全 文 ：2010年 3月第 17卷第 3期
三十二味午时茶是由牡荆叶、 陈皮、 枳壳、 岗梅、 广藿香
等三十二味药组成， 专治外感发热， 咽喉肿痛， 湿热腹痛， 呕
吐泄泻， 头痛头晕， 湿热积滞。 由于处方中药味组成较多， 成
分复杂， 通过试验建立岗梅、 荷叶、 青蒿等特征性较强的显微
特征鉴别； 处方中牡荆叶含量最大， 占 71％， 曾尝试测定牡荆
叶中黄酮类成分牡荆苷的含量。 参考文献报道， 均用甲醇或不
同浓度的甲醇液超声提取牡荆苷即可 ［1， 2］。 结果供试品中几乎
测不到牡荆苷。 后参考标准提高 “金菊感冒片” 中五指柑的鉴
别方法， 建立以牡荆叶为对照的薄层色谱鉴别， 方法简单， 专
属性强， 能定性控制其质量； 陈皮和枳壳合计约占14％， 且陈
皮中含橙皮苷就大于 3．5％ ［3］， 我们参照中国药典（2005 年版一
部） 午时茶颗粒含量测定项下高效液相色谱法条件试验， 对方
中陈皮和枳壳的橙皮苷总量进行了定量研究， 结果方法专属
性， 重复性， 精密性， 稳定性， 准确性等均较好， 方法可行。
1 仪器与试药
显微摄像仪 （OLYMPUS BX61） ； 薄层摄像仪 （CAMAG
REPROSTAR 3）； 岛津 LC20AT 高效液相色谱仪； SPD－M20A
检测器； LC Solution 工作站； Mettler AG245 电子天平。
牡荆叶对照药材 （由广州市药检所鉴定）； 橙皮苷对照品
（中国生物制品检定所 ， 批号 110721－200613 ）； 甲醇 （色谱
纯）； 水为超纯水； 其余试剂均为分析纯； 三十二味午时茶由
香港某公司生产提供。
2 方法与结果
2．1 显微鉴别 取本品， 置显微镜下观察： 纤维近无色， 多碎
断， 胞腔明显， 次生壁有三生螺旋状增厚 （岗梅） ［4］。 草酸钙簇
晶散在或存在于叶肉薄壁细胞中， 直径 10 ～ 45 μm （荷叶） ［5］。
花粉粒呈类球形， 直径 15 ～ 25 μm， 具三孔沟 （青蒿）。 见图 1。
【摘要】 目的 建立三十二味午时茶的质量标准。 方法 采用显微鉴别法建立了岗梅、 荷叶、 青蒿等显微特征鉴别； 采用薄
层色谱建立了牡荆叶的薄层色谱鉴别； 采用高效液相色谱法建立了陈皮和枳壳中的橙皮苷的总含量。 结果 显微鉴别特征性强；
薄层色谱操作简单， 专属性强， 重复性好， 阴性对照无干扰； 含量测定操作简单， 准确， 橙皮苷在 111．2 ~ 1112 μg 范围内呈良好
的线性关系， 平均回收率为 99．9％， RSD 为 1．7％ （n ＝ 5）。 结论 所用方法简便、 准确， 可作为三十二味午时茶的质量控制标准。
【关键词】 三十二味午时茶； 牡荆叶； 陈皮； 枳壳； 橙皮苷
中图分类号： R284.2 文献标识码： A 文章编号： 1674-4659 （2010） 03-0065-03
Study on Quality Standard of Sanshierwei Wushi Cha // YANG Jieyu 1, LIANG Yuxia 2, LIANG Mingjun3 (1 Guangzhou Institute for
Drug Control, Guangzhou 510160, China; 2 Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510180, Chi-
na;3 Guangzhou Qixing Pharmaceutical Co. LTD, Guangzhou 510310, China)
【Abstract】 Objective To establish the method for Sanshierwei Wushi Cha. Methods Using the micro-identification for Folium
Nelumbinis, Radix et Caulis Ilicis Asprellae and Herba Artemisiae Annuae, using the TLC method for identification of Folium Viticis Ne-
gundo; and using the HPLC methods for the contents of Hesperldin in Fructus Aurantii and Pericarpium Citri Reticulatae in Sanshierwei
Wushi Cha. Results The results show that micro-identification is simply, specific; TLC method is simply, specific reproducible; HPLC
method established is simply, accurate and has a good linearity in the rang of 111.2 ~ 1112 μg with a mean recovery of Hesperid in as high as
96.9% (RSD = 1.7%). Conclusion This quality standard can control the quality of Sanshierwei Wushi Cha effectively.
【Key words】 Sanshierwei Wushi Cha; Folium Viticis Negundo; Fructus Aurantii; Pericarpium Citri Reticulatae; Hesperldin
三十二味午时茶质量标准研究
杨洁瑜 1， 梁煜霞 2， 梁明钧 3
（1 广州市药检所， 广东 广州 510160； 2 广东省中医院， 广东 广州 510180；
3 广州奇星药业有限公司， 广东 广州 510310）
收稿日期： 2009-11-12 修回日期： 2010-01-30
作者简介： 杨洁瑜 （1982- ）， 女， 广东省汕头市人， 中药师； 梁煜霞
（1983- ）， 女， 广东省英德市人， 中药师； 梁明钧 （1981- ）， 男， 广
东省罗定市人， 理学学士。
·论著·
图 1 粉末显微图
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2．2 薄层鉴别 取本品 2．5 g 的内容物， 加水 100 ml， 微沸1 小
时， 滤过， 滤液浓缩至干， 残渣加甲醇 5 ml 使溶解， 静置， 取
上清液作为供试品溶液。 另取牡荆叶对照药材 1 g， 同法制成
对照药材溶液。 照薄层色谱法 （《中国药典》 2005 年版一部附
录Ⅵ B） 试验， 吸取上述两种溶液各 4 μl， 条带状点样， 分别
点于同一硅胶 G 薄层板上， 以甲苯－乙酸乙酯－甲酸 （7 ∶ 3 ∶
0．5） 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 5％三氯化铁乙醇溶
液， 在 105 ℃加热至斑点显色清晰， 置日光下检视。 供试品色
谱中， 在与牡荆叶对照药材色谱相应的位置上， 显相同颜色的
斑点。 见图2。
薄层板： 自制硅胶 G 薄层板
展开剂： 甲苯－乙酸乙酯－甲酸 （7 ∶ 3 ∶ 0．5）。
样 品： 1． 供试品 H0208； 2． 供试品 H0409； 3． 牡荆叶对
照药材； 4． 牡荆叶阴性对照； 点样量： 4 μl。
显色与检视： 喷以 5％三氯化铁乙醇溶液， 在 105 ℃加热
至斑点显色清晰， 置日光下检视。
2．3 检查项 照茶剂项下有关的各项规定 （中国药典 2005 年版
一部附录I T）。
水分 烘干法， 不得过 12．0％。
重量差异 限度应在±12％。
微生物限度 细菌数不得过 10 000 个 ／克； 霉菌、 酵母菌
不得过1 000 个 ／克； 大肠埃希菌不得检出。
2．4 含量测定
2．4．1 色谱条件 色谱柱： C18； Kromasil 250 × 4．6 mm， 5 μm
250 × 4．6 mm， 5 μm PN： E26263； 流动相： 以甲醇为流动相
A， 以0．1％磷酸溶液为流动相 B， 按表 1 进行梯度洗脱。 检测
波长为284 nm； 柱温30 ℃； 理论板数按橙皮苷峰计算应不低于
3 000。
表 1 流动相 A/B 梯度洗脱
2．4．2 检测波长的选择
利用二极管阵列检测器对橙皮苷对照品溶液进行光谱扫
描， 结果表明橙皮苷在 284 nm 波长处有最大吸收， 故确定橙
皮苷的测定波长为 284 nm。 见图 3。
2．4．3 溶液的制备与测定
2．4．3．1 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品 5 mg， 置
100 ml 量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度， 摇匀。 精密量取5
ml， 置 10 ml 量瓶中， 加水稀释至刻度， 摇匀， 即得 （每 1 ml
含 25 μg）。
2．4．3．2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物， 研
细， 取约 2．5 g， 精密称定， 置回流瓶中， 加乙醇 50 ml， 加热
回流 30 分钟， 放冷， 滤过， 用少量乙醇洗涤容器及滤渣， 合
并滤液， 蒸干， 残渣加水20 ml 使溶解， 置分液漏斗中， 用乙
醚提取 3 次（20 ml， 15 ml， 15 ml）， 弃去乙醚液。 再用水饱和
的正丁醇提取 4 次（20 ml， 20 ml， 15 ml， 15 ml）， 合并正丁醇
提取液， 蒸干， 残渣加甲醇适量使溶解并转移至 10 ml 量瓶中，
加甲醇至刻度， 摇匀。 精密量取5 ml， 置 10 ml 量瓶中， 加水
稀释至刻度， 摇匀， 即得。
2．4．3．3 阴性对照溶液的制备 以相同的处方比例， 制得不含陈
皮和枳壳的阴性样品。 按“2．4．1．2” 项下的方法制成阴性对照溶
液。
2．4．3．4 测定 分别精密吸取对照品溶液 20 μl， 供试品溶液和阴
性对照溶液各 10 μl， 按 “2．4．2” 色谱条件分别测定， 见图4 ～
6。 结果表明供试品色谱图中呈现与橙皮苷对照品保留时间相
应的色谱峰， 而阴性对照无干扰。
时间 （分钟） 流动相 A （％） 流动相 B （％）
0～35 33 67
35～37 33→100 67→0
37～45 100 0
45～47 100→33 0→67
47～55 33 67
图 3 橙皮苷紫外光谱图
图 4 对照品 HPLC 图谱
图 5 样品 HPLC 图谱
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2010年 3月第 17卷第 3期
样品中橙皮苷 加入橙皮苷 测出升橙皮苷
回收率
平均 RSD
含量 （mg） 的量 （mg） 的量 （mg） 回收率 （％） （％）
0．5443 1．0539 100．3
0．5453 1．0657 102．4
0．5443 0．5080 1．0531 100．2 99．9 1．7
0．5434 1．0430 98．36
0．5452 1．0443 98．26
批号 橙皮苷 （mg ／包） 平均含量 （mg ／包）
H0208－1 1．431
1．45
H0208－2 1．472
H0409－1 1．165
1．16
H0409－2 1．154
2．4．4 线性关系考察 精密称取橙皮苷对照品， 加甲醇分别配制
成每ml 含橙皮苷0．1112 mg， 精密量取 5 ml 至 10 ml 量瓶中 ，
加水稀释至刻度， 摇匀， 作为对照品溶液。 分别进样 2 μl、 4
μl、 8 μl、 12 μl、 16 μl、 20 μl， 即含橙皮苷 111．2 μg、 222．4
μg、 444．8 μg、 667．2 μg、 889．6 μg、 1112 μg 按试验方法测定。
以进样量 （ μg） 为横坐标， 峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线，
结果表明， 橙皮苷在 111．2 ~ 1112 μg 范围内， 其进样量与峰面
积呈良好的线性关系 ， 橙皮苷的回归方程为 ： y＝1974．3x－
26565， r ＝0．9998 （其中： y 为含量， x 为峰面积）。
2．4．5 重复性试验 取同一样品 （批号 H0409） 6 份， 按照含量
测定项下 “供试品溶液的制备” 方法制备供试品溶液并测定，
结果橙皮苷的平均含量为 1．16 mg ／袋， RSD 为 0．8％， 结果表
明， 样品的重复性良好， 方法可行。
2．4．6 稳定性试验 取同一样品溶液在0， 3， 5， 9， 16， 24 h
分别进样 10 μl， 测定其含量， 结果橙皮苷的平均含量为1．17
mg ／袋， RSD 为1．4％， 结果表明供试品溶液在 24 小时内稳定性
良好。
2．4．7 加样回收率试验 （批号 H0409） 精密吸取橙皮苷
（50．80 μg ／ ml） 的对照品溶液 10 ml 5 份， 置具回流瓶中， 减压
回收甲醇， 加入本品约 1．25 g， 精密称定， 照 “2．4．3．2” 方法
制备供试品溶液， 注入液相色谱仪， 测定， 结果见表 2。
表 2 橙皮苷回收率试验结果
2．4．8 样品含量测定 分别吸取供试品溶液和对照品溶液， 按上
述色谱条件测定， 计算， 由于厂家仅提供两批样品， 故仅对此
批样品进行了测定， 数据见表 3。
表 3 样品含量测定结果
3 讨论
3．1 薄层色谱 牡荆叶的薄层色谱鉴别， 供试品曾采用甲醇提
取后浓缩点样， 结果斑点较多， 分离度不好， 采用水煮提取
后， 斑点清晰， 分离度较好。 我们另外对处方中甘草、 厚朴、
葛根等进行了薄层色谱的鉴别研究， 结果均不理想， 暂未在正
文标准建立上述药味的薄层色谱的鉴别。
3．2 含量测定
3．2．1 流动相的选择 《中国药典》 对午时茶颗粒中橙皮苷的检
测采用甲醇－水（33 ∶ 67） 作为流动相， 对四正丸中橙皮苷的检
测采用甲醇－0．5％醋酸溶液 （39 ∶ 61） 作为流动相， 试验中我
们采用甲醇－水（33 ∶ 67） 作为流动相， 结果橙皮苷峰分离度不
好。 又尝试甲醇－0．1％磷酸溶液 （33 ∶ 67）， 结果橙皮苷峰与相
邻峰的分离度较好。 因为处方中药味较多， 成分复杂， 分析时
间长达 2 小时， 最后我们采用梯度洗脱， 使分析时间降至1 小
时。 即可以达到与干扰峰的分离， 分析时间较合理， 且阴性样
品溶液无干扰。
3．2．2 提取方法的确定 考察了提取溶剂 （水饱和正丁醇、 乙酸
乙酯）， 提取方法（加热回流、 超声）， 萃取次数 （3 次、 4 次、
5 次）， 结果表明： 正丁醇的提取效果明显优于乙酸乙酯， 确定
正丁醇作为提取溶剂； 回流提取效果明显优于超声， 故确定提
取方法为： 回流 30分钟； 正丁醇萃取 4 次基本提取完全， 确定
正丁醇萃取 4 次作为提取方法。
3．2．3 含量测定限度的建立 参照 《中国药典》 2005 年版一部
“午时茶颗粒”， 按处方每袋含陈皮和枳实为 0．6 g， 药典规定每
包含陈皮和枳壳以橙皮苷 （C28H34O15） 计 ， 不得少于0．50 mg；
本品种按处方每袋含陈皮和枳实为 0．339 g， 由于仅检测了两
批样品的含量 ， 故暂定本品每包含陈皮和枳壳以橙皮苷
（C28H34O15） 计， 不得少于0．50 mg。 今后尚需继续积累 HPLC含
量测定的数据， 为本标准中橙皮苷的含量限度的制定提供合理
的依据。
参考文献
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HPLC含量测定[J].中药新药与临床药理, 2007, 18 (6): 474-476.
[2] 禹建春, 熊学文, 李卫平, 等. 祛痹消痛胶囊中牡荆苷的含量测定 J].
湖北中医学院学报, 2008, 10 (3): 46.
[3] 国家药典委员会 .中华人民共和国药典 （2005 年版 一部） [S]. 北
京: 化学工业出版社, 2005: 132.
[4] 广东省食品药品监督管理局. 广东省中药材标准[S]. 第一册.广州:
广东科技出版社, 2003:111
[5] 国家药典委员会 .中华人民共和国药典 （2005 年版 一部） [S]. 北
京: 化学工业出版社, 2005:132.
图 6 陈皮和枳壳阴性对照 HPLC 图谱
（责任编辑： 仇洁）
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