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阿魏香豆素类对毛毕吸虫酶活性的影响



全 文 :2012.2 ShuiQin ShiJie
毛毕属(Trichobilharzia)吸虫为鸟类血吸虫,
其尾蚴可侵袭人体引起变态反应性皮炎, 该属
吸虫宿主较多, 家鸭是毛毕属吸虫主要的终宿
主之一 [1]。为了解阿魏香豆素类对家鸭毛毕吸虫
影响机理, 本试验采用测定毛毕吸虫同工酶的
技术方法, 观察了阿魏香豆素类对毛毕吸虫生
化酶系的影响, 尝试了阿魏香豆素类杀灭毛毕
吸虫作用的部分原理,以供参考。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 药物 阿魏香豆素类粉剂纯度 99%,按
资料 [2、3]提取法进行。 阿魏香豆素类粉剂用 1%
羧甲基纤维素钠溶液配成 3%阿魏香豆素类混
悬液,供家鸭灌服与饲喂。
1.1.2 动物 家鸭 5 只 ,平均体重 1.1kg,其中
服药组 4 只,不服药对照组 1 只,由沿江居住的
湖北荆州荆西村提供并饲药。
1.1.3 虫源 从湖北省荆州市长江大学西校
区附近沟渠阳性椎实螺中挑选并浮出毛毕吸虫
尾蚴。
1.2 方法
1.2.1 感染 固定家鸭 , 剪去腹部皮毛约 1×
1cm2,用无氯水湿润,将 100±1 条尾蚴置于载玻
片上, 覆盖于腹部去毛皮肤上,15min 后除去载
玻片。
1.2.2 给药 家鸭感染后第 7d 起开始灌服阿
魏香豆素类 300mg/kg·次,每周 1 次,共 4 次。对
照组不给药。
1.2.3 收集虫体 对家鸭行离体或在体肝静脉
逆行灌注收集肝内和门静脉内成虫; 同时对家
鸭灌注降主动脉,以收集肝内、门静脉内和肠系
膜静脉的成虫。 每组虫体的虫龄分别为 10、12、
17、19 和 20d, 虫体保存于 Tris 组织液中, 置-
60℃冰箱备用。
1.2.4 电泳 按 Davis 等(1981,1988 年)改良平
板淀粉胶电泳法 [5、6]进行。 电泳时间 : 酸性磷酸
酶为 1.5h,磷酸葡萄糖异构酶和 6-磷酸甘露糖
酶为 3.5h,苹果酸脱氢酶为 3.2h。
1.2.5 显色 电泳后,将每个电泳胶切成 5 个薄
片,置于塑料板上。 然后,按照不同酶的要求,在
相应的显色液 10ml 中加入 2% Agar l0ml,充分
混匀后倒干胶片上,37℃烘箱显色后立即观察。
2 结果
阿魏香豆素类
对毛毕吸虫酶活性的影响
桂冠,赵红梅 *
(长江大学动物科学学院,湖北 荆州 434025)
摘 要:毛毕属吸虫为鸟类血吸虫,家鸭是毛毕属吸虫主要的终宿主之一。为了解阿魏
香豆素类对家鸭毛毕吸虫影响机理,本试验采用测定毛毕吸虫同工酶的技术方法,以了解
阿魏香豆素类对毛毕吸虫生化酶系的影响。结果显示,该药对苹果酸脱氢酶、6-磷酸甘露糖
酶 I、酸性磷酸酶有明显抑制作用,对磷酸葡萄糖异构酶的活性影响不明显。
关键词:阿魏香豆素;毛毕吸虫;同工酶
中图分类号:S816.73 文献标识码:B 文章编号:1673-1085(2012)02-0041-02
收稿日期:2012-02-20
* 通讯作者:赵红梅(女)(1965),博士,教授。从事动物
药物学机理研究。
试验研究
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水禽世界 2012.2
4 种同工酶的电泳显色结果见图 1 所示 :
阿魏香豆素类对磷酸葡萄糖异构酶的活性抑制
不明显,在不同时间所取的 3 组虫体样本中,给
药组和对照组虫体均显示磷酸葡萄糖异构酶的
存在。 在 12d 龄的虫体样本中,给药组和对照组
虫体均可测出苹果酸脱氢酶,6-磷酸甘露糖酶
和酸性磷酸酶。 而在第 3 次灌服阿魏香豆素类
后的第 3d 所获取的虫体样本中,上述三种同工
酶活性受抑制。 其中酸性磷酸酶和 6-磷酸甘露
糖酶在第 3 次给药后活性已完全受抑制; 苹果
酸脱氢酶在第 3 次给药后的第 5d 所获的虫体
样本中酶活性有所恢复, 至第 4 次给药后 (20d)
所取虫体样本中,此种酶活性才完全受抑制。 而
在相应的对照组虫体样本中, 此三种同工酶活
性始终存在。
3 讨论
毛毕吸虫的能量代谢中, 既存在着糖酵解
供能体系, 也存在着三竣酸循环有氧代谢供能
体系。 糖酵解和三磷酸酸循环均需多种酶催化
才能进行 [4]。磷酸葡萄搪异构酶是糖酵解过程中
的一种催化酶,能将由葡萄糖转变来的 6-磷酸
葡萄糖催化成 6-磷酸果糖,再进一步酵解成乳
酸 [5]。 此酶活性的抑制就可导致糖代谢的障碍。
而本次实验中阿魏香豆素类对磷酸葡萄糖异构
酶活性影响不明显。
6-磷酸甘露糖酶是糖蛋白的糖链末端的
6-磷酸甘露糖的催化酶。 本次实验证明阿魏香
豆素类对 6-磷酸甘露糖酶活性有明显抑制作
用,从而影响糖蛋白的合成。 苹果酸脱氢酶是催
化苹果酸转变成草酰乙酸的一种代谢酶, 在三
磷酸循环中处于最后一个环节,此次试验证明,
阿魏香豆素类第 3 次给药后, 苹果酸脱氢酶同
工酶活性一度受到抑制, 到第 4 次给药后则完
全受抑制, 说明该药亦影响虫体有氧代谢供能
系统。 肠管酸性磷酸酶具有水解 β 甘油磷酸酶
和破坏红细胞膜的功能, 能促进虫体对宿主红
细胞的早期消化。 酸性磷酸酶也大量存在于肠
道上皮细胞中,本试验证明,酸性磷酸酶活性受
药物抑制细胞的消化作用。
如上所述, 阿魏香豆素类对 6-磷酸甘露糖
酶 , 苹果酸脱氢酶和酸性磷酸酶三种同工酶均
有一定的抑制作用, 从而导致虫体能量代谢障
碍和消化作用受影响,最终导致毛毕吸虫死亡。
参考文献:
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[3] 杨俊荣 ,李国强 ,李志宏 .臭阿魏化学成分研究 [J].
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[4] Davis G M et al. Malocologia 1981, 21(1-2):209-
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[5] Davis G M et al. Proceeding of the Academy of
Naturd Sciences of philadelphia 1988,140 :191 -
246
注:①图中所示 mm 数,表示某种酶的等位基因在电泳中的泳距;②每一次样本组中,前二根短线代
表对照组,虫体显示的某种酶的活性,后二根短线代表给药组,短线空缺即表示酶活性受控制。
图 1 同工酶的显色示意图

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