全 文 ：4　皮肤致敏试验
4.1　材料
动物:豚鼠(白毛)30只 ,雌雄各半(由黑龙江中医
药大学实验动物中心提供);阳性致敏药:2 , 4二硝基
氯代苯配成1%的致敏浓度和 0.1%的激发浓度。
4.2　方法
4.2.1　分组
将30 只豚鼠随机分为 3 组 ,即用药组(给镇痛
膏)、基质组(给麻油)、阳性对照组(给 2 ,4二硝基氯代
苯)。
4.2.2　致敏接触
给药前豚鼠背部两侧毛剪去 ,去毛区范围每侧约
3cm×3cm 。24h 后 3组分别涂镇痛膏 0.2g 只 , 麻油
0.2g 只 ,1%2 ,4二硝基氯代苯 0.2ml 只于豚鼠背部左
侧去毛区 ,并用纱布固定 ,持续 6h ,第 7 ,第 14天 ,以同
样的方法重复 1次。
4.2.3　激发接触
于末次给致敏接触物后 6h用生理盐水将其洗脱 ,
即刻观察 ,然后于 24h , 48h ,72h 再观察皮肤过敏反应
情况 。
4.3　结果
豚鼠经致敏接触镇痛膏及其基质后 ,又经激发接
触 ,动物皮肤未见红斑和水肿 ,无致敏反应。但阳性对
照组激发接触后出现重度红斑 ,重度水肿 ,呈极度致敏
反应。用药组致敏率与基质组比较其差别无显著性
(P >0.05);阳性对照组致敏率与基质组比较具有高
度显著性(P <0.01),见表 1。
表 1　镇痛膏对豚鼠皮肤致敏反应的影响评分(n=10)
组　别 0h 24h 48h 72h 致敏率%
镇痛膏 0 0 0 0 0
麻　油 0 0 0 0 0
对照组 2.2 3.9 4.9 5.9 100＊
　　注:与麻油组比较 , ＊P<0.01
5　讨论
中医学认为 ,疼痛是由于各种原因影响了气血的
运行 ,或导致气血亏虚或气机阻滞引起“不荣”或“不
通”而产生的一种自身感觉 ,一般以活血化瘀 ,行气止
痛为主要治法。依据中医学理论 ,经过反复临床实践 ,
在传统的名方“夺命散”基础上加味组成 。方中的血
竭 、乳香 、没药 、红花活血化瘀止痛 ,延胡 、青皮行气散
瘀止痛 ,川乌温经散寒止痛 ,冰片辛香走窜引经络之
品。药物直接透过皮肤吸收进入血液循环 ,通过活血
化瘀改善血小板聚集 ,血管痉挛收缩或血栓形成 ,从而
达到缓解镇痛目的 。本毒理实验研究表明:自拟镇痛
膏无不良反应 ,说明该制剂短期用药是安全的;自拟镇
痛膏用后未见局部出现红斑和水肿 ,说明该制剂未显
示皮肤刺激性反应 ,也无明显皮肤致敏反应。
龙牙 木叶总皂甙对
荷瘤鼠突变型 p53表达的影响
吴勃岩 ,祝司霞 ,王晶
(黑龙江中医药大学 ,黑龙江 哈尔滨 150040)
摘　要:目的:探讨龙牙 木叶总皂试对荷瘤鼠突变型 p53表达的影响 。方法:采用免疫组织化学方法
检测小鼠 S-180肿瘤组织中的 p53蛋白含量。结果:用药组小鼠肉瘤 S180组织中的 p53表达与模型组
相比明显减少(P <0.05)。结论:龙牙 木叶总皂甙可以明显抑制突变型 p53表达(P<0.05),提示龙
牙 木叶总皂甙可能促使突变的 p53基因发生逆转。
关键词:龙牙 木叶总皂甙;突变型 p53;表达
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　　文章编号:1002-2392(2005)01-0038-02
收稿日期:2004-11-04
基金项目:哈尔滨市科技局学科后备带头人基金(2002AFSSJ025)
作者简介:吴勃岩(1958-),女 ,教授 ,主要从事中草药抗肿瘤研究工作。
　　龙牙 木系五加科 木属植物 ,近年来笔者对黑 龙江产的龙牙 木叶进行了多方面的研究 ,结果表明
该植物叶的总皂甙成分具有很强的抗肿瘤作用[ 1、2] 。
本实验采用免疫组织化学方法检测小鼠 S -180肿瘤
组织中的 p53蛋白含量 ,评价龙牙 木叶总皂甙的抗
肿瘤作用 。
·38· ACMP.Feb , 2005 , Vol.33 , No.1
1　材料与方法
1.1　动物
昆明小鼠 ,体重 20±2g ,6 ～ 8周龄 ,雌雄各半 ,黑
龙江中医药大学实验动物中心提供 。
1.2　瘤株
小鼠肉瘤 S180瘤株由黑龙江省肿瘤研究所提供 ,
以腹水传代。
1.3　龙牙 木叶总皂甙　由黑龙江中医药大学药学
院提取并提供。
1.4　P53单抗购于北京中山生物公司。
1.5　方法
无菌抽取传代 7天生长良好的小鼠腹水 ,用生理
盐水 1∶3稀释 ,以 0.1ml 只接种于小鼠右前腋下待其
长为实体瘤 。将接种 S180肿瘤细胞的小鼠随机分为 3
组:龙牙 木叶总皂甙组 ,模型组 ,环磷酰胺组 。以未
接种瘤株的昆明小鼠为正常对照组。于接种瘤细胞
6h后首次给药 ,龙牙 木叶总皂甙组按 100mg kg灌胃
给药 ,环磷酰胺组 30mg kg腹腔注射 ,模型组和正常对
照组以生理盐水 0.2ml 只灌胃。连续给药 8d天 ,每日
1次。处死小鼠剥离瘤组织 ,放入福尔马林中固定 ,病
理常规脱水 ,石蜡包埋 ,切片。将粘有肿瘤组织的载玻
片脱蜡 ,然后用 PBS冲洗 3次 ,3%H2O2 封闭内源性过
氧化物酶活性 ,枸橼酸微波抗原修复 10min ,用 PBS配
制1∶100的抗体 ,然后将 P53抗体加在载玻片上 ,放入
湿盒 4℃孵育过夜 ,加入 PV6000 ,37℃放置 10min ,加入
DAB显色剂 。显色后苏木精复染 ,树胶封片。
1.6　结果判定
应用多媒体病理图文分析系统 MPAS-500对免
疫组化结果进行分析 ,P53蛋白阳性细胞的细胞核呈
棕黄色。
1.7　统计处理　用 t检验 。
2　结果
结果显示 ,龙牙 木叶总皂甙组小鼠肉瘤 S180组
织中的 p53表达与模型组相比明显减少(P <0.05);
环磷酰胺组与模型组相比明显减少(P<0.05);龙牙
木叶总皂甙组与环磷酰胺组相比无明显差异(P>0.05),
结果见表 1。
表 1　龙牙 木叶总皂甙对突变型 p53表达的影响( x±s)
组　别 例　数 P53(阳性单位)
龙牙 木叶总皂甙组 10 40.26±1.79＊＊1)＊2)
模型组 10 42.92±4.00
环磷酰胺组 10 39.06±2.88＊＊1)
　　＊P>0.05 , ＊＊P<0.05
　　1)与模型组相比 2)与环磷酰胺组相比
3　讨论
抑癌基因 p53有两种形式:野生型和突变型。正
常细胞中含野生型 p53基因及其 P53蛋白 ,在 DNA损
伤修复中有着重要的作用 ,P53蛋白是 DNA 损伤后进
行应答和修复的分子物质 ,能维持细胞的的正常生长 、
抑制恶性增殖 、诱导细胞凋亡 ,而突变型 p53基因具有
致癌作用。突变型 P53 蛋白表达增高与 DNA修复能
力的下降有明显的相关性[ 3] ,人类许多肿瘤都存在突
变型 p53基因的蛋白质产物的过量表达 ,由于野生型
P53蛋白半衰期短 ,而且极不稳定 ,难以检出 ,而突变
型P53蛋白半衰期较长 ,容易在细胞核内大量积聚 ,所
以当突变发生后 ,突变型 p53基因的蛋白质产物表达
增加 。因此一般认为免疫组化检测到的 P53蛋白均为
突变型表达。由本实验结果发现龙牙 木叶总皂甙可
以明显抑制突变型 p53的表达(P<0.05)。提示龙牙
木叶总皂甙可能通过某种机制直接或间接的抑制
p53基因的突变 ,促使突变的 p53基因发生逆转 ,恢复
损伤的 DNA修复能力 ,或者通过某种机制抑制突变型
p53表达 ,从而达到抑制肿瘤的作用 。
参考文献:
[ 1] 　匡海学.龙牙 木叶总皂甙抗肿瘤作用的研究[ D] .1995年人参
类植物国际会议论文汇编 , 1995.109.
[ 2] 　吴勃岩 ,王晶.龙牙 木叶总皂甙对荷瘤鼠 TNF-a 的诱生作用
[ J] .中医药学报 , 2003, 31(6):52.
[ 3] 　陆爱平 ,李吉友.DNA 损伤修复能力 、P53蛋白及增殖细胞核抗原
在大肠癌发生过程中的变化[ J] .中国肿瘤临床 , 1997, 2(12):926
-930.
·39·中医药学报 2005 年第 33卷第 1 期