全 文 ：质量分析研究
RP-HPLC 法测定肝毒净颗粒剂中岩白菜素的含量
潘　扬　王天山　马国祥　郭立玮
(南京中医药大学 , 南京 210029)
　　提要:采用 RP-HPLC 法测定肝毒净颗粒剂中岩白菜素的含量。固定相为 Spherisorb-C18柱 (10 μm ,
4.6×250 mm), 流动相为甲醇-水 (20:80), 检测波长为 275 nm。岩白菜素的平均加样回收率为 99.27%。
主题词:@肝毒净颗粒剂/化学　岩白菜素/分析　高效液相色谱法
　　肝毒净颗粒剂是根据著名中医学家周仲
瑛教授经验方 , 经提取 、 纯化 、 喷雾干燥等
现代工艺制成的颗粒剂 (冲剂), 现已通过国
家卫生部三类中药新药的评审 , 并完成了 Ⅱ
期临床验证的工作。本品具有清化湿热瘀毒
的功效 , 用于治疗慢性乙型病毒性肝炎的湿
热证。矮地茶为方中君药之一 , 其主要成分
为岩白菜素。关于岩白菜素的定量分析方法 ,
已报道有薄层扫描法[ 1] 、 高效液相法[ 2] 等 ,
我们选择了灵敏 、 专属的高效液相色谱法 ,
用以测定肝毒净颗粒剂中岩白菜素的含量。
1　仪器和材料
HPLC 仪 ,包括 Waters 510 泵 、U6K 进样
器 、486 可调节紫外检测仪(美国 Waters 公
司);CY-100 超远高级色谱工作站(北京超远
电子技术研究所);Libror AEL-40SM 十万分
之一称量天平(日本 Shimadzu 公司);H66025
超声清洗机(无锡市超声电子设备厂)。
甲醇 (分析纯 , 上海振兴化工厂);水
(重蒸馏 , 临用前配制)。
岩白菜素对照品光谱纯 , 经 UV 、IR 、
NMR 、MS 等确定其结构 ,经归一化法 HPLC
定量其纯度为 100%(杭州胡庆余堂制药厂);
矮地茶对照药材 ,经鉴定为紫金牛科植物紫金
牛 Ardisia japonica (Thunb.)Bl.的干燥全株
(南京药业股份有限公司);肝毒净颗粒剂阴性
对照品 ,全方去除药材矮地茶配制(本校中医
药研究院);3 批成药样品 , 批号分别为
940312 、940315 、940318(本校中医药研究院)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件的选择　固定相为 Spherisorb
C18柱 , 4.6×250 mm , 10μm (中科院大连化
学物理研究所);流动相为甲醇 -水 (20:
80);检测波长为 275 nm;流量为 1.0ml/
min;理论塔板数按岩白菜素峰计算应不低于
3000 , 此条件下岩白菜素与相邻组分达到基
线分离 (图 1 A)。另取肝毒净颗粒剂阴性对
照品 , 按照样品测定方法的条件进行试验 ,
供试品色谱中 , 在岩白菜素对照品相应位置 ,
无干扰峰 (成分)出现 (图 1 B)。
A　　　　　　　　　　　　　B　　
A 肝毒净　　　　　　　　　B阴性对照品
图 1　肝毒净颗粒剂的 HPLC 图
2.2　提取条件的选择 　取肝毒净颗粒剂约
0.2g , 精密称重 , 置具塞离心管内 , 加 5 ml
甲醇超声提取 20 min , 离心分离 (3000 r/
·172· 中药新药与临床药理 1998年 9月第 9卷第 3期
min)5 min ,倾上清液 , 过滤 。同上操作共 4
次 , 每次滤液均定容至 10 ml , 吸取 10 μl 注
入 HPLC仪 , 测定岩白菜素峰面积值(mv·s),
计算每次提取率 , 结果见表 1。
表 1　样品中岩白菜素的提取率
提取次数 进样量(μl) 峰面积值(mv·s) 提取率(%)
1 10 378919 84.96
2 10 67059 15.04
3 20 — 0.00
4 20 — 0.00
5 20 — 0.00
4次提取率总和(%) 100.00
2.3　线性关系的考察　精密称取岩白菜素
对照品 (60℃干燥 8 h)6.50mg , 用甲醇溶解
并定容至 10 m l ,作为储备液 (浓度为 0.65g/
L)。精密吸取上述溶液 100 μl ,稀释并定容至
5 ml ,作为对照品溶液 (浓度为 0.013g/L)。
精密吸取对照品溶液 2 μl 、4 μl 、6 μl、8μl 、
10μl 、12 μl ,注入 HPLC 仪 , 测定 , 以岩白菜
素量 X (μg)为横坐标 、峰面积值 Y (mv·s)
为纵坐标进行线性回归 , 结果见表 2 。
表 2　岩白菜素线性关系的考察
进样体积(μl) 进样量(μg) 峰面积值(mv·s)
2 0.026 34411
4 0.052 56988
6 0.078 80296
8 0.104 106253
10 0.130 129056
12 0.156 147785
回归方程 Y =11562+889045 X
相关系数 r=0.9992
线性范围(μg) 0.026～ 0.156
2.4　精密度和稳定性试验　精密吸取上述
对照品溶液 6 μl , 分别于 0 h 、 0.5h 、 1.5h 、
3 h 、 5 h和 30 h 时进样 (共 6次), 测定 , 计
算 , 结果见表 3。
表 3　岩白菜素的精密度和稳定性试验
次数 时间(h) 峰面积值(mv·s) RSD(%)
1 0 80296
2 0.5 81351
3 1.5 81462 1.13
4 3 81480
5 5 80538
6 30 79540
2.5　回收率试验　采用加样回收法。分取
肝毒净颗粒剂样品 (批号 940318)7 份 , 每
份约0.15 g ,精密称重 , 其中的 6 份各加入岩
白菜素对照品储备液 (0.65g/L)1.0 ml;余
下的 1 份不加 , 按上述方法提取并定容成
50 ml ,测定 , 计算 , 结果见表 4。
表 4　岩白菜素的加样回收率试验(n=6)
序号 样品中量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
1 0.635 0.65 1.291 101.92
2 0.497 0.65 1.148 100.15
3 0.552 0.65 1.185 97.38 99.27 1.63
4 0.589 0.65 1.221 97.23
5 0.490 0.65 1.136 99.38
6 0.626 0.65 1.273 99.54
2.6　样品的测定　取供试品约 0.2 g (药材
矮地茶干燥后粉碎 , 过 40 目筛), 精密称重 ,
置具塞离心管内 , 加 5 ml 甲醇超声提取
20 min ,离心 (3000 r/min)5 min , 倾取上清
液 , 过滤。重复上述操作共 3 次 , 合并滤液 ,
滤纸及残渣用甲醇洗涤 , 洗涤液过滤 , 并入
上液 , 定容成 25 ml;用微孔滤膜过滤 , 弃去
初滤液约 3 ml ,取续滤液 5 ml ,作为供试品溶
液 。吸取上液 8μl ,注入 HPLC 仪 , 测定 , 以
二点外标法计算样品中岩白菜素的含量 , 结
果见表 5。
·173·中药新药与临床药理 1998年 9月第 9卷第 3期
表 5　样品岩白菜素的含量测定 (n=3)
供试品 岩白菜素含量(mg/ g) RSD(%)
药材(矮地茶) 6.75 0.83
制剂(批号 940312) 3.41 1.38
制剂(批号 940315) 3.48 1.31
制剂(批号 940318) 3.48 0.50
制剂中含量范围(mg/ g) 3.46±0.04(3.42～ 3.50)＊
　注:＊制剂每克含药材 0.8g , 在本工艺流程中 , 岩白菜素
的转化率约为 64.07%。
3　讨论
3.1　从实验结果可以看出 , 肝毒净颗粒剂
中岩白菜素含量为 3.42 ～ 3.50 mg/g 。有鉴于
样品批次积累较少 , 故暂定本品含岩白菜素
(C14H16O9)每克不得低于 3.0 mg 。
3.2　岩白菜素溶于水 、 甲醇[ 3] , 制剂工艺
采用的是水煎煮法 , 为减少干扰 , 我们采用
甲醇作为提取溶媒 , 并运用超声方法进行提
取 , 既节约时间又不会破坏有效成分 。
3.3　试验中曾使用水-乙腈 (25:75)、水
-甲醇 (60:40)等流动相进行分离 , 但均
不佳 。另外 , 我们也曾以文献[ 2] 中所用的
254 nm 作为检测波长 , 由于对照品峰位置周
围有吸收峰出现干扰 , 从而选择岩白菜素的
另一吸收峰 275 nm 作为测定波长来消除这一
现象。
参　考　文　献
1　刘伟华.薄层扫描法测定矮地茶中岩白菜素的含量.中
国中药杂志.1991;16 (2):102
2　谢旭一 , 何云珍.复方抗结核片中岩白菜素含量的高效
液相法测定.中成药 1989;11 (5):14
3　Martha Windholz.The Merck Index , 9th.edit ion , M ERCK
&CO., INC./U.S.A., 1976:1184
(收稿日期:1998-04-17)
HPLC 法测定黄草乌中滇乌碱含量的研究
金永清　韦建荣＊　张雯洁
(云南省药品检验所 , 昆明 650011)
提要:用 HPLC 法测定黄草乌中滇乌碱的含量。色谱条件:采用氰基硅烷键合硅胶为填充剂装柱;流动
相:甲醇-水-氨水 (35:65:0.5);检测波长:260 nm , 在此检测条件下 , 滇乌碱与其相邻峰能达到基线分
离;滇乌碱的检测线性范围2.6～ 15.6 μg ,相关系数 r=0.9999;平均回收率97.6% (n=5)。
主题词:@黄草乌/化学　@滇乌碱/分析　高效液相色谱法
　　毛茛科植物黄草乌 Aconitum vilmorri-
anum Kom.的块根在云南民间常用作镇痛药 ,
主要含有滇乌碱 (yunaconit ine)等生物碱成
分[ 1 ～ 2] 。药理学研究表明 , 滇乌碱的毒性极
高 , 具有较强的镇痛 、 抗炎和解热作用[ 3] 。
目前有关乌头类生物碱的 HPLC 法含量测定
的报道颇多[ 4] , 但对黄草乌中滇乌碱的含量
测定方法 , 尚未见文献报道 。采用 HPLC 法
对黄草乌中滇乌碱含量测定方法进行了系统
研究和方法学考察 , 现报道于下。
1　实验部分
1.1　仪器与试药
Waters 公司高效液相色谱仪 , 510 泵 ,
PDA996检测器 , 717自动进样器 , 2010色谱
管理系统。
对照品滇乌碱由中科院昆明植物研究所
提供 , 经 HPLC 法测定其纯度在 99.9%以
上 。样品黄草乌药材分别购自昆明市药材公
司下属若干药店 , 经鉴定系毛茛科植物黄草
乌 Aconitum vilmo rrianum Kom.的干燥块根。
试剂:甲醇 、 氨水 、 无水乙醇 、 乙醚和
硫酸等 , 均为分析纯试剂。
＊作者单位:云南白药集团股份有限公司 , 昆明 650 000。
·174· 中药新药与临床药理 1998年 9月第 9卷第 3期
the amount of antibody forming cells (AFC)increased obviously.when the dose was 3.3g/kg ,
phagocytosis percentage and phapocytosis index of celiec macrophages increased by 98.42% and
100% respectively;the content of serum ly sozymes increased by 81.07%;the Y igan Tablet at level
of 0.25 ～ 1g/ml inhibited obviously on HbsAg in vi tro.
KEYWORDS:@ Y igan Tablet/ pharmacology;
hepatitis B/ TCD Therapy
(o riginal article on page 168)
Pharmacological effeccts of Baoyexuelian Oral Liquid
Tian Shuqin , Zhang Qi , Liu Shuhuang , et al.
(Department of Animal Science and Veterinary Medicine ,
Southwest Nationalities College , Chengdu 610041)
ABSTRACT:Baoyexuelian oral liquid (BOL)is a T ibetan patent drug fo r manicdepressive phy-
chosis and apoplexy.It inhibited the thrombosis in vitro significanlty(P<0.001) and decreaced the
blood viscosity and reduced the convulsion induced by st rychine and st reng thened the depression of
pentobarbital sodium on central nervous sy stem , w ith no somnolentia.
KEYWORDS:@ Baoyexuelian/pharmacology;thrombosis/drug effect;
blood viscosi ty/drug ef fect
(o riginal article on page 170)
The assay of Berginin Gandujing Granule by RP_HPLC
Pan Yang , Wang Tianshan , Ma Guoxiang , et al.
(Institute of Traditional Chinese Medicine and Pharmacology , Nanjing University of
Traditional Chinese Medicine , Nanjing 210029)
ABSTRACT:The RP_HPLC assay of Berginin in Ganduj ing Granule w ith Spherisorb _C18 column
(10μm , 4.6×250mm), mobile phase w as MeOH_H2O (2∶8), detecting w avelength was 275nm .
The average recovery of Berginin w as 99.27%in this study.
KEYWORDS:@Ganduj ing Grannule/chemistry ;Berginin/analy sis;HPLC
(o riginal article on page 172)
TheHPLC assay of Yunaconitine in Aconitum vilmornianum kom.
Jin Yongqing , Wei Jianrong , Zhang Wenjie , et al.
(Yunnan Institute for Drug Control , Kuming 650011)
ABSTRACT:The assay of Yunaconitine in Aconitum vilmo rinianum kom.with bonded cyano_silica
column , mobile phase was MeOH-H2O-NH3·H2O (35∶65∶0.5), detcting w aveleng th w as 260
nm;the baseline resolution of Yunaconitine w as obtained.Its linear range w as 2.6 ～ 15.6μg;related
coefficient was 0.9999;the average recovery w as 97.6%(n=5).
KEYWORDS:@Aconitum vilmorinianum kom./ chemist ry;
@ Yunaconitine/ analysis , HPLC
(o riginal article on page 174)
·192· 中药新药与临床药理 1998年 9月第 9卷第 3期