全 文 ：收稿日期:2015-10-21; 修订日期:2016-03-20
基金项目:国家自然科学基金(No． 81260632);
云南省教育厅科研项目(No． 2013Y514)
作者简介:施贵荣(1979-)，男(白族)，云南大理人，大理大学药学与化学
学院实验师，硕士学位，主要从事天然产物提取分离及活性筛选工作．
思茅松松塔提取物
对不同条件下豚鼠离体气管条张力的影响
施贵荣，郭美仙，罗胤珠，李冬梅，刘 熙，刘光明
(大理大学药学与化学学院，云南 大理 671000)
摘要:目的 研究思茅松松塔不同溶剂提取物对不同条件下豚鼠离体气管条张力的影响。方法 制作豚鼠离体气管条，观
察思茅松松塔不同溶剂提取物分别对静息、组胺(His)致痉和乙酰胆碱(Ach)致痉的豚鼠离体气管条张力变化率的影
响。结果 在静息、组胺(His)和乙酰胆碱(Ach)致痉条件下，与给药前比较，思茅松松塔乙醇提取物组、石油醚提取物组、
氯仿提取物组和乙酸乙酯提取物组的给药后张力明显降低;与吐温 － 20 组比较，思茅松松塔提取物组、石油醚提取物组、
氯仿提取物组和乙酸乙酯提取物组的张力变化率明显增大。结论 思茅松松塔乙醇提取物、石油醚提取物、氯仿提取物
和乙酸乙酯提取物对不同条件下豚鼠离体气管条均有舒张作用。
关键词:思茅松松塔; 离体气管条; 张力变化率
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 06． 009
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)06-1305-02
SiMao pine cone extract under different conditions of Guinea Pig Tracheal Strip
SHI Gui-rong，GUO Mei-xian，LUO Yin-zhu，LI Dong-mei，LIU Xi，LIU Guang-ming
(Dali University，Pharmacy and Chemistry Institute，Dadi Yunnan 671000，China)
Abstract:Objective To study the impact of Simao pine cone different extracts under different conditions guinea pig tracheal
strip tension． Methods Guinea pig isolated trachea strip，Simao pine cone observe different extracts were resting，tracheal strip
affect the rate of change body histamine (His)spasmogens and acetylcholine (Ach)spasmogens guinea pig． Ｒesults In the rest，
histamine (His)and acetylcholine (Ach)spasmogens conditions compared with previous administration to Simao pine cone ex-
tract ethanol，petroleum ether extract，chloroform extract and ethyl acetate extract from guinea pigs isolated tracheal strip tension
decreased;and Tween － 20 group，Simao pine cone extract，petroleum ether extract，chloroform extract and ethyl acetate extract
was significantly increased the rate of change of tension． Conclusion Simao pine cone extract ethanol，petroleum ether extract，
chloroform extract and ethyl acetate extract under different conditions guinea pig tracheal strips have vasodilating action．
Key words:Tension rate of change; SiMao pine cone; Isolated tracheal strip
支气管哮喘的主要临床表现为反复发作的喘息，气促、胸闷
和(或)咳嗽。随着气候的变化、环境污染的加重、工作和生活压
力的增大，在世界范围内哮喘的患病率迅速上升，已成为最常见
的慢性呼吸道疾病之一。思茅松主要分布于云南省，资源十分丰
富，松塔是其球果;《本草纲目》记载了松塔具有祛痰、止咳、平
喘、祛风、润肠、安神等功效。目前对思茅松的研究主要集中于化
学成分方面的研究，研究报道思茅松松塔中主要含有萜类、木质
素类和黄酮类化合物［1 ～ 3］;药理方面的研究未见报道。已有研究
表明白皮松松塔具有平喘作用［4］，因此本实验采用离体气管条
法，研究了思茅松松塔不同溶剂提取物对不同状态豚鼠离体气管
条张力的影响。
1 材料与仪器
1． 1 样品 样品采自云南省思茅市，由原大理学院药学与化学学
院周浓副教授鉴定为思茅松松塔(Pinus Yunnanensis Pinecones)。
样品标本保存在大理学院药学与化学学院生药学教研室。取思
茅松松塔干燥粗粉 10 kg，用 95%乙醇冷浸提取(24 h × 3 次)，
合并提取液，减压浓缩回收溶剂，得乙醇部位。浓缩得到的乙醇
浸膏加适量水混悬后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进
行萃取，各萃取液进行减压浓缩回收溶剂，得到石油醚、氯仿、乙
酸乙酯、正丁醇提取物，低温冷冻干燥。实验时样品均用 10μl·
ml －1吐温 － 20 配置，样品浓度为 50． 0 mg·ml －1(预实验得到有
效浓度)。
1． 2 药品与试剂 吐温 － 20 ，北京索来宝科技有限公司，T8220;
氨茶碱，广州白云山明兴制药有限公司，130826;氯化乙酰胆碱
(Ach)，上海三爱思试剂有限公司，20061130;磷酸组胺(His)，上
海如吉生物科技发展有限公司，100703;K － H营养液［5］。
1． 3 仪器 BL － 420E +生物机能实验系统和 HW － 400S 恒温平
滑肌槽(成都泰盟科技有限公司);JH － 2 肌张力传感器(航天工
程医学工程研究所)。
1． 4 动物 豚鼠，普通级，体重 300 ～ 400 g，性别不拘，常规饲
养。由大理学院实验动物中心提供。
2 方法
2． 1 标本制作 击毙豚鼠，迅速分离并取出上至甲状软骨、下至
气管分叉处的气管段，放入 4℃饱和氧的 K － H液中，剪去气管周
围组织，剪成 2 cm × 2 mm的螺旋条，将标本连接到张力换能器
上，放入盛有 19． 5 ml K － H液(37 ± 0． 5℃)的标本槽内，立即通
入 95% O2 和 5% CO2 混合气体，调整负荷到 1． 95 ～ 2． 00 g，稳定
30 min，每 15 min 换 1 次新鲜 K － H液［5，6］。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 6 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 6 期
2． 2 思茅松松塔不同溶剂提取对豚鼠离体气管静息张力变化率
的影响 实验分吐温 － 20 对照组、氨茶碱对照组(9． 6 × 10 －1 mg
·ml －1)、乙醇提取物组、石油醚提取物组、氯仿提取物组、乙酸
乙酯提取物组、正丁醇提取物组。标本稳定后，加入 0． 5 ml 终浓
度为 1． 0 × 10 －3 mg·ml －1的 His，观察气管条有无收缩反应，以
此判断标本的基本功能。实验开始，记录正常气管条 5 min 内收
缩曲线(给药前张力)，加入浓度为 10μl·ml －1的吐温 － 20，记录
气管条 5 min内收缩曲线(给药后张力)，换液 5 次(每次 2 min)，
待曲线恢复正常。同样方法，依次分别加入氨茶碱及样品进行实
验。计算静息张力变化率［6，7］。
静息张力变化率(% )= (给药前张力 －给药后张力) /给
药前张力 × 100%
2． 3 思茅松松塔不同溶剂提取物对致痉豚鼠离体气管张力变化
率的影响 分组与标本基本功能判断同“2． 2”。标本稳定后，加
入 0． 5 ml终浓度 1． 0 × 10 －3mg·ml －1的 His，或终浓度为 1． 0 ×
10 －4 mg·ml －1的 Ach，记录气管条 5 min 内收缩曲线(解痉前张
力)，接着加入 0． 5 ml 浓度为 10μl·ml －1的吐温 － 20，记录气管
条 5 min内收缩曲线(解痉后张力)，换液 5 次(每次 2 min)，待曲
线恢复正常。同样方法，依次分别加入氨茶碱及样品进行实验。
计算致痉张力变化率［6，7］。
致痉张力变化率(% ) = (致痉前张力 －致痉后张力) /致
痉前张力 × 100%
2． 4 数据统计与处理 数据用 珋x ± s表示，用 SPSS17． 0 统计软件
进行单因素方差分析，组内均数比较采用配对 t 检验，组间均数
比较采用 Student＇s t检验。
3 结果
3． 1 思茅松松塔对豚鼠离体气管条静息张力变化率的影响 结
果显示(表 1):与给药前比较，乙醇提取物组、石油醚提取物组、
氯仿提取物组和乙酸乙酯提取物组的给药后张力明显减小(P ＜
0． 01，P ＜ 0． 05);与吐温 － 20 组比较，乙醇提取物组、石油醚提取
物组、氯仿提取物组和乙酸乙酯提取物组的静息张力变化率明显
增大(P ＜ 0． 01，P ＜ 0． 05)，说明思茅松松塔乙醇提取物、石油醚
提取物、氯仿提取物和乙酸乙酯提取物对静息离体气管条有舒张
作用。
3． 2 思茅松松塔对 His致痉豚鼠离体气管条张力变化率的影响
结果显示(表 2):与解痉前比较，乙醇提取物组、石油醚提取物
组、氯仿提取物组和乙酸乙酯提取物组的解痉后张力明显减小
(P ＜ 0． 01);与吐温 － 20 组比较，乙醇提取物组、石油醚提取物
组、氯仿提取物组和乙酸乙酯提取物组的解痉张力变化率明显增
大(P ＜ 0． 01)，说明思茅松松塔乙醇提取物、石油醚提取物、氯仿
提取物和乙酸乙酯提取物对 His致痉的离体气管条有舒张作用。
3． 3 思茅松松塔对 Ach致痉豚鼠离体气管条张力变化率的影响
结果显示(表 3):与解痉前比较，乙醇提取物组、石油醚提取物
组、氯仿提取物组和乙酸乙酯提取物组的解痉后张力明显减小
(P ＜ 0． 01);与吐温 － 20 组比较，乙醇提取物组、石油醚提取物
组、氯仿提取物组和乙酸乙酯提取物组的解痉张力变化率明显增
大(P ＜ 0． 01)，说明思茅松松塔乙醇提取物、石油醚提取物、氯仿
提取物和乙酸乙酯提取物对 Ach 致痉的离体气管条有舒张作
用。
表 1 思茅松松塔提取物对豚鼠离体气管条静息张力变化率的影响(珋x ± s)
组别 药物终浓度 给药前张力 / g 给药后张力 / g 静息张力变化率 /%
吐温 － 20 2． 50 × 10 －1 μl·ml －1 1． 98 ± 0． 03 1． 95 ± 0． 04 1． 52 ± 1． 01
氨茶碱 2． 40 × 10 －2 mg·ml －1 1． 96 ± 0． 03 1． 03 ± 0． 182) 47． 27 ± 9． 334)
乙醇提取物 1． 25 mg·ml －1 1． 94 ± 0． 03 1． 80 ± 0． 052) 7． 66 ± 1． 834)6)
石油醚提取物 1． 25 mg·ml －1 1． 94 ± 0． 03 1． 31 ± 0． 092) 32． 62 ± 4． 24)5)
氯仿提取物 1． 25 mg·ml －1 1． 95 ± 0． 04 1． 65 ± 0． 072) 15． 21 ± 3． 234)6)
乙酸乙酯提取物 1． 25 mg·ml －1 1． 94 ± 0． 04 1． 88 ± 0． 041) 3． 35 ± 0． 583)6)
正丁醇提取物 1． 25 mg·ml －1 1． 95 ± 0． 03 1． 91 ± 0． 03 1． 67 ± 0． 666)
1)与给药前比较，1)P ＜ 0． 05，2)P ＜ 0． 01;与吐温 － 20 组比较，3)P ＜ 0． 05，4)P ＜ 0． 01;与氨茶碱组比较，5)P ＜ 0． 05，6)P ＜ 0． 01;n = 8
表 2 思茅松松塔对 His致痉豚鼠离体气管条张力变化率的影响(珋x ± s)
组别 药物终浓度 解痉前张力 / g 解痉后张力 / g 解痉张力变化率 /%
吐温 － 20 2． 50 × 10 －1 μl·ml －1 2． 94 ± 0． 13 2． 78 ± 0． 13 5． 44 ± 1． 10
氨茶碱 2． 40 × 10 －2 mg·ml －1 3． 00 ± 0． 15 1． 03 ± 0． 182) 65． 46 ± 6． 914)
乙醇提取物 1． 25 mg·ml －1 3． 02 ± 0． 14 2． 38 ± 0． 092) 21． 15 ± 3． 344)6)
石油醚提取物 1． 25 mg·ml －1 3． 05 ± 0． 16 1． 43 ± 0． 172) 52． 78 ± 7． 124)5)
氯仿提取物 1． 25 mg·ml －1 3． 03 ± 0． 15 1． 83 ± 0． 112) 39． 59 ± 4． 664)6)
乙酸乙酯提取物 1． 25 mg·ml －1 2． 98 ± 0． 14 2． 44 ± 0． 142) 17． 90 ± 3． 964)6)
正丁醇提取物 1． 25 mg·ml －1 3． 05 ± 0． 14 2． 91 ± 0． 16 4． 47 ± 1． 876)
与给药前比较，1)P ＜ 0． 05，2)P ＜ 0． 01;与吐温 － 20 组比较，3)P ＜ 0． 05，4)P ＜ 0． 01;与氨茶碱组比较，5)P ＜ 0． 05，6)P ＜ 0． 01;n = 8
表 3 思茅松松塔对 Ach致痉豚鼠离体气管条张力变化率的影响(珋x ± s)
组别 药物终浓度 给药前张力 / g 给药后张力 / g 解痉张力变化率 /%
吐温 － 20 2． 50 × 10 －1 μl·ml －1 3． 01 ± 0． 13 2． 90 ± 0． 13 3． 65 ± 0． 89
氨茶碱 2． 40 × 10 －2 mg·ml －1 2． 99 ± 0． 13 1． 28 ± 0． 312) 57． 25 ± 9． 134)6)
乙醇提取物 1． 25 mg·ml －1 2． 92 ± 0． 03 2． 54 ± 0． 212) 13． 24 ± 4． 474)6)
石油醚提取物 1． 25 mg·ml －1 3． 01 ± 0． 13 1． 81 ± 0． 192) 40． 01 ± 6． 404)6)
氯仿提取物 1． 25 mg·ml －1 3． 02 ± 0． 12 2． 56 ± 0． 162) 15． 10 ± 3． 764)6)
乙酸乙酯提取物 1． 25 mg·ml －1 2． 98 ± 0． 08 2． 81 ± 0． 072) 5． 73 ± 1． 123)6)
正丁醇提取物 1． 25 mg·ml －1 2． 98 ± 0． 11 2． 90 ± 0． 13 2． 78 ± 1． 556)
与给药前比较，1)P ＜ 0． 05，2)P ＜ 0． 01;与吐温 － 20 组比较，3)P ＜ 0． 05，4)P ＜ 0． 01;与氨茶碱组比较，5)P ＜ 0． 05，6)P ＜ 0． 01;n = 8
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时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 6
4 讨论
目前，哮喘尚无特效疗法，主要以控制症状的药物治疗为主，
常用的药物是糖皮质激素类和茶碱类，这两类药物的不良反应较
多且较严重。而中药对哮喘有很好的防治效果，并且毒副作用较
少较轻。因此，研发抗哮喘中药有很好的前景。
本实验结果显示:在静息、组胺(His)和乙酰胆碱(Ach)致痉
条件下，与给药前比较，思茅松松塔乙醇提取物组、石油醚提取物
组、氯仿提取物组和乙酸乙酯提取物组的给药后张力明显降低;
与吐温 － 20 组比较，思茅松松塔提取物组、石油醚提取物组、氯
仿提取物组和乙酸乙酯提取物组的张力变化率明显增大。结果
表明:思茅松松塔乙醇提取物、石油醚提取物、氯仿提取物和乙酸
乙酯提取物对不同条件下豚鼠离体气管条均有舒张作用。本实
验结果为传统中医用松塔来治疗哮喘提供了科学依据。但其机
制还有待研究。
参考文献:
［1］ 施贵荣，李冬梅，刘 熙，等． 思茅松松塔化学成分研究［J］． 大理
学院学报，2014，13(2):1．
［2］ 施贵荣，李冬梅，杨 静，等． 思茅松松塔化学成分的初步研究
［J］．大理学院学报，2013，12(9):4．
［3］ 施贵荣，郭美仙，李冬梅，等． 思茅松化学成分研究［J］． 中成药，
2014，36(7):1467．
［4］ 陈绩迳，庄希贵，方 华．红管药、白皮松松塔治疗慢性气管炎 115、
116 例临床疗效观察［J］．山西医药杂志，1979，4:24．
［5］ 陈 奇． 中药药理研究方法学，第 3 版［M］． 北京:人民卫生出版
社，2011:1277，621．
［6］ 吴国泰，刘峰林，高云娟，等．当归挥发油对离体气管、十二指肠和
血管平滑肌的作用［J］．中药药理与临床，2012，28(6):74．
［7］ 裴 昆，夏放高，陈 海，等．柚皮苷对豚鼠离体气管平滑肌作用的
机制研究［J］．中药新药与临床药理，2015，26(1):17．
收稿日期:2015-07-13; 修订日期:2016-04-07
基金项目:国家自然科学基金(No． 81273800)
作者简介:张秀英(1978-)，女(汉族)，吉林长春人，辽宁中医药大学研究生院主治医师，硕士学位，主要从事儿科呼吸系统疾病防治工作．
* 通讯作者简介:王雪峰(1957-)，女(汉族)，辽宁沈阳人，辽宁中医药大学附属医院主任医师，博士学位，主要从事儿童病毒性疾病防治工作．
清肺通络膏及其拆方对
大鼠呼吸道合胞病毒肺炎肺组织病毒载量的影响
张秀英1，王雪峰2* ，宋 囡3
(1．辽宁中医药大学研究生院，辽宁 沈阳 110032;
2．辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032;
3．辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110032)
摘要:目的 探讨清肺通络膏及其拆方对大鼠呼吸道合胞病毒肺炎病毒载量的影响。方法 以呼吸道合胞病毒滴鼻感染
大鼠，治疗组分别予清肺通络膏全方、主药和辅药干预。每日观察大鼠的生存状态;呼吸道合胞病毒感染后 3、5、7 天，实
时荧光定量 PCＲ(real time ＲT － PCＲ)检测大鼠肺组织中病毒载量;苏木素 －伊红染色(HE染色)法观察第 7 天肺组织病
理改变。结果 正常组肺组织未检测到呼吸道合胞病毒，模型组病毒载量随时间逐渐增多。各治疗组与模型组相比各时
间点病毒载量有不同程度降低，但全方治疗组最低，与主药组、辅药组比较有显著性差异(P ＜ 0． 05)。感染后第 7 天各治
疗组与模型组比肺病变范围减小，肺泡腔渗出物减少，其中全方组最明显。结论 清肺通络膏及其拆方对大鼠呼吸道合
胞病毒肺炎有一定的治疗作用，全方组优于主药及辅药组。
关键词:清肺通络膏; 呼吸道合胞病毒; 病毒载量; 形态学
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 06． 010
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)06-1307-03
Influence of Qingfeitongluo － pastesn and its Different Disassembled Formula on Virus
Load in Lung Tissue of Ｒespiratory Syncytial Virus Pneumonia in Ｒats
ZHANG Xiu-ying1，WANG Xue-feng2* ，SONG Nan3
(1． Graduate School of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang Liaoning 110032，China;
2． Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional ChineseMedicine，Shenyang Liaoning 110032，China;
3． Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang Liaoning 110032，China)
Abstract:Objective To investigate the treatment effect of Qingfeitongluo － pastes and its different disassembled formula on re-
spiratory syncytial virus pneumonia in rats．Methods The rates were infected by respiratory syncytial virus through intranasal ． The
treatments groups were intervened by full formula，main formula，adjuvant herb of Qingfeitongluo － pastes． The survival state the
rates were observed every day． On 3rd，5th and 7th day after infection，Ｒeal time PCＲ(ＲT － PCＲ)was used to detect the virus
load in lungs tissue of mice． On 7th day after infection，pathological changes of lung tissue under the optical microscope were ob-
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 6 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 6 期