全 文 ：测定的结果最高(4. 21%), 以金丝桃苷为对照品三氯化铝显色
法测定的结果次之(3. 81%),而以金丝桃苷作为对照品亚硝酸
钠 -硝酸铝 -氢氧化钠络合比色法结果最低 (3. 31%)。紫外
分光光度测定的结果较高 ,是由于 258 nm吸收波长是苯甲酰系
统的紫外吸收产生的吸收波长 , 而自然界中具有苯甲酰系统的
化合物较多 , 在 258 nm 处有吸收的化合物较多 ,如一些鞣质等 ,
而一般黄酮类成分的药材中都含有鞣质 , 他们在 258 nm处有很
强的紫外 , 从而干扰总黄酮的含量测定的结果 , 最终导致测定
结果偏高。
3. 3　 黄酮类成分加入 NaNO2 , A l(NO3)3和 NaOH 试剂显色的
反应原理是发生在黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚羟基部位 ,
不具有邻位无取代邻二酚羟基的黄酮醇类成分加入 NaNO2 , A l(NO 3)3和 N aOH试剂时是不显色的 , 罗布麻叶总黄酮中有几个
不具备该结构 , 如三叶豆苷 、黄芪豆苷 、三奈酚等。结果导致测定
结果不准确(偏低)。
3. 4　 三氯化铝显色法测定的原理为:在酸性环境下 , 黄酮醇母
核中 5位 -OH、4位 C =O与 Al3+络合产生的络合物 ,在 400 nm
左右有最大吸收 , 且这个反应具有专属性 。罗布麻叶黄酮类成
分:芦丁 、新异芦丁 、异槲皮苷 、金丝桃苷 、三叶豆苷 、黄芪豆苷 、黄
芪苷 -6- o -乙酸酯 、异槲皮苷 -6- o -乙酸酯 、槲皮素和山柰
酚 , 其结构中均有 5位 -OH、4位 C =O, 故该法适合用于罗布麻
叶总黄酮的含量测定。
因此 ,罗布麻叶中总黄酮含量测定的适用方法为:以金丝桃
苷为对照品 ,在酸性(加入醋酸 -醋酸钠缓冲液 )条件下加入三
氯化铝显色后测定。
参考文献:
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收稿日期:2006-07-31;　修订日期:2006-12-24
作者简介:苏水莲 (1955-),女(汉族),江西宁都人 ,现任江西省赣南医学
院教授 ,主要从事医学原虫的研究工作.
*通讯作者简介:陈桂凤 (1952-),女(汉族),江西赣县人 ,现任江西省赣
南医学院高级实验师 ,主要从事教学实验工作.
石榴根皮等 9种中药体外抗人芽囊原虫的效果观察
苏水莲 ,陈桂凤* ,张瑞其 ,谢琼珺 ,廖　华
(江西省赣南医学院 ,江西 赣州　341000)
摘要:目的 探讨石榴根皮等 9种中草药杀人芽囊原虫的效果。方法 采用不同浓度中草药水提液进行体外抗人芽囊原
虫实验 , 并用光镜观察作用后人芽囊原虫的形态变化。结果 随着药物作用时间的延长和药物浓度的增加 ,石榴根皮 、胡
黄连 、黄连 、苦楝皮对人芽囊原虫有不同程度的凋亡现象 ,这些药物对人芽囊原虫的 M IC值分别为 0. 1, 0. 6, 0. 8, 0. 8 g /
m l, 光镜观察虫体表膜凹陷 ,剥脱 , 破裂。低浓度胡黄连药物作用虫体后均转变成包囊 , 而白头翁 、南瓜子 、使君子 、槟榔 、
苦参对人芽囊原虫均无作用。结论 石榴根皮 、胡黄连可直接作用于虫体表膜 ,具有较强的杀人芽囊原虫的作用。
关键词:人芽囊原虫;　石榴根皮;　胡黄连;　杀虫效果;　形态
中图分类号:R285. 5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)03-0616-02
The Tr ichomnacida lE ffect of N ine ChineseH erbs on theB lastocys tis hom inis
SU Shui-lian, CH EN G ui-feng* , ZHANG Ru i-q i, XIE Q iong-jun , L IAO H ua
(GannanMed ica lCollege, Ganzhou , J iangxi Province 341000, Ch ina)
Abstract:Objective To study the e ffect ofPsidium gua jaua l and o the r e ight Chinese he rbs on theB lastocy sitis hom in is. Meth-
ods T rchom onacidal e ffect o f Chinese herbs w as investig ated using va rious concentration o f Chinese he rbs wa ter ex trac t aga inst
B lastocy sitis hom in is in v itro. The mo rpho log ical change s of theB lastocy sitis hom inis we re observed by light m icroscope. Resu lts-
W ith pro longa tion o f the tim e of d rug action and increase o f its concentration, P sid ium guajaul, P icrorhra scrophulariitlora Pen-
nell, Coptis chiennsis F ranch andM elia azedarach L inn have the e ffec t o f apoptosis toB lastocystis hom inis. The ir low est concentra-
tionsw ere re spective ly 0. 1, 0. 4, 0. 6, 0. 8g /m .lW e can obse rve the ce llm emb rance ho llow ed, exfo lia ted and ruptu red. The B lasto-
cystis hom inis change into cy stw ith low concentration o fP icroh ica scrophu lariitlora Penne l.l And Pu lsatilla ch inenensis Bunge Re-
ge l, Cucurita moschata Ouch, Quisgua lis ind ical, Areca actechata Duch and Sophora flavescensA ic have no e ffec t to B lastocy stis
hom in is. Conclu sion Psidium gua jaua l and P icrorh ica scrophu lariitlora Penne ll de stroy ed cellmemb rane directly and exhibited e f-
fective trichomonacida lB lastocystis hom in is ac tion.
Key words:B lastocystis hom in is;　P sid ium gua jaua l;　P icrorhica scrophulariitlora Penne ll;　T richom onac ida l effect;　Ob-
jective conform a tion
　　人芽囊原虫(B lastocystis hom in is简称 B. h)是近 20年被人们
所重视的与腹泻相关的人体寄生原虫。在我国 ,已将其所致疾病
列为新发传染病 [ 1] , 人芽囊原虫病一般呈散在发病 , 但在赣南崇
义县于 1996年发生过暴发流行 [ 2] 。我院 2002级新生 B. h感染
率为 10. 09%(426 /43)[ 3] 。我们曾用甲硝唑对感染者进行治疗 ,
3个月后复查大多数阴转效果不佳 ,且易复发。另有研究表明甲
硝唑具有致畸和致癌作用 [ 4] 。文献报道石榴根皮性酸 、味涩 , 具
有涩肠 、止血 、杀虫之功效 [ 5] 。主要治疗细菌性痢疾 、阿米巴痢
疾和多种感染性疾病。胡黄连等具有解毒杀虫的功效 [ 6] 。为了
提供 、开发新的抗原虫的中草药实验数据 , 我们用了 9种中草药
在体外观察杀 B. h的效果。现报道如下。
1　材 料
1. 1 　B. h虫株 虫株分离自赣南医学院附属医院消化科 、儿科
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 3期 LISH IZHEN MEDIC INE AND MATERIA M ED ICA RESEARCH 2007VOL. 18 NO. 3　
病人的粪便 , 在(36±0. 5)℃的普通厌氧培养箱中培养 , 每 3天
传代 1次 , 共传代 20次的培养液。
1. 2 　药物 实验用药(购自本院附属医院中药房及当地医药公
司门市部), 全部为中医药书中具有清热解毒和驱虫效果的中
草药。
1. 3　培养基 Lockes鸡蛋血清 (Locke-Egg-Serum , LES)双相培
养基 [ 5] , 成 30°斜面置 90 ～ 100℃烤箱加热凝固制成 。转种前每
管加 5 m l洛氏液 , 14%灭活的无菌新生小牛血清(购自中国杭州
四季青生物工程材料有限公司)及碱性抗生素溶液(0. 4%氨苄
青霉素 , 0. 1%链霉素 , 0. 000 6%两性霉素 B)即可转种。
2　方法
2. 1　药液制备 将 9种中草药 (干药)各 10 g,分别装入 250 m l
三角烧瓶内 , 各置 50 m l蒸馏水中 , 浸泡过夜 ,然后放入 80℃水浴
箱中热浸 4 h。过滤除去药渣 ,滤液分别用文火浓缩至药液浓度
为 1, 4, 6, 8。 3 000 r /m in离心 10 m in, 取上清 , 抽滤除菌 , 调整渗
透压 , 置无菌瓶中 , 4℃保存备用。
2. 2　光学显微镜观察 每种中草药配制 4个药物浓度组 , 分别
为 0. 1, 0. 4, 0. 6, 0. 8 g /m l, 同时设无药对照组。 取出培养 36h的
人芽囊原虫培养管 ,分别等量从培养基底层吸出 20 μl虫体悬液
滴于载玻片上 , 加盖玻片镜检。用血细胞记数器做计数观察 ,计
算出每 mm3所含虫数。 每管虫体浓度约为 1 ×103个 /m l, 然后
用不同浓度的药液 1m l加入各培养管中 , 放置(36 ±0. 5)℃培养
箱中。培养 2, 4, 8, 12 h后分别吸取各管虫液滴片镜检 , 用高倍
镜观察虫体活动状态 , 计算虫体死亡率。培养 24 h后对死亡率
为 100%的实验管进行转种 , (36±0. 5)℃继续培养 48 h, 观察是
否有 B. h存活 , 所有实验重复 3次。
3　结果
同一作用时间 , 石榴根皮 、胡黄连 、黄连 、苦楝皮组的 B. h死
亡率均高于对照组(P <0. 01), 且虫体死亡率随药物浓度增加而
增高(P <0. 01);同一药物浓度 ,随着作用时间延长 , B. h死亡率
也逐渐增高(P <0. 05)。高倍镜下 , 石榴根皮组作用 2 h后 , 1, 4,
6, 8 g /m l浓度组虫体全部凋亡 , 形态发生明显改变。大部分虫体
胞膜边缘模糊 , 虫体凹陷裂解(图 1)。而胡黄连组作用 2 h后 1,
4g /m l浓度组虫体全部诱导成包囊(图 2)。作用 8 h后 6, 8 g /m l
浓度组虫体全部死亡。再将石榴根皮及胡黄连虫液组转种培养
24 h,均未见 B. h生长。苦楝皮 、黄连对虫体作用不强 , 而白头
翁 、南瓜子 、使君子 、槟榔 、苦参对人芽囊原虫无作用。结果见表
1。对照组虫体完好无缺(图 3)。
图 1　石榴根皮作用后虫胞膜　　　　　　图 2　胡黄连作用后虫体　
边缘模糊虫体凹陷裂解　　　　　　　　　全部诱导成包囊
图 3　对照组(正常培养的人芽囊原虫)
M IC测定:结果显示石榴根皮 、胡黄连对人芽囊原虫凋亡最
快 , 时间最短 , M IC最低。而黄连 、苦楝皮作用不强 , 槟榔 、苦参 、
白头翁 、南瓜子 、使君子对人芽囊原虫均无作用。结果见表 2。
表 1　9种中草药体外杀人芽囊原虫效果
药物名称 科别 滋养体死亡情况　2 h　　4 h　　　8 h　　12 h　
石榴根皮 Psidium guajaual 桃金娘科 - - - -
胡黄连 玄参科 + ± - -
Picrorhica Scrophulariitlora Penne ll
苦楝皮 Melia azedarach linn 楝科 + + ± +
黄连 Coptis ch inennsis Fracnch 毛莨科 ++ + ± +
槟榔 Areca actechata Duch 棕榈科 +++ +++ +++ +++
南瓜子 Cucurita moschata Duch 胡芦科 +++ +++ +++ +++
苦参 Sophora flavescens Aic 豆科 +++ +++ +++ +++
白头翁 毛莨科 +++ +++ +++ +++
Pulsatilla ch inensisBungeRegel
使君子 Quisgualis indical 使君子科 +++ +++ +++ +++
对照 Comparision +++ +++ +++ +++
　　( -)为完全死亡, (±)为 1 /5虫体存活 , (+)1 /4虫体存活 , (++)2 /3虫体
存活 , (+++)为虫体全活
表 2　9种中草药 B. h实验的 M IC比较 g m l- 1
虫株 人芽囊原虫 虫株 人芽囊原虫
石榴根皮 0. 1 苦参　　 0. 8
胡黄连　 0. 4 白头翁　 0. 8
黄连　　 0. 6 南瓜子　 0. 8
苦楝皮　 0. 6 使君子　 0. 8
槟榔　　 0. 8
4　讨论
中药石榴根皮 P sid ium guajaua l是落叶灌木或小乔木 , 具有
涩肠止泻止血 、解毒杀虫的功效。临床常用于治疗久痢 、久泻 、便
血 、脱肛 、崩漏 、白带 、虫积腹痛等症 [ 6] 。 近年研究表明 , 石榴根
皮具有对多种细菌和流感病毒有抑制作用 [ 7] 。胡黄连是玄参科
多年生长低矮草木植物 , 是一种常用药材。有清热 、除湿 、明目 、
补肝 、益胆 、杀虫的效用。本研究证实 ,石榴根皮具有明显的杀灭
人芽囊原虫的作用 , 0. 1 g /m l浓度的药物作用 2 h对 B. h均具有
杀灭和裂解作用。胡黄连早期可诱导虫体成囊 ,随着药物浓度的
增加 , 作用时间的延长 , B. h死亡率增高 , 即杀虫效果和药物浓度
及作用时间成正相关。 0. 6 g /m l浓度的药物作用 8 h人芽囊原
虫全部凋亡。且转种后均无 B. h生长。
选择合适的药物浓度和作用时间进行光镜观察是研究药物
作用机制的关键。据此 ,本次实验选用低浓度石榴根皮药液 , 虫
体快速凋亡 、裂解 , 充分显示了石榴根皮的杀虫效果 ,但无法观察
虫体表膜受损的动态变化过程 ,其确切机制值得进一步研究 。低
浓度胡黄连药液能充分观察虫体受药物作用的变化 ,先将滋养体
诱导成囊 , 然后在高浓度药物作用后 , 虫体迅速死亡。黄连 、苦楝
皮对人芽囊原虫作用不强 ,而白头翁 、南瓜子 、使君子 、槟榔 、苦参
对人芽囊原虫均无作用 ,故认为石榴根皮 、胡黄连水提液均有杀
人芽囊原虫的作用。石榴根皮 、胡黄连是一种常见中草药 , 我国
资源丰富 , 成本低廉 ,毒性低。本次实验为利用石榴根皮 、胡黄连
研制新的外用兼口服的高效低毒的抗人芽囊原虫药物奠定基础。
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