全 文 ：第 23卷 第 3期
2007年 6月 　　
哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报(自然科学版)
JournalofHarbinUniversityofCommerce(NaturalSciencesEdition)　　
Vol.23No.3
Jun.2007
收稿日期:2006-11-19.
作者简介:张秀娟(1962-),女 ,教授 ,研究方向:抗肿瘤药物.
万寿菊花中叶黄素酯对小鼠氧化损伤的影响
张秀娟 ,刘会佳 ,杨　波 ,徐春红
(哈尔滨商业大学 生命科学与环境科学研究发展中心 , 哈尔滨 150076)
摘　要:研究万寿菊花中提取的叶黄素酯体内对四氧嘧啶所致的小鼠氧化损伤的影响.采用分光光度
法测定模型组肝组织 、红细胞膜中 SOD、MDA、CAT、GSH、血清中 AST、ALT的活性;愈创木酚比色法
测定 POD的活性以及 GOD-PAP法测定对血糖的影响.结果表明 , 万寿菊花中叶黄素酯可抑制由于
氧化损伤所致的小鼠肝 、红细胞中 SOD、MDA、CAT、GSH、POD和血清中 AST、ALT的异常升高;降低
血糖 , 提高肝糖元水平;故叶黄素对四氧嘧啶所致的小鼠氧化损伤有明显的保护作用.
关键词:万寿菊花中叶黄素酯;红细胞膜活性;肝组织;氧化损伤
中图分类号:R965　　　　　文献标识码:A　　　　　 文章编号:1672-0946(2007)03-0261-04
StudyonxangoldfromTegeteserectaonmiceofoxidativedamagebyaloxan
ZHANGXiu-juan, LIUHui-jia, YANGBo, XUChun-hong
(CenterofResearchandDevelopmentonLifeScienceandEnvironmentalScience,
HarbinUniversityofCommerce, Harbin150076, China)
Abstract:TostudyxangoldfromTegeteserectaonmiceofoxidativedamagebyaloxan.The
spectraphotometryisusedtodeterminetheactivitiesofSOD, MDA, CATandGSHinliver
andredcelmembraneandtheactivitiesofASTandALTinserum.TheactivityofPODwas
determinedbycolorimetricmethodandtheinfluenceofbloodsugarwasadoptedbyGOD-
PAP.Theresultsshowthatluteinhasobviousprotectiontothelitlemiceoxidizeddamages
duetoaloxan.ItcaninhibitthattheunusualrisingofSOD, MDA, CAT, GSH, PODinthe
liver, erythrocyteandAST, ALTinbloodserumoflitlemousecausedbyoxidizeddamage.
Italsocanreducethebloodsugar, raisestheliverglycogenlevel, andhaveprotectiveaction
tomousethatoxidizeddamageamongthethreedosageteams, theresultdiferenceisnot
prominent.
Keywords:xangoldfromTegeteserecta;redcelmembraneactivity;thelivertissue;oxida-
tivedamage
　　万寿菊花 (Marigold.Tageteserectad), 又名金
盏草(或金盏花),一年生草木 ,主要分布在黑龙
江 、吉林 、山东 、新疆 、甘肃 、宁夏 、内蒙 、山西 、四川
等地.是一种含量丰富的天然叶黄素酯来源[ 1] .叶
黄素酯在体内可自动转化成叶黄素.叶黄素对心血
管疾病 、白内障以及老年视黄斑变性等疾病具有特
殊功效 ,其抗氧化性能用以抵御游离基在人体内造
成的细胞与器官损伤 ,并可预防机体哀老引发的心
血管硬化 、冠心病和肿瘤疾病 ,此外 ,愈来愈多的流
行病学调查和实验研究结果表明 ,摄入叶黄素可以
降低癌症的发生率 [ 2] .本文对万寿菊花中提取的
叶黄素酯进行体内试验研究 ,旨在进一步阐明万寿
菊花中叶黄素的抗氧化作用.
1　实验材料
1.1　药物及试剂
万寿菊花油树脂:由东北林业大学提供(含叶
黄素脂肪酸酯 10%,用前色拉油配制);维生素 E
(厦门鱼肝油厂);肝素钠:上海生物化学制药厂;
四氧嘧啶(Sigma公司);超氧化物歧化酶(SOD)测
试盒 、过氧化氢酶 (CAT)测定试剂盒 、丙二醛
(MDA)测定试剂盒 、谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒 、
考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒 、肝糖元测定试剂盒
(以上均为南京建成生物工程研究所提供);丙氨
酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒(上海荣盛生物技
术有限公司提供);天门冬氨酸氨基转移酶(AST)
测定试剂盒(上海荣盛生物技术有限公司提供);
葡萄糖(Glu)测定试剂盒(上海荣盛生物技术有限
公司提供);H2O2(丹东市化工厂);愈创木酚(江
苏南京恒盛精细化工公司).
1.2　仪器
低温超速离心机(Backman公司);751型分光
光度计(上海第三仪器厂);组织捣碎机(江苏保定
仪表厂);快速恒温数显水箱(常州国华电器有限
公司);QL-861型涡旋混合振荡器(上海博停经
贸有限公司).
1.3　实验动物
昆明种小鼠(20±2)g,雌雄各半(黑龙江肿瘤
医院提供).
2　实验方法
2.1　分组和给药
小鼠随机分成 6组 ,每组 10只 ,分别为正常对
照组 、模型对照组 、阳性对照组(VE)、叶黄素高剂
量组 4.64 g/kg.、中剂量组 2.15 g/kg.、低剂量组
1.075 g/kg.连续灌胃给药 20 d,眼眶采血 ,肝素钠
(1.0%)抗凝.
2.2　氧化模型的建立
灌胃 20 d后禁食 16h,除正常组外 ,各组均腹
腔注射四氧嘧啶(150 mg/kg体重), 72 h后眼眶采
血 ,肝素钠(1.0%)抗凝.
2.3　样本制备
1)红细胞指标测定样本的处理
测定 CAT, GSH的溶血液制备:将抗凝全血
1 200r/min离心 5 min,弃上清 ,沉淀的红细胞加一
定量双蒸水混匀后 4 ℃放置 10 min,制成溶血液 ,
立即测定;SOD、MDA抽提液制备:取全血 0.2mL,
加生理盐水 4mL, 1 200r/min离心 5 min,弃上清
液 ,沉淀的红细胞加 0.8 mL双蒸水 ,旋涡 1 min;加
0.4mL无水乙醇 ,旋涡 30 s;加 0.4 mL氯仿 ,旋涡
1min;3 500r/min离心 5min.取上清液立即测定.
2)血清的制备
抗凝血 1 500 r/min离心 5 min,取上清液待
测.
3)小鼠肝组织匀浆的制备
取出组织 ,置冰块上 ,轻轻除去表面的凝血及
结蒂组织等附属物 ,再经冰冷生理盐水洗涤几次 ,
用滤纸吸干水分 ,备用.称取 1 g肝组织 ,在表面皿
内剪碎后 ,以 1∶9的比例在匀浆器中稀释 ,得 10%
组织匀浆.1%组织匀浆制备时取 10%组织匀浆
1mL加 9mL生理盐水.
2.4　检测方法
按照试剂盒所标方法测定 SOD、MDA、GSH-
PX、CAT、ALT、AST活性;按南京建成生物工程研
究所提供的试剂盒检测方法检测蛋白含量.愈创木
酚比色法测定过氧化物酶 POD[ 3] 、GOD-PAP法
测定血糖含量.
2.5　数据处理
结果均以 ( x±S)表示 , 数据统计分析采用
SPSS12.0 forWindows统计软件进行组间 t检验 ,
判断有无显著性.
3　实验结果与分析
3.1　万寿菊花中叶黄素酯对小鼠红细胞氧化损伤
的保护作用
SOD、CAT、GSH PX为体内清除超氧阴离子
的抗氧化酶酶活力的高低与自由基代谢密切相关.
MDA是脂质过氧化产物 ,其生成的多少体现了生
物膜的受损程度 ,且和自由基的含量密切相关 [ 4] .
对红细胞中 SOD、MDA、CAT、GSH-PX及 POD和
血糖的影响见表 1, 2.
·262· 哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 )　　　　　　　　　　　第 23卷
表 1　万寿菊花中叶黄素酯对小鼠红细胞膜 SOD, MAD, CAT, GSH活性的影响(n=10, x±S)
组别 SOD/(U· g-1Hb) MDA/(nmol· mL-1) CAT/(U· g-1Hb) GSH/(U· mL-1)
正常组 397.29±33.61 9.98±1.71＊ 10.69±2.90 196.49±44.12
阳性对照组 422.40±39.40＊＊ 10.91±2.10＊ 14.88±1.77＊ 217.33±28.66＊
阴性对照组 465.13±36.44 13.37±1.20 15.56±1.51 297.35±53.33
叶黄素高剂量组 443.41±26.03 11.29±1.15 14.48±1.52 256.06±91.78
叶黄素中剂量组 409.38±24.67＊ 10.06±2.13＊ 11.91±2.65＊ 282.36±67.51
叶黄素低剂量组 408.90±26.40＊＊ 9.70±1.01＊＊＊ 11.65±6.58＊ 243.55±49.48＊
　　＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<0.001与阴性对照组比较
表 2　万寿菊花中叶黄素酯对小鼠
红细胞膜 POD及血糖的影响(n=10, x±S)
组别 POD/(U· mL-1) 血糖 /(mmol· L-1)
正常组 13.54±1.59 5.21±0.43＊＊
阳性对照组 13.42±1.12＊ 5.98±0.53＊＊
阴性对照组 16.32±1.15 7.60±0.87
叶黄素高剂量组 14.32±2.37 5.85±0.46＊
叶黄素中剂量组 12.36±2.45＊ 5.89±0.44＊
叶黄素低剂量组 12.84±3.23 5.58±0.27＊
　　＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<0.001与阴性对照组比较
利用 SPSS软件检验组间的 P值可以看出 ,模
型组的 SOD、MDA、CAT、GSH都显著高于正常组;
叶黄素酯组的 SOD都低于模型对照组 ,以叶黄素
酯低剂量组效果最好 ,与模型对照组比较有极显著
差异(P<0.01).叶黄素酯的 MDA都低于模型对
照组 ,具有统计学意义 ,以低剂量组效果最好 ,与模
型对照组比较差异极显著(P<0.001).叶黄素酯
各组的 CAT都显著低于模型对照组 ,以中剂量组
效果为好 , 与模型组比较有显著性差异 (P<
0.05).叶黄素酯各组的 GSH都显著低于模型对照
组 ,以小剂量组效果为好 ,与模型对照组相比有显
著性差异(P<0.05).
结果显示:模型组的 POD、血糖均显著高于正
常对照组 ,说明四氧嘧啶造氧化模型成功 ,叶黄素
组血糖与模型对照组相比均具有显著性差异(P<
0.05).叶黄素组 POD以中剂量组效果最好 ,与模
型组相比具有显著性差异(P<0.05).
3.2　万寿菊花中叶黄素酯对小鼠肝脏氧化损伤的
保护作用
SOD是体内主要的清除自由基 、抗氧化酶类.
MDA是脂质过氧化产物 ,其生成的多少体现了生
物膜的受损程度 , 且和自由基的含量高低密切相
关[ 5] ,叶黄素酯对肝脏 SOD, CAT、GSH、MDA的影
响结果如表 3所示.
表 3　万寿菊花中叶黄素酯对小鼠肝组织 SOD, MAD, CAT, GSH活性的影响(n=10, x±S)
组别 SOD/(U· mg-1prot) MDA/(nmol· mg-1prot) CAT/(U· mg-1prot) GSH/(U· mg-1prot)
正常组 383.34±29.23＊ 7.42±1.44＊ 0.23±0.12＊ 160.81±37.81＊＊
阳性对照组 419.44±50.81＊ 8.05±0.55＊ 0.18±0.07＊＊ 186.53±29.51＊＊
阴性对照组 508.79±37.28 16.06±5.24 0.51±0.12 357.95±38.27
叶黄素高剂量组 455.71±40.31 12.03±2.29＊ 0.32±0.03＊ 319.56±69.10＊
叶黄素中剂量组 464.55±36.12 9.99±0.45＊ 0.25±0.06＊＊ 249.40±68.14＊
叶黄素低剂量组 460.11±27.33＊ 12.03±2.28＊ 0.32±0.07＊＊ 315.27±43.74
　　＊P<0.05, ＊＊P<0.01与阴性对照组比较
　　利用 SPSS软件检验组间的 P值可以看出:模
型组的 SOD、MDA、CAT、GSH都显著高于正常组.
叶黄素酯组的 SOD都低于模型对照组 ,和模型组
对照组比较小剂量叶黄素酯有显著性差异 ,中 、高
剂量组无显著性差异.叶黄素各组的 MDA都低于
模型对照组 ,各组与模型对照组比较都具有显著性
差异(P<0.05).以中剂量组效果为好.叶黄素酯
组 CAT都低于模型对照组 ,中高剂量组与模型组
相比具有极显著性差异(P<0.01).高剂量组与模
型组比较有显著性差异.叶黄素酯组的 GSH都低
于模型对照组 ,中 、高剂量组与模型对照组比较具
有显著性差异(P<0.05),低剂量组无显著性差
异.
血清中 ALT、AST反映肝细胞变性 、坏死程度 ,
也是检查肝功能损害最常用 、最敏感的指标 ,肝糖
原是血糖的主要来源 [ 6] ,测定了叶黄素酯对 ALT、
AST、肝糖原的影响 ,结果见表 4.
·263·第 3期　　　　　　　　　　　张秀娟 ,等:万寿菊花中叶黄素酯对小鼠氧化损伤的影响
表 4　万寿菊花中叶黄素酯对小鼠组织 ALT、AST及肝糖原的影响(n=10, x±S)
组别 hepaticglycgen/(mg· g-1)组织 AST/(U·L-1) ALT/(U· L-1)
正常组 6.50±1.45＊＊ 43.13±0.95＊＊＊ 16.62±7.18＊＊
阳性对照组 6.53±1.47＊ 45.25±6.38＊＊ 18.29±4.34＊＊
阴性对照组 3.72±0.71 82.99±10.90 132.62±34.02
叶黄素高剂量组 4.50±0.82 56.68±6.25＊＊ 49.80±6.95＊＊
叶黄素中剂量组 5.44±1.00＊＊ 57.89±8.39＊ 61.98±5.61＊
叶黄素低剂量组 5.20±0.85 57.33±4.92＊＊ 75.12±8.68＊＊
　　＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<0.001与阴性对照组比较
　　利用 SPSS软件检验组间的 P值可以看出:叶
黄素组的 AST与模型对照组比较高 、低剂量具有
极显著性差异(P<0.01),中剂量组具有显著性差
异(P<0.05).叶黄素组的 ALT与模型对照组比
较 ,高 、低剂量组具有极显著性差异(P<0.01),中
剂量组与模型组比较具有显著性差异(P<0.05).
模型对照组的肝糖原低于正常组 ,叶黄素组肝糖元
高于模型组 ,中剂量组与模型组比较具有极显著性
差异.
4　讨　论
从实验结果可以看出 ,模型组的 POD、血糖均
显著高于正常对照组 ,说明四氧嘧啶造氧化模型很
成功.无论是血液还是肝中在模型组的 SOD、
MDA、CAT、GSH都显著高于正常组;叶黄素组的
SOD都低于模型对照组.叶黄素的 MDA都低于模
型对照组.叶黄素各组的 CAT都显著低于模型对
照组.叶黄素各组的 GSH都显著低于模型对照组.
实验所用的叶黄素酯对小鼠体内有抗自由基作用.
从实验结果还可以看出 ,叶黄素组的肝糖原都
高于模型对照组 ,叶黄素组的血糖值下降 ,提示叶
黄素有降血糖的作用 ,这可能与其清除自由基 、抗
氧化的作用有关.
模型对照组 AST, ALT都极显著高于正常对
照组 ,说明肝脏受到严重损伤 ,叶黄素组的值都低
于模型对照组 ,而且叶黄素组的 ALT与正常对照
组也有显著差异 ,说明叶黄素可以抑制 ALT, AST
的异常升高 ,可以极显著降低 ALT的异常升高 ,从
而保护肝脏.
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