全 文 ：第 37卷 第 2期
2011 年 6 月 延边大学学报(自然科学版)Journal of Yanbian Unive rsity(Natural Science) Vol.37 No.2June 2011
收稿日期:2011-05-04　　　　　基金项目:国家自然科学基金项目资助(20775091)
＊通信作者:再帕尔·阿不力孜(1961—), 男 ,博士 , 研究员 ,研究方向为质谱分析.
文章编号:1004-4353(2011)02-095-08
小蜡树提取物多组分的同步结构分析方法研究
贺玖明 , 　刘影 , 　刘明韬 , 　张瑞萍 , 　石建功 , 　再帕尔·阿不力孜＊
(中国医学科学院/北京协和医学院 药物研究所 天然药物活性物质与功能国家重点实验室 , 北京 100050)
摘要:以小蜡树乙醇提取物为研究对象 , 基于不完全分离分析的策略 , 采用 Sephadex LH-20 凝胶柱色谱分离
手段 ,获取了含量呈连续动态变化的系列混合物;运用 NMR/ LC-MS 平行动态谱方法 , 对系列混合物中含有
氢醌苷及苯乙醇苷类化合物的成分进行了快速结构分析.在小蜡树提取物 M-9 中 , 实现了 12 个成分无需完
全分离的同步结构鉴定 ,其中 4 个成分为首次在本属植物中发现.本研究进一步拓宽了 NM R/ LC-MS PDS 新
型分析方法的应用范围.
关键词:NMR/ LC-MS 平行动态谱;不完全分离分析;小蜡树;苯乙醇苷;氢醌苷
中图分类号:N55　　　　　文献标识码:A
Simultaneous Structural Identification of Constituents in
Extract of Fraxinus Sieboldiana Using NMR/LC-MS
Parallel Dynamic Spectroscopy
HE Jiu-ming , 　LIU Ying , 　LIU M ing-tao , 　ZHANG Rui-ping , 　SHI Jian-gong , 　A bliz Zeper＊
(S tate Key Laboratory of B ioactive Substances and F unctions of Natural Med icines , I nstitute of Materia Med ica ,
Chinese Academy o f Medical Sciences and Peking Union Medical College , Beij ing 100050 , China)
Abstract:Based on the incom plete separa tion analy sis str ategy , the ext ract of Frax inus sieboldiana was sepa-
rated into se ries of f ractions with the concent ration dynamic variation o f constituents by gel chr omatog raphy.
The LC-MS and 1H-NM R data of se ries of f ractions we re acquired and then pro cessed by Matlab to fo rm
NM R/ LC-MS PDS.The co rr elation rela tionship between ions(m/ z)and chemical shif t(δ)deriv ing f rom the
same mo lecule can be ex tracted simultaneously from the mix ture spectra.Combined w ith H PLC-MSn , 1H-1H
COSY , 1D o r 2D NOES Y spectra , tw elv e constituents including three hydroquinone g ly co side s , eight pheny le-
thanoid g ly co sides and one vanillic g lyco side we re identified successfully , in which four compounds we re f ound
from genus Frax inus fo r the fir st time.
Key words:NM R/ LC-MS pa rallel dynamic spect roscopy;incomplete separ ation stra teg y; simultaneous
structur al identification in mix ture;Forsythia suspensa ;pheny lethanoid g lyco sides
0　引言
从中草药中发现新颖结构的活性成分 ,将其
进一步开发成新药是推动中药现代化进程的重要
内容.中草药发挥药效作用的物质基础是结构复
杂 、化学多样性的天然产物组分群 ,但传统的分析
方法对其有效成分或活性分子群的发现率较低 ,
而且需要的样品量大 ,提取分离及其鉴定耗时费
力 ,还易导致微量活性或不稳定未知成分的丢
失[ 1-3] .近年来 ,随着各种联用技术的迅速发展 ,其
在复杂混合物体系分析中的作用也越来越重要.
高效液相色谱(HPLC)与质谱(MS)和核磁共振
延边大学学报(自然科学版) 第 37 卷　
谱(NMR)的联用技术 ,如 LC-MS/MS 、LC-NMR
及 LC-MS-NMR等融合了高效分离和丰富结构
信息获取的强大功能 ,实现了混合物复杂成分的
高效 、快速的分析鉴定[ 4-17] ,并且此类联用技术还
具有“先分离 、后分析”的特点.
针对复杂体系混合物的快速 、准确分析 ,本课
题组[ 18] 提出了无需完全分离分析的研究策略 ,建
立并发展了两种新型的谱学分析方法 ,即 NM R/
LC-MS 平行动态谱(NMR/LC-MS parallel dy-
namic spect ro scopy , NMR/ LC-MS PDS)和异相
关谱(NM R/LC-MS hetero-cor relation spect ros-
copy ,NMR/LC-MS HCS).该方法在不完全分离
研究策略的基础上 ,结合化学计量学方法对系列
混合物样品的 LC-MS 及 NMR谱数据进行整合
分析 , 从而发掘来自于同一成分的 LC-MS 及
NMR谱数据的内在相关性 ,简化了复杂药用植
物提取物的分离分析过程;在离线的情况下 ,通过
“数学联用的方式”获得了与 LC-MS-NMR联用
技术相似的分析结果 ,最终实现了多组分无需完
全分离且快速的分析鉴定 ,为复杂混合物中多组
分的高效 、快速结构分析提供了新的方法.目前 ,
该方法已成功地应用于新疆维吾尔民族药用植物
草棉活性提取物 、常用中药连翘提取物和珍惜濒
危药用植物福建金线莲中黄酮醇苷类 、苯乙醇苷
类和有机酸类等成分的分析中[ 18-21] .
本研究在前期研究的基础上 ,以编号为 M-9
的小蜡树乙醇提取物为研究对象 ,采用 Sephadex
LH-20凝胶柱色谱分离手段 ,基于不完全分离分
析的策略获取含量呈连续动态变化的系列混合
物 ,然后运用 NMR/LC-MS PDS 方法 ,对系列混
合物中含有氢醌苷及苯乙醇苷类化合物的成分进
行了分析鉴定.
1　实验部分
1.1　仪器和试剂
仪器有:Agilent 1100 系列高效液相色谱仪
(Agilent Technolo gies , Waldbronn , Germany);
美国 AB公司Q T RA PTM型四极杆-线性离子阱串
联质谱仪 ,配有电喷雾离子源(ESI)及 Analy st 1.
4.2 数据处理系统;美国 Varian 公司 INOVA-
600型核磁共振仪.试剂有:甲醇(色谱纯 ,Merk ,
德国);甲醇(色谱纯 ,天津永大化学试剂开发中
心);水(娃哈哈纯净水);氘代二甲基亚砜 , 含
0.03%(体积比)的四甲基硅烷(Cambridge Iso-
to pe Labo rato ries , Inc.).
1.2　样品及其浓度呈连续动态变化的系列混合
物的制备
编号为 M-9 的小蜡树提取物由中国医学科
学院药物研究所石建功研究员的课题组提供.制
备步骤为:小蜡树茎枝乙醇提取物经大孔树脂分
离获得水洗脱部分 ,再经硅胶柱层析梯度洗脱得
到流份;称取 0.7 g 提取物 M-9 ,加入 10%甲醇适
量将其溶解 ,上样至 Sephadex LH-20凝胶柱;以
甲醇/水(体积比为 10∶90)为洗脱液进行洗脱 ,
从有颜色的流份开始收集 ,以每 10 mL 为一管收
集并编号 ,共获得 40个流份 ,备用.
1.3　测试条件
色谱条件:Ex tend-C18(4.6×250 mm , 5μm ,
Agilent , USA)色谱柱;以水和乙腈为流动相进行
梯度洗脱 , 在 0 ～ 20 min 内 ,乙腈的比例从 7%增
加到 10%;流速为 0.7 mL/min;柱后 3∶1分流
(1/4 进入质谱仪);紫外吸收检测波长为 190 ～
400 nm.
质谱条件:负离子检测方式(喷雾电压为-
4.5 kV);DP 电压(- 70 V);EP 电压(-10 V);
源温度为 375 ℃;GS1(雾化气)为 65 arb;GS2
(干燥气)为 50 arb;碰撞能量(CE)为-15 ～ -30
eV;扫描均选用线性离子阱(LIT)模式 ,速度为
1 000 Da / s;各种气路均为氮气.
1H-NMR谱测定条件:操作温度为 298 K;采
用 z梯度三共振探头;操作软件为 Varian Vnmr
6.0 C sof tw are;1H-NMR谱测定的谱宽为-1 ～
14 ppm (9 615 Hz);弛豫时间为 20 s;采样时间为
8.82 min;采样次数为 24次;采样数据点为 64 K
(65 536个数据点);1D TOCSY谱混合时间为 120
ms;1H-1H COSY谱弛豫时间为 1.3 s;NOESY 实
验的预饱和时间为 1.6 s ,混合时间为 800ms.
1.4　LC-MSn 及1H-NMR谱的测定
LC-UV-MS 及 LC-MSn 谱的测定:取上述经
凝胶色谱分离获得的系列混合物流份 ,从每个流
份中取出 0.5 mL 的溶液 ,经微孔滤膜过滤后进
行 LC-MSn 谱分析 ,进样量为 10μL.
96
　第 2 期 贺玖明 , 等:小蜡树提取物多组分的同步结构分析方法研究
1H-NMR谱的测定:LC-UV-MS谱的分析结
果表明 ,提取物 M-9中的组分主要分布在 15 ～ 35
号系列流份中.依据该分析结果 ,选取其中的 18
个流份 ,分别经旋转蒸发除去溶剂后 ,用适量甲醇
溶液转移到 5 mm 的 NM R谱用测试管中 ,用氮
气吹干 ,然后加入 0.5 mL 氘代二甲基亚砜(DM-
SO-d6)溶解 ,进行1H-NMR谱测定.
1.5　原始数据处理
数据处理参照文献[ 18-20]进行.
2　结果与讨论
2.1　提取物M-9的 LC-UV-MS谱分析
图 1　a.提取物 M-9的 UV 190～ 400 nm 检测 HPLC谱;b.由提取物 M-9中相关成分的[ M-H] -离子获得
的提取离子色谱图
　　图 1a为提取物 M-9的 UV 190 ～ 400 nm 检
测 HPLC谱.从图中可以看出 ,该混合物所含组
分较为复杂 ,各成分之间的相对含量差异较大 ,并
且含有一些微量成分.考察这些组分的紫外吸收
光谱发现 ,其最大紫外吸收峰位于 200 ～ 220 nm
之间 ,表现出苯环的结构特征.系列流份的 LC-
MS 谱分析结果表明 ,提取物 M-9中主要有 12个
成分 ,按照这些成分在凝胶色谱柱上洗脱的顺序 ,
将各成分编号为 C1 —C12.从提取物 M-9 的总离
子流色谱图中提取各成分的[ M-H] -离子 ,得到
提取物M-9的提取离子色谱图(见图 1b),从图中
可以清楚地看到一组[ M-H ] -离子为 m/z 315的
同分异构体.此外 , 由于各成分间的极性比较接
近 ,即使在优化的 HPLC 谱分离条件下 ,色谱峰
的重叠仍然比较严重 ,这表明在常规分离条件下
难以制备得到单体的化合物 ,因此 ,本研究采用
NMR/LC-MS PDS 方法力求解决这类复杂体系
组分群的同步结构鉴定.
2.2　各成分在系列混合物流份中的分布情况
分别取上述 12个成分在系列流份中的紫外
吸收峰强度值 ,然后通过绘制折线图得到各成分
在系列流份中的分布曲线 ,如图 2 所示(因成分
C6的含量很高 ,为了清楚地显示其他成分的分布
情况 ,该图中不包括成分 C6的变化趋势).从图
中可以看出 ,通过凝胶色谱柱的分离 ,这些成分被
洗脱到不同的流份中 ,同时每个成分的含量在系
列流份中呈动态变化 ,且成分间互相重叠 ,它们按
不同的组成和含量比例构成了一系列不完全分离
的混合物样品.这表明 ,凝胶色谱柱具有和闪式快
速分离系统[ 18] 、制备型液相色谱[ 19] 相似的功能 ,
它同样可以将复杂的粗提物制成组分含量呈动态
变化的系列混合物流份.此外 ,凝胶色谱柱还具有
上样量少 、样品不易被吸附等优点 ,适合于分离制
备少量的样品及结构中含酚羟基的组分.
图 2　提取物M-9 中 12个成分在系列流份中
的强度(UV检测峰面积)分布曲线
2.3　NMR/LC-MS PDS谱的构成
对提取物 M-9的 18 个(15 , 17-31 , 33 和 35
97
延边大学学报(自然科学版) 第 37 卷　
号)系列混 合物 流份分 别进行 LC-MS 和
1H-NMR谱测定 , 然后采用 NM R/LC-MS PDS
方法的数据处理程序 , 将系列混合物样品中
[ M-H] -离子的 选择离子色 谱图(XIC)与
1H-NMR谱构成 NMR/LC-MS PDS 平行动态
谱 ,如图 3 所示.在 NMR/LC-MS PDS 谱中 ,横
轴为化学信息轴 ,包括选择离子色谱图(XIC)的
保留时间和1H-NMR 谱的化学位移值(δ);纵轴
为样品轴(共 18个样品),组分的谱学信号沿着这
个轴呈现出动态的强度变化趋势.此外 ,不同质荷
比(m/z)的 XIC图用不同颜色的谱线显示 ,有助
于快速识别混合物中存在的同分异构体及区分共
流出的组分.例如 ,m/z 315离子分别有 3个信号
峰出现在保留时间 6.65 ,7.48和 8.05 min处 ,这
清楚地表明在混合物样品中含有 3个相对分子质
量为 316 Da的同分异构体.
图 3　提取物 M-9 经凝胶色谱获取其系列流份的 NMR/ LC-MS PDS谱
2.4　提取物M-9中各成分的综合结构解析
成分信号强度的动态变化与含量变化呈正
比 ,即来自于同一成分的谱学信号会在系列混合
物样品中随同变化 ,表现为具有相同的成分分布
范围和强度变化趋势[ 18-21] .根据这一原理 ,混合物
中属于同一成分的 MS 与1H-NMR 谱信号就会
被相关及归属.本文以 C1的结构解析为例 ,说明
应用 NMR/LC-MS PDS 方法开展混合物中组分
群的同步结构鉴定过程.
从 NMR/LC-MS PDS 谱(图 3)左侧的 LC-
MS 信息中可以看出 ,保留时间为 5.69 min , m/z
433.2 [ M-H] -离子的成分 C1分布在 15 ～ 19号
流份范围内;在右侧与之对应的1H-NMR 谱中 ,
也可以看到几组具有相似强度变化趋势的化学位
移值 ,见图 4.其中包括 δ4.25和δ4.68 处双峰 ,
芳香区 δ6.5 ～ 6.7 范围内的一组芳香族质子信
号.
图 4　提取物 M-9 系列流份的 NMR/ LC-MS PDS谱部分放大图
98
　第 2 期 贺玖明 , 等:小蜡树提取物多组分的同步结构分析方法研究
　　高场区显示 C1两个糖的端基质子信号为δ
4.68(1H , d , J =7.2 Hz)和 δ4.25 (1H , d ,
J =7.8 Hz ,),结合它们的偶合常数可推断其为
葡萄糖和木糖;在低场区可观察到与 C1相关的
一组芳香环上的ABX系统质子信号 ,包括δ6.70
(d , J =1.8 Hz , H-2), δ6.65(d , J =7.8 Hz ,
H-5)和δ6.55(d , J =7.8 , 1.8 Hz , H-6).另
外 ,在高场区可观察到一个与芳香环相连的甲氧
基质子信号δ3.77 (3H , s).根据以上分析及归
属 ,可推断出该结构中存在葡萄糖 、木糖和苷元
2-methoxybenzene-1 4-diol.图 5 为成分 C1 的
[ M-H] -离子(m/z 433)的 MS2 谱.由图 5可知 ,
m/z 433离子主要丢失了 140 Da而产生 m/z 293
离子 ,同时还观察到了 m/z 233 , m/z 215 及 m/z
191等子离子 ,这表明[ M-H ] -离子并不发生常
规的丢失糖基裂解 ,而是生成糖链交叉环切除反
应的产物离子.综合上述归属的1H-NMR 和
[ MH] -离子的裂解行为 ,可以确认 C1 为氢醌苷
类化合物 ,且为氢醌 O-双糖苷类化合物.因此 ,在
相同的 HPLC-MS/MS 谱条件下分析 4-hydro xy-
3-methoxypheny l-β-D-xylopy rano syl(1※6)-O-β-
D-g lucopyranoside ,发现其保留时间与成分C1相
同 ,且 MS2 谱中各离子的相对强度及峰型基本
一致.
图 5　成分 C1 的[ M-H] -离子(m/ z 433)的MS2 谱
　　其他成分的信息挖掘及结构解析如下:如图
3所示 ,在 NMR/LC-MS PDS 谱中可以观察到 ,
成分 C2的分布范围为 17 ～ 20号流份 ,与成分 C3
的分布范围(17 ～ 22号流份)相似 ,并发现δ2.72
附近有一组多重峰专属于成分 C3 ,而 δ4.92处
的糖端基质子信号专属于成分 C2.成分 C4 , C5
和 C6有着相同的色谱峰颜色以及质荷比(m/z
315),表明这 3个成分是一组同分异构体 ,其相对
分子质量为 316 Da ,其中成分 C4和 C5的保留时
间分别为 6.95 min 和 8.04 min.成分 C6可以清
晰地观察到一组保留时间为 7.48 min的色谱峰 ,
且分布在 22 ～ 29号流份范围内;在右侧与之对应
的1H-NMR谱中 ,也可以观察到几组具有相似变
化趋势的化学位移值 , 其中包括 δ4.23 处的双
峰 , δ2.73 , 3.65和 3.96处的多重峰 ,以及芳香区
δ6.5 ～ 6.7范围内的一组芳香质子信号.成分 C7
和 C8 有着相同的色谱峰颜色及质荷比(m/z
331),它们是一组同分异构体 ,其分子量为 332
Da ,二者的保留时间分别为 6.65 min 和 5.54
min.在 NMR/ LC-MS PDS谱右侧的1H-NMR谱
中(见图 3),也可以观察到几组与成分 C7和 C8
具有相似强度变化趋势的化学位移值 ,其中包括
属于成分 C7的δ6.48和 3.75处的单峰 , δ4.69
处的双峰;属于成分 C8的δ6.07和 3.72处的单
峰 , δ4.61 处的双峰.成分 C9 的保留时间为
11.70 min , 且 [ M-H ] -离子为 m/z 299.2;在
NMR/LC-MS PDS 谱右侧的1H-NMR谱中可以
确定 δ4.46 处的糖端基氢质子信号 、芳香区
δ7.01和 6.63处双峰的芳香质子信号等一组谱
学信号与其相关.成分 C10相关的信号可以确定
为:保留时间在 2.96 min 处的[ M-H] -离子为
m/z 329.2 ,δ3.84 处的单峰 、δ4.96处的糖端基
氢质子信号和芳香区δ7.1 ～ 7.6范围内的芳香
质子信号.保留时间在 8.06 min 的[ M-H] -离子
m/z 313.2 ,与之对应的 δ3.88 ,3.60 , 4.47处的
双二重峰 ,δ4.37处的糖端基氢质子信号和芳香
区δ6.5 ～ 6.8 范围内的芳香质子信号等一组谱
学信号来自于成分 C11.C12的[ M-H] -离子为
m/z 313 ,其保留时间为 6.56 min ,由于该成分的
含量很低 , 通过观察放大的 NMR/LC-MS PDS
谱 ,发现在相应流份的1H-NMR谱中可找到几组
与上述[ M-H] -离子强度具有相似变化趋势的化
学位移值 , 其中包括 δ4.39 处的双峰 ,芳香区
δ6.5 ～ 7.0范围内的一组芳香质子信号 , δ4.64 ,
4.43处的双峰及δ4.09处的双二重峰等相关性
信息.
通过上述 NMR/LC-MS PDS 谱分析 , 同时
99
延边大学学报(自然科学版) 第 37 卷　
实现了混合物谱中 12个成分的保留时间 、分子离
子 、取代糖端基氢的化学位移及耦合裂分 、苷元部
分关键氢的化学位移及峰型等关键结构信息的相
关和归属.在上述已归属的信息引导下 ,进一步结
合 LC-MS/MS 、1H-1H COSY 、2D NOESY 谱以
及组分间1H 峰的积分比例 ,实现了混合物中 12
个成分无需完全分离的同步结构鉴定.上述 12个
成分中 ,包括 3个氢醌苷类化合物 , 8个苯乙醇苷
类化合物和 1 个香草酸苷类化合物 ,其中成分
C5 ,C10 ,C11和 C12为首次从本属植物中发现 ,
各成分的 LC-MS 和1H-NMR 谱数据及结构见
表 1.
表 1　小腊树提取物M-9 中 12个成分的 LC-MS和1H-NMR谱数据及其结构式
成分 Rt/ min [ M-H]
-
/(m/ z)
MW
/ Da
1H-NM R 数据(δ, ppm;J ,H z) 结构式
C1:4-hydroxy-3-me-
tho xyphenyl β-D-
xy lopy rano sy l (1※6)-O-β-D-g luco-
py ranoside
5.69 433 434
H2 6.70 (1H , d , J =1.8);
H5 6.65 (1H , d , J =7.8);
H6 6.55 (1H , dd , J =7.8 ,
1.8);CH3O 3.77 (3H , s)
Clc-1 4.68(1H , d , J=7.2);
Xy l-1 4.25(1H , d , J=7.8)
C2:Osmanthuside H 15.4 431 432
H2 6.70 (1H , d , J =1.8);
H5 6.64 (1H , d , J =7.8);
H6 6.53 (1H , dd , J =7.8 ,
1.8);Clc-1 4.65 (1H , d ,
J =7.2);Api-1 4.92 (1H ,
d , J =2.4)
C3:2-(3 ,4-dihydro-
xyphenyl)ethanol 1-
O-β-D-apiofuranosyl-(1※6)- β-D-gluco-
py ranoside
9.11 447 448
H2 6.63 (1H , d , J =1.8);
H5 6.61 (1H , d , J =7.8);
H6 6.50 (1H , dd , J =7.8 ,
1.8);H7 2.72 (2H , m);
H8a (1H , m);H8b (1H ,
m);Clc-1 4.21(1H , d , J =
7.8);Api-1 4.95 (1H , d ,
J =2.4)
C4:2-hydroxy-4-(2-
hydroxyethyl)-phen-
yl β-D-glucopyrano-
side
6.95 315 316
H2 6.67 (1H , d , J =1.8);
H5 7.04 (1H , d , J =7.8);
H6 6.59 (1H , dd , J =7.8 ,
1.8);H7 2.71(2H , m);H 8
3.48 (2H , m);Clc-1 4.64(1H , d , J =7.2);
C5 ＊:1-hydroxy-4(2-hydroxyethy l)-
phenyl-β-D-gluco-
py ranoside
8.04 315 316
H2 7.02 (1H , d , J =1.8);
H5 6.70 (1H , d , J =7.8);
H6 6.71 (1H , dd , J =7.8 ,
1.8);H7 2.80(2H , m);H 8
3.65 (2H , m);Clc-1 4.70(1H , d , J =7.2);
C6:2-(3 , 4-dihydr-
oxypheny l) ethy lβ-D-glucopy rano-
side
7.48 315 316
H2 6.62 (1H , d , J =1.8);
H5 6.61(1H , d , J =7.8);
H6 6.49 (1H , dd , J =7.8 ,
1.8);H7 2.72 (2H , m);
H8a 3.62 (1H , m);H8b 3.
95 (1H , m);Clc-1 4.23(1H , d , J =7.2);
C7:1 , 4-dimeth-
oxy-p-hydroqui-
none-6-O-β-D-glu-
copy ranoside
6.65 331 332
H2 , 6 6.45 (2H , s);CH 3O
3.75 (6H , s);Clc-1 4.70(1H , d , J =7.2)
100
　第 2 期 贺玖明 , 等:小蜡树提取物多组分的同步结构分析方法研究
　　续表 1
C8:2 , 6-dimeth-
oxy-p-hydroqui-
none-4-O-β-D-glu-
copy ranoside
5.54 331 332 H2 , 6 6.07 (2H , s);CH 3O3.72 (6H , s);Clc-1 4.61(1H , d , J =7.2)
C9:2-(4-hydro xy-
pheny l)ethyl β-D-
glucopy ranoside
11.70 299 300
H2 , 6 7.01(2H , d , J=8.4);
H3 , 5 6.63(2H , d , J=8.4);
H7 and H8 are ove rlapped
w ith the signal of C6;Clc-1
4.46(1H , d , J =7.2);
C10＊:Vanillic acid
4-O-β-D-g lucoside
(3-methoxy 4-o lu-
co sy lbenzoic acid)
2.98 329 330
H2 7.56 (1H , d , J =1.8);
H5 7.15 (1H , d , J =7.8);
H6 7.58 (1H , dd , J =7.8 ,
1.8);CH3O 3.84 (3H , s);
Clc-1 4.96(1H , d , J=7.8);
C11＊:7β-(3 , 4-di-
hydroxypheny l )-
ethane 7 , 8-(2′, 1′-
O-β-D- glucopy rano-
sy l)-7 , 8-diol(Cu-
neataside A)
8.06 313 314
H2 6.78(1H , d , J =1.8);H5
6.65(1H , d , J=7.8);H6 6.66(1H , dd , J=7.8 , 1.8);H7 4.47(1H , dd , J =3.0 , 10.8);
H8a 3.60(1H , dd , J=10.8 ,
12.0);H 8β 3.60 (1H , dd , J=3.0 , 12.0);Clc-1 4.37(1H , d , J =7.2);Clc-1 3.11(1H , dd , J=7.8 , 9.6);
C12＊:7a-(3 , 4-di-
hydroxyphenyl)-eth-
ane 7 , 8-(2′, 1′-O-β-
D- glucopyranosyl)-
7 ,8-diol , (Cuneata-
side B)
6.56 313 314
H2 6.97(1H , d , J =1.8);
H5 6.84 (1H , d , J =7.8);
H6 6.69 (1H , dd , J =7.8 ,
1.8);H7 4.64 (1H , d , J =
4.2);H8a 4.43(1H , d , J=
112.6);H8β 4.09 (1H , dd ,
J =4.2 , 12.0);Clc-1 4.39(1H , d , J =7.2);
　　s 为单峰;d 为双峰;m 为多重峰;＊为首次从本属植物中发现
3　结论
根据混合物中组分的结构特点 ,选择合适的
凝胶色谱柱作为分离手段 ,可以制备组分交叉 、含
量呈连续动态变化的系列混合物流份 ,而且凝胶
色谱柱具有上样量少 ,样品不易被吸附等优点 ,适
合于分离制备少量样品及结构中含酚羟基的组
分.在利用 NMR/LC-MS PDS 谱解析成分的结
构时 ,对于样品分布范围及其含量变化趋势接近
的成分 ,可根据其成分相对应的流份范围 ,结合各
成分的紫外吸收及提取离子流的强度差异 ,以
及1H-NMR谱信号积分比例的差异 , 可以将
1
H-NMR谱信号进行归属 ,从而实现这类性质相
近成分的结构鉴定.
本文运用 NMR/ LC-MS PDS 新型谱学分析
方法 ,并结合 LC-MS/MS 、1H-1H COSY 、1D 及
2D NO ESY 谱等进行综合分析 ,实现了对小蜡树
提取物 M-9中 12个成分的同步结构鉴定 ,其中 4
个成分为首次从本属植物中发现.实验表明 ,本分
析方法可以简化复杂混合物的分离分析过程 ,实
现了多组分无需完全分离的快速结构鉴定.
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