ x ± s， pA2A/β-actin）
①P<0.05，与空白组比较；②P<0.05，与模型组比较
2. 4 青藤碱对小鼠肝脏、 脾脏嘌呤受体P2X7表达
的影响 图 6、图 7显示：在小鼠肝脏、脾脏扩增
到 250 ～ 500 bp 大小的产物，与预期扩增 P2X7的
439 bp目的条带一致。内参 β-actin为 206 bp。经
相对表达量的计算，表 2结果显示：模型组小鼠肝
脏、脾脏 P2X7受体的表达水平显著高于空白组，
青藤碱组小鼠肝脏、脾脏 P2X7受体的表达水平显
著低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。
2. 5 青藤碱对RAW264.7细胞嘌呤受体A2A、 P2X7
表达的影响 图 8结果显示：在 RAW264.7细胞扩
增到 250 ～ 500 bp 大小的产物，与预期扩增 A2A
的411 bp 目的条带一致。内参 β-actin为 206 bp。
经相对表达量的计算，表 3 结果显示：与空白组
比较，LPS 组 A2A 受体 mRNA 水平显著升高（P<
ρ I
L
-
6/
（
p
g
·
m
L-
1 ）
空白组 模型组 SIN 40 mg/kg组
20 000
15 000
10 000
5 000
0
①
②
①P<0.05，与空白组比较；②P<0.05，与模型组比较
图3 青藤碱对RAW264.7细胞分泌TNF-α
的影响 （ x ± s， N=3）
Figure 3 Effect of sinomenine on the level of TNF-α
in RAW264.7 cells
ρ T
N
F
-
α
/
（
p
g
·
m
L-
1 ）
空白组 模型组 SIN 300 μmol/L组
150
100
50
0
①
②
M 1 2 3 4 5 6
2 000 bp
500 bp
250 bp
100 bp
411 bp
206 bp
M 1 2 3 4 5 6
2 000 bp
500 bp
250 bp
100 bp
411 bp
206 bp
组别
空白组
模型组
青藤碱组
N
5
5
5
肝脏
0.76±0.003
0.96±0.002①
0.88±0.002②
脾脏
0.83±0.002
0.93±0.002①
0.75±0.001②
广州中医药大学学报 2016 年第 33 卷100
C M Y K
0.01）。与 LPS组比较，青藤碱组 A2A受体 mRNA
水平升高（P<0.05），表明青藤碱可使炎症状态下巨
噬细胞 A2A 受体表达升高。图 9 结果显示：在
RAW264.7 细胞扩增到 250 ～ 500 bp 大小的产物，
与预期扩增 P2X7的 439 bp 目的条带一致。内参
β-actin为 206 bp。经相对表达量的计算，表 3结
果显示：在 RAW264.7 细胞中，与空白组比较，
LPS 组 P2X7 受体 mRNA 水平显著升高（P<0.01）；
与 LPS组比较，青藤碱组 P2X7受体 mRNA水平显
著降低（P<0.01），表明青藤碱抑制了 LPS对巨噬细
胞 P2X7受体基因表达的影响。
M. marker；1、4. 空白组；2、5. 模型组；3、6. SIN组
图9 RAW264.7细胞P2X7 mRNA的RT-PCR电泳图
Figure 9 RT-PCR electrophoresis results for of P2X7
mRNA in RAW264.7 cells
表3 各组小鼠肝脏、 脾脏和RAW264.7 细胞A2A
的mRNA相对表达量
Table 3 Comparison of relative expression of A2A， P2X7
of RAW264.7 cells in different groups （ x ± s）
①P<0.05，与空白组比较；②P<0.05，与模型组比较
3 讨论
细菌内毒素（lipopolysaccharide，LPS）是革兰阴
性菌的细胞壁脂多糖成分，LPS作用于细胞膜受体
Toll样受体 4（TLR4），并诱导多种细胞因子如 IL-
6、TNF-α等的合成和释放[8]。TNF-α和 IL-6在炎
症过程中起非常重要的作用，可以引起发热、低
血压及乳酸酸中毒、不可逆性休克[9]。诱导 TNF-α、
IL-6产生的最有效物质是 LPS，一般认为其水平
的高低与病情发展呈正相关。
根据文献报道，给予 LPS刺激后，小鼠 TNF-α
和 IL-6分别在 1 h、3 h达到峰值[10]，本研究分别
选择 1 h、3 h检测血清 TNF-α、IL-6含量。结果
表明不同剂量青藤碱（40、80、160 mg/kg）对内毒素
M. marker；1、2. 空白组；3、4. 模型组；5、6. SIN组
图7 小鼠脾脏P2X7 mRNA的RT-PCR电泳图
Figure 7 RT-PCR electrophoretogram of P2X7 mRNA
in mouse spleen
M 1 2 3 4 5 6
2 000 bp
500 bp
250 bp
100 bp
439 bp
206 bp
M 1 2 3 4 5 6
2 000 bp
500 bp
250 bp
100 bp
439 bp
206 bp
M. marker；1、2. 空白组；3、4. 模型组；5、6. SIN组
图6 小鼠肝脏P2X7 mRNA的RT-PCR电泳图
Figure 6 RT-PCR electrophoretogram of P2X7 mRNA
in mouse liver
表2 各组小鼠肝脏、 脾脏P2X7的mRNA相对表达量比较
Table 2 Comparison of relative mRNA expression of
P2X7 of the mouse liver and spleen
in different groups （ x ± s， pP2X7/β-actin）
①P<0.05，与空白组比较；②P<0.05，与模型组比较
组别
空白组
模型组
青藤碱组
N
5
5
5
肝脏
0.49±0.010
0.69±0.015①
0.51±0.015②
脾脏
0.59±0.003
0.82±0.003①
0.65±0.003②
2 000 bp
500 bp
250 bp
100 bp
411 bp
206 bp
M 1 2 3 4 5 6
M 1 2 3 4 5 6
2 000 bp
500 bp
250 bp
100 bp
439 bp
206 bp
组别
空白组
LPS组
青藤碱组
N
3
3
3
pA2A/β- actin
0.69±0.12
0.96±0.09①
1.06±0.10②
pP2X7/β-actin
0.58±0.02
0.99±0.04①
0.69±0.01②
M. marker；1、4. 空白组；2、5. 模型组；3、6. SIN组
图8 RAW264.7细胞A2A mRNA的RT-PCR电泳图
Figure 8 RT-PCR electrophoretogram of A2A
mRNA in RAW264.7 cells
李景， 等． 青藤碱对细菌内毒素刺激的小鼠及巨噬细胞嘌呤受体 A2A、 P2X7表达的影响第 1 期 101
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血症小鼠均有抗炎作用，并呈一定的剂量依赖性。
根据本课题组前期研究结果 [11]选择300 μmol/L青
藤碱抗炎剂量干预体外巨噬细胞炎症模型。
本研究分析了青藤碱对体内外 LPS 模型的抗
炎作用与嘌呤受体 A2A、P2X7表达的相关性。研
究结果表明青藤碱可降低体内外 LPS模型的炎性
细胞因子发挥抗炎作用，并对 LPS所致的小鼠肝
脏、脾脏、RAW264.7 细胞 P2X7 的表达升高有抑
制作用。而对于 A2A的调控上，青藤碱的作用有
所不同。青藤碱可以下调内毒素血症小鼠肝脏、脾
脏 A2A的表达，但对于体外巨噬细胞，青藤碱的
作用则表现为上调 A2A的表达量。
机体在感染、创伤的病理过程中会产生大量腺
苷，腺苷通过与腺苷受体结合发挥对免疫应答及炎
性反应的调控作用[12]。在不同的病理条件下，A2A
受体活化的免疫调节作用方向不同、产生的效应不
同[13]。根据已有的研究[14]认为，A2A在不同炎症模
型、不同组织细胞中的表达变化情况较为复杂。
A2A 在脓毒症早期发挥非特异性的抗菌、抗炎、
抗感染作用，活化中性粒细胞的 A2A受体可以通
过 cAMP依赖及非依赖途径抑制炎性因子，激活巨
噬细胞及树突状细胞上的 A2A受体，促使其释放
保护性的细胞因子[15]。A2A受体活化能够抑制免疫
应答过程中的早期和末期反应，包括抗原提呈、共
刺激、免疫细胞转运及增殖、致炎细胞因子释放和
细胞毒性反应，同时它还参与组织重塑和修复。在
组织损伤与修复的作用过程中，A2A受体发挥保
护和创伤促愈作用，其机制主要在于对组织损伤后
炎症反应的抑制以及对修复过程中免疫细胞功能的
促进而实现[16]。在由卵清蛋白引起的大鼠肺炎模型
中，使用腺苷 A2A受体激动剂 CGS21680 能抑制
中性粒细胞及嗜酸性粒细胞的数量，进而减缓其
向肺纤维化发展的趋势[17]。当大鼠发生肝损伤或肝
纤维化时，腺苷 A2A mRNA 的表达明显升高 [18]，
腺苷在肝脏中的聚集可加剧肝功能衰竭动物模型
中肝脏的损伤[19]。
本研究结果显示：炎症状态下 A2A表达升高，
青藤碱对内毒素血症模型小鼠发挥抗炎作用时肝
脏、脾脏 A2A的表达下降，但对 RAW264.7 巨噬
细胞 A2A表达表现为上调作用，提示青藤碱可能
通过提高巨噬细胞 A2A 表达发挥免疫保护作用，
青藤碱对不同的组织、细胞中 A2A表达的影响有
不同，相关机制有待深入。
P2X7在细胞的炎症反应过程中扮演着感受器
的角色，即监测炎症部位的危险信号 ATP的释放
情况，进一步促使炎症细胞活化并释放炎症因子。
有研究表明 P2X7受体参与炎症反应中细胞因子的
释放。敲除 P2X7受体的动物，其炎症反应及疼痛
症状明显减弱[20]。在本研究中，LPS刺激的体内外
模型的 P2X7 受体表达均增加，而青藤碱可抑制
P2X7受体 mRNA的表达，可能与青藤碱有效抑制
LPS模型的炎性细胞因子分泌相关。
本研究初步探讨了青藤碱对 LPS 体内外模型
A2A、P2X7受体 mRNA表达的影响，结果表明青
藤碱可降低 LPS模型炎症水平，并降低嘌呤受体
P2X7 的表达，而对 A2A 表达的调节作用有所不
同，本研究为进一步研究青藤碱抗炎机制及其与
A2A、P2X7的内在关系打下基础。
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【责任编辑： 黄玲】
收稿日期： 2015-04-29
作者简介： 刘静（1991-），女，在读硕士研究生；E-mail：13535464764@139.com
通讯作者： 李卫民（1954-），男，教授，博士研究生导师；E-mail：13925023915@139.com
知柏药对原料提取物对小鼠糖尿病周围神经病变的药效作用
刘静， 李艳， 辛永涛， 高英， 周欣欣， 李卫民
（ 广州中医药大学中药学院， 广东广州 510006）
摘要：【 目的】 探讨知柏药对原料的提取物对小鼠糖尿病周围神经病变的药效学作用。【 方法】 采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ，
剂量为 30 mg/kg）联合喂食高脂饲料诱导小鼠糖尿病模型，将 160只雄性 C57BL/6j小鼠随机分为 8组，每组 20只，分别为
正常组，模型组，二甲双胍组（剂量为 130 mg/kg），血脂康组（剂量为 200 mg/kg），知母提取物高、低剂量组（剂量分别为 360、
90 mg/kg），黄柏提取物高、低剂量组（剂量分别为 135、45 mg/kg），给药 24周。分别在给药 8周、16周、24周时，测定血
浆葡萄糖（GLU）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、胰岛素（INS）水平；给药 10周时，进行葡
萄糖糖耐量试验（OGTT）；给药 24周时检测血浆核因子-κB（NF-κB）活性和转化生长因子 β1（TGF-β1）、超氧化物歧化酶
（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）水平。【 结果】注射 STZ 5周后，与正常组比较，模型组体质量先升高后明显下降，而空腹血糖
显著升高（P<0.05）。与正常组比较，模型组小鼠 FBG、TC、TG、LDL-C、INS水平均显著性升高（P<0.01或 P<0.001）；血浆
NF-κB活性、TGF-β1及 SOD水平显著升高，GSH水平显著下降，差异均有统计学意义（P<0.01或 P<0.001）；与模型组比
较，知母提取物高、低剂量组，黄柏提取物高、低剂量组小鼠的 FBG、TC、TG、LDL-C、INS水平均有不同程度降低；经
连续给药后，知母提取物高剂量组、黄柏提取物高剂量组小鼠血浆中 NF-κB活性，TGF-β1及 SOD 水平均显著降低（P<
0.05或 P<0.001），血浆 GSH 水平显著升高（P<0.01）。【 结论】 知柏药对原料的提取物降糖效果明显，对糖尿病模型小鼠的糖
尿病周围神经病变具有明显的保护作用。
关键词： 知母提取物/药理学；黄柏提取物/药理学；2型糖尿病/中药疗法；中药配伍；周围神经病变；疾病模型，动物；
小鼠
中图分类号： R285.5 文献标志码： A 文章编号： 1007-3213（2016）01 - 0103 - 07
DOI： 10． 13359/j． cnki． gzxbtcm． 2016． 01． 025
Pharmacodynamics Study of Extract from Raw Material of Rhizoma
Anemarrhenae and Cortex Phellodendri for Treatment of
Mice with Diabetic Peripheral Neuropathy
LIU Jing， LI Yan， XIN Yongtao， GAO Ying， ZHOU Xinxin， LI Weimin
（School of Chinese Herbal Medicine，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006 Guangdong，China）
Abstract：Objective To explore the pharmacodynamic action of the extract from raw materials of Rhizoma
广州中医药大学学报
Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine
2016 年 1 月第 33 卷第 1 期
January 2016，Vol. 33，No. 1 103
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