全 文 ：［收稿日期］ 20130706(009)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(31060056) ;贵州省中药现代化专项(黔科合中药字［2011］5046 号) ;贵州省科技基金项目(黔科合
J字［2011］2368 号);贵州省重点实验室项目(黔科合计 Z字［2011］4005 号)
［第一作者］ 玉秋萍，在读硕士，从事植物化学研究，Tel:18286038095，E-mail:664617543@ qq． com
［通讯作者］ * 余正文，博士，教授，从事植物化学研究，Tel:15285978171，E-mail:yuzhengwen2001@ 126． com
栽培藤茶中功能性成分动态变化
玉秋萍，何磊磊，王家胜，张妮，孔琪，余正文*
( 贵州师范大学生命科学学院，贵阳 550001)
［摘要］ 目的:考察不同采摘时期的两年生栽培藤茶中几种功能性成分多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量动态
变化。方法:以蒸馏水为溶剂恒温(90 ℃)回流提取栽培藤茶中的功能性成分;以苯酚-硫酸比色法、三氯化铝比色法分别在紫
外-可见分光光度仪 490，318 nm下测定不同采摘时期的两年生栽培藤茶中多糖、总黄酮的含量;采用 Dikma ODS C18色谱柱，
以甲醇 /乙腈(5∶ 11)-0. 1%磷酸水溶液(80∶ 20)为流动相，流速 1 mL·min －1，在 HPLC色谱仪紫外检测波长为 292，370 nm处分
别对二氢杨梅素和杨梅素进行含量测定，柱温为 40 ℃。结果:不同采摘时期的两年生栽培藤茶中多糖、总黄酮、二氢杨梅素和
杨梅素的含量差别比较明显，其中多糖以 8，9 月份含量最高，分别为 2. 46%和 2. 41%;总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量均
是 4 月份达到最高，分别为 8. 74%，4. 69%，0. 18%。结论:本实验所建立的测定不同采摘时期栽培藤茶中 4 种功能性成分含
量变化的分析方法可行，结果可靠，能明确栽培藤茶中这 4 种功能性成分含量达到最高的最佳采收时期。
［关键词］ 两年生栽培藤茶;不同采摘时期;多糖;总黄酮;二氢杨梅素;杨梅素
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)09-0066-05
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfix． 2014090066
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /doi /10． 13422 / j． cnki． syfjx． 000067． html
［网络出版时间］ 2014-02-25 13:48
Dynamics Changes of Functional Ingredients from
Cultivated Ampelopsis Grossedentata
YU Qiu-ping，HE Lei-lei，WANG Jia-sheng，ZHANG Ni，KONG Qi，YU Zheng-wen*
(School of Life Sciences，Guizhou Normal University，Guiyang 550001，China)
［Abstract］ Objective:To study the dynamics changes of the content of functional ingredients such as
polysaccharide， total flavonoids， dihydromyricetin and myricetin from biennial cultivation of Ampelopsis
grossedentata collected in different period． Method:The functional ingredients was rufluxing extracted by distilled
water，the extraction temperature is 90 ℃ ． The contents of polysaccharide and total flavonoids are measured by UV
spectrophotometer using phenol-sulfuric acid method (490 nm) and AlCl3 method (318 nm) respectively． The
contents of dihydromyricetin and myricetin are measured by HPLC，detected by Dikma ODS C18 column (4. 6 mm
×250 mm，5 μm)under 40 ℃，the mobile phase was methanol and acetonitrile (5∶ 11)-0. 1% phosphoric acid
solution (80∶ 20)，the flow rate was 1 mL·min －1，detection wavelengths was 292 nm and 370 nm． Ｒesult:The
content of polysaccharide，total flavonoids，dihydromyricetin and myricetin of biennial cultivation of Ampelopsis
grossedentata of different harvest period had significant differences． The highest content of polysaccharide was in
August and September，respectively 2. 44% and 2. 42%;the highest content off total flavonoids，dihydromyricetin
and myricetin were in April，respectively 8. 74%，4. 69%，0. 18% ． Conclusion:The determination method
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2014 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 9
May，2014
established of this experiment is feasible，reliable，and can make it clear when the best harvest time was of cultural
Ampelopsis grossedentata．
［Key words］ biennial cultivation of ampelopsis grossedentata;different harvest period;polysaccharide;
total flavonoids;dihydromgricetin;myricetin
藤茶又名茅岩莓茶、端午茶、山甜茶、龙须茶，学
名显齿蛇葡 萄 Ampelopsis grossedentata (Hand． -
Mazz．)W． T． Wang［1］。显齿蛇葡萄是一种非常古
老的中草药资源、类茶植物资源和药食两用植物资
源［1-3］，该植物在贵州、湖南、湖北、广西、广东、江
西、福建、安徽等地均有分布［4］。相传显齿蛇葡萄
为瑶族同胞最先利用［3-6］，至今已有数百年的药用
历史［1］。近年来对藤茶的化学成分研究表明，藤茶
富含黄酮类化合物以及多糖，其中黄酮类化合物的
主要成分为二氢杨梅素，还含少量杨梅素等［7］。藤
茶多糖具有抗肿瘤及免疫调节、抗氧化、降血脂等多
种生物活性［8-11］。藤茶黄酮也具有抗菌、消炎、护
肝、降血压、降血脂的功效，而二氢杨梅素是较为特
殊的一种黄酮类化合物，除具有黄酮类化合物的一
般特性外，还具有解除醇中毒、预防酒精肝、脂肪肝、
抑制肝细胞恶化、降低肝癌的发病率等作用［12-13］。
本实验以蒸馏水为溶剂回流提取多糖、黄酮，分别采
用苯酚-硫酸比色法、三氯化铝比色法、高效液相色
谱法对从 3 月份到 9 月份中旬采收的两年生栽培藤
茶叶中多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量进
行测定和分析。明确了两年生栽培藤茶的最佳采收
时期，旨在为该显齿蛇葡萄植物的人工栽培提供理
论支撑，为藤茶资源的合理开发利用提供相应的
依据。
1 材料
1. 1 仪器与试剂 LX-02 型多功能粉碎机(上海江
信科技有限公司)，AB135-S型电子天平(梅特勒-托
利多仪器有限公司)，XP205 型 1 /10 万分析天平
(梅特勒-托利多仪器有限公司)，752E 型紫外-可见
分光光度仪(天津普瑞斯仪器有限公司)，DK-98-
11A型电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公
司)，LC-20AT 型高效液相色谱仪(岛津 LCsolution
色谱工作站、SPD-20A 紫外检测器、SIL-20A 自动进
样器)，Dikma ODS C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，
5 μm，中国迪马公司)。甲醇和乙腈为色谱纯(天津
市科密欧化学试剂有限公司生产)，其余试剂为分
析纯。
1. 2 药材 两年生栽培藤茶叶(于 2012 年 3 月中
旬至 9 月中旬采摘，产于贵州省江口县)，葡萄糖
(汕头市西陇化工厂)，二氢杨梅素及杨梅素对照品
(实验室自制，经测定纯度 ＞ 98%)。
2 方法与结果
2. 1 HPLC 色谱条件 Dikma 色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)，流动相［甲醇-乙腈(5 ∶ 11)］-0. 1%
磷酸水溶液(80∶ 20)，流速 1 mL·min －1，柱温 40 ℃，
进样量 10 μL，紫外检测波长 292，370 nm。
2. 2 标准曲线的制作
2. 2. 1 多糖标准曲线的制作 精密称取葡萄糖
0. 100 g，用蒸馏水溶解并定容至 100 mL，吸取 5. 0
mL定容至于 50 mL 量瓶中，分别吸取 5. 0，10. 0，
15. 0，20. 0，25. 0 mL 加水定容至 50 mL 量瓶中，配
制成 10. 0，20. 0，30. 0，40. 0，50. 0 mg·L －1的葡萄糖
对照品溶液。精密吸取上述不同浓度的葡萄糖对照
品溶液各 2. 0 mL于试管中，依次加入 5%苯酚 1. 0
mL和浓硫酸 5. 0 mL，振摇，静置 5 min 后沸水浴加
热 15 min，冷却至室温，在 490 nm 处测定吸光度。
以溶液质量浓度为横坐标(X)，吸光度为纵坐标
(Y)，绘制葡萄糖标准曲线。
2. 2. 2 总黄酮标准曲线的制作 精密称取10. 0 mg
二氢杨梅素，用甲醇溶解并定容至 100 mL 量瓶中，
得 0. 1 g·L －1的对照品溶液，分别从中吸取对照品溶
液 0. 50，0. 75，1. 00，1. 25，1. 50，1. 75 mL 于 10 mL
试管中，各加 3. 0 mL 5% AlCl3 溶液，然后再分别加
甲醇至总体积为 10 mL，摇匀。用 752E 型紫外-可
见分光光度计，在波长为 318 nm处分别测定其吸光
度。以溶液浓度为横坐标(X)，吸光度为纵坐标
(Y) ，绘制总黄酮标准曲线。
2. 2. 3 二氢杨梅素和杨梅素标准曲线的制作 精
密称取二氢杨梅素 50. 0 mg和杨梅素 25. 0 mg，分别
置于 50 mL 量瓶中，以甲醇溶解并定容到刻度，摇
匀，得 1. 0，0. 5 g·L －1的二氢杨梅素、杨梅素对照品
溶液。将 1. 0 g·L －1二氢杨梅素和 0. 5 g·L －1杨梅素
对照品溶液混合，精密吸取 0. 1，1. 0，2. 0，4. 0，6. 0，
8. 0，10. 0，20. 0 mL 的混合溶液加甲醇定容至 50
mL，得系列的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶
液 10. 0 μL注入液相色谱仪，测定峰面积，每个样品
进样 3 次，取平均值。以进样质量浓度为横坐标
(X)、峰面积为纵坐标(Y)，绘制二氢杨梅素及杨梅
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玉秋萍，等:栽培藤茶中功能性成分动态变化
素标准曲线。
2. 3 供试品溶液的制备 将 3 月份到 9 月份采摘
的藤茶叶自然干燥后粉碎，过 40 目筛。分别精密称
取藤茶样品粉末 0. 100 g，加入适量石油醚于电热恒
温水浴锅(70 ℃)中回流脱脂 2 次，每次 1 h，过滤，
挥干滤渣中的石油醚。滤渣分别加入 25. 0 mL蒸馏
水于电热恒温水浴锅(90 ℃)中回流 2 次，每次 1 h，
趁热过滤，合并滤液于 50 mL 量瓶中并以蒸馏水定
容至刻度，待用于测定多糖含量。分别从上述
50 mL水溶液中吸取 20. 0 mL 溶液蒸干蒸馏水，用
甲醇溶解并定容至 10 mL，待用于测定总黄酮、二氢
杨梅素和杨梅素含量。
2. 4 样品含量测定
2. 4. 1 多糖的含量测定 多糖的含量测定采用苯
酚-硫酸比色法，在 490 nm 处测定吸光度。在 2. 3
项的多糖供试品溶液中，3，4，6，7 月份各取 1. 0 mL，
5，8，9 月份各取 0. 5 mL，均加蒸馏水至 2. 0 mL，按
2. 2. 1 项中的处理方法对藤茶多糖进行测定，记录
其吸光度，通过多糖标准曲线回归方程计算其含量。
2. 4. 2 总黄酮的含量测定 藤茶总黄酮的含量测
定采用 AlCl3 比色法，在 318 nm 测吸光度。在 2. 3
项中的黄酮供试品溶液中，3，4，8 月份各取 0. 3 mL，
5，6 月份各取 0. 5 mL，7，9 月份各取 1. 0 mL，按
2. 2. 2 项中的处理方法对藤茶总黄酮进行测定，记
录其吸光度，通过总黄酮标准曲线回归方程计算其
含量。
2. 4. 3 二氢杨梅素和杨梅素的含量测定 取 10
μL 2. 3 项中的供试品溶液，注入高效液相色谱仪进
行分析，获得样品的色谱图(图 1)。通过其标准曲
线回归方程计算二氢杨梅素和杨梅素的含量。
A. 对照品;B. 样品;1. 二氢杨梅素;2. 杨梅素
图 1 藤茶样品 HPLC
2. 5 方法学考察 取同一多糖、总黄酮、二氢杨梅
素和杨梅素供试品溶液，按 2. 4. 1，2. 4. 2，2. 4. 3 项
的方法分别对供试品溶液重复平行测定 5 次，进行
精密度试验;取同一样品 5 份，分别制备多糖、总黄
酮、二氢杨梅素和杨梅素供试品溶液并测定，进行重
复性试验;取已知多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅
素质量分数的藤茶样品(4 月份)9 份，按照样品中
多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素质量含量的
0. 8，1. 0，1. 2 倍加入对照品，各 3 份，按制备供试品
溶液方法制备供试品溶液，按样品含量测定方法对
供试品溶液进行测定，计算回收率。
2. 6 结果与分析
2. 6. 1 线性关系 葡萄糖线性回归方程 Y =
53. 628X + 0. 050 2(Ｒ2 = 0. 999 0)，线性范围 2. 5 ～
12. 5 mg·L －1;总黄酮线性回归方程 Y = 57. 68X －
0. 184 1(Ｒ2 = 0. 999 8)，线性范围 5. 0 ～ 17. 5 mg·
L －1;二氢杨梅素回归方程 Y = 107X － 28 745(Ｒ2 =
0. 999 9)，线性范围为 0. 01 ～ 2. 0 μg;杨梅素回归方
程 Y = 3 × 107X － 17 322(Ｒ2 = 0. 999 7)，线性范围
0. 005 ～ 1. 0 μg。
2. 6. 2 方法学考察 多糖、总黄酮、二氢杨梅素和
杨梅素精密度、重复性试验结果的 ＲSD见表 1，加样
回收率试验结果见表 2。结果表明本试验精密度和
稳定性良好，分析方法可靠。
表 1 多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素
精密度、重复性试验(n = 5) %
功能性成分 精密度 ＲSD 重复性 ＲSD
多糖 0. 09 1. 49
总黄酮 0. 17 0. 93
二氢杨梅素 4. 50 4. 50
杨梅素 2. 40 1. 20
2. 6. 3 样品含量测定结果 不同采摘时期的两年
生栽培藤茶叶中 4 种功能性成分含量测定结果的质
量百分数见表 3。
3 讨论
从表中可以清楚地看到，两年生栽培藤茶叶中
多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量随着采摘
时间的不同差别明显，多糖以 8，9 月份含量最高，总
黄酮、二氢杨梅素及杨梅素均是 4 月份含量达到最
高。与多年生野生藤茶对比，本研究中的栽培藤茶
多糖含量达最大的月份与野生藤茶一致［14］;野生藤
茶中杨梅素含量达到最高的时期目前尚未见文献报
道;据文献报道，野生藤茶总黄酮和二氢杨梅素含量
达到最大值时的月份都在 5 月份［15-16］，而本研究的
两年生栽培藤茶叶中总黄酮和二氢杨梅素含量达到
最大均是 4 月份，到 5 月份其含量明显下降，与 4 月
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Vol． 20，No． 9
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表 2 多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素加样回收率试验
成分 No． 称样量 / g 样品含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
多糖 1 0. 500 6. 250 0 5. 000 11. 167 5 98. 35 99. 37 1. 04
2 0. 501 6. 262 5 5. 008 11. 244 0 99. 47
3 0. 501 6. 262 5 5. 010 11. 280 5 100. 16
4 0. 502 6. 275 0 6. 275 12. 514 9 99. 44
5 0. 500 6. 250 0 6. 251 12. 416 0 98. 64
6 0. 500 6. 250 0 6. 251 12. 583 5 101. 32
7 0. 501 6. 262 5 7. 513 13. 695 1 98. 93
8 0. 502 6. 275 0 7. 530 13. 654 4 98. 00
9 0. 501 6. 262 5 7. 514 13. 778 0 100. 02
总黄酮 1 0. 202 17. 654 8 14. 124 31. 458 2 97. 73 98. 79 0. 77
2 0. 200 17. 480 0 13. 984 31. 262 6 98. 56
3 0. 201 17. 567 4 14. 054 31. 327 7 97. 91
4 0. 201 17. 567 4 17. 567 35. 155 5 100. 12
5 0. 201 17. 567 4 17. 567 34. 939 4 98. 89
6 0. 200 17. 480 0 17. 481 34. 791 4 99. 03
7 0. 202 17. 654 8 21. 186 38. 692 5 99. 30
8 0. 201 17. 567 4 21. 081 38. 277 4 98. 24
9 0. 201 17. 567 4 21. 080 38. 506 2 99. 33
二氢杨梅素 1 0. 503 23. 590 7 18. 872 42. 124 9 98. 21
2 0. 500 23. 450 0 18. 761 41. 809 5 97. 86
3 0. 501 23. 496 9 18. 800 42. 206 7 99. 52
4 0. 501 23. 496 9 23. 497 46. 622 7 98. 42
5 0. 500 23. 450 0 23. 452 46. 264 1 97. 28 98. 00 0. 70
6 0. 502 23. 543 8 23. 544 46. 539 2 97. 67
7 0. 501 23. 496 9 28. 201 51. 023 9 97. 61
8 0. 502 23. 543 8 28. 253 51. 254 3 98. 08
9 0. 502 23. 543 8 28. 252 51. 047 1 97. 35
杨梅素 1 0. 503 0. 905 4 0. 724 1. 620 5 98. 77 100. 00 1. 20
2 0. 500 0. 900 0 0. 721 1. 632 0 101. 52
3 0. 501 0. 901 8 0. 721 1. 622 3 99. 93
4 0. 501 0. 901 8 0. 902 1. 800 6 99. 64
5 0. 500 0. 900 0 0. 901 1. 786 0 98. 33
6 0. 502 0. 903 6 0. 904 1. 805 6 99. 78
7 0. 501 0. 901 8 1. 082 2. 007 3 102. 17
8 0. 502 0. 903 6 1. 085 1. 988 7 100. 01
9 0. 502 0. 903 6 1. 084 1. 986 0 99. 85
份中的含量差别显著，说明不同采摘时期的栽培藤
茶和野生藤茶中总黄酮和二氢杨梅素含量的动态变
化有一定差异性，这种差异性可能是由于生长年限
与生长地区的不同而产生，本课题组拟在未来研究
中跟踪测定分析不同地区同一生长年限、不同产区
不同生长年限、同一地区同一生长年限以及同一地
区不同生长年限的栽培藤茶和野生藤茶中这 4 种功
能性成分含量的动态变化，为藤茶资源的人工培育
及开发利用提供有利依据。
根据实验测定结果可见，本试验建立的提取和
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玉秋萍，等:栽培藤茶中功能性成分动态变化
表 3 不同采摘时期的两年生栽培藤茶叶中多糖、
总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量 %
月份 多糖 总黄酮 二氢杨梅素 杨梅素
3 1. 01 5. 69 2. 31 0. 08
4 1. 25 8. 74 4. 69 0. 18
5 2. 31 2. 85 1. 19 0. 04
6 1. 15 3. 78 0. 93 0. 03
7 1. 33 1. 66 1. 00 0. 03
8 2. 46 6. 49 1. 34 0. 04
9 2. 41 1. 94 0. 96 0. 03
分析方法可行，实验结果能够清楚准确地反映出不
同采收时期的两年生栽培藤茶叶中多糖、总黄酮、二
氢杨梅素和杨梅素的含量动态变化，明确了栽培藤
茶中这 4 种成分含量达到最高的最佳采收时期，为
藤茶资源的合理开发利用提供理论支撑。
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2004，3(26):210.
［责任编辑 顾雪竹
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《中国中药杂志》2014 年征订启事
《中国中药杂志》系中国科协主管，中国药学会主办，中国中医科学院中药研究所承办的综合性中药学术期刊。创刊于
1955 年 7 月，是创刊最早、发行量最大的中药学术刊物。《中国中药杂志》全面反映我国中医科研最高学术水平，主要报道该
领域新成果、新技术、新方法与新思路，内容包括栽培、资源与鉴定、炮制、药剂、化学、药理、不良反应、临床等。设有专论、综
述、研究论文、研究报告、临床、学术探讨、药事管理、经验交流、信息等栏目。主要读者对象为医药领域各级管理部门、研究院
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《中国中药杂志》现为半月刊，128 页，2014 年定价每期 30 元，全年 24 期定价为 720 元。国内刊号 11-2272 /Ｒ，国际刊号
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第 20 卷第 9 期
2014 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 9
May，2014