全 文 ：水分别进行稀释 ,使其最终干扰试验质量浓度为0.01 g·L-1 ,
用该浓度溶液和 BET 水分别将 WSE 稀释为含内毒素 0.5
(2λ)、0.25(λ)、0.125(0.5λ)、0.06(0.25λ)EU·m L-1的溶液 ,
与灵敏度为 0.25 EU·m L-1的鲎试剂反应 , 每一浓度重复 4
管 ,并设阴性对照 , 按 2005 年版中国药典[ 1] 细菌内毒素检查
供试品干扰试验项进行试验 ,结果见表 4。
表 2　硫酸阿托品注射液干扰预试验(鲎试剂批号:0602240 ,
λ=0.25 EU·mL-1)
Tab 2　P relimina ry interfe rence test o f at ropine sulfa te injec-
tion(TAL lot No.0602240 ,λ=0.25 EU·mL-1)
样品批号 样品质量浓度/g·L-1
0.5 0.25 0.125 0.062 5 0.031 25 0.016 0.008 NC PC
贵州光正
0611162
NPC
PPC
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上海禾丰
061205
NPC
PPC
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海南制药
060201
NPC
PPC
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--
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++
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++ -- ++
注:NPC:用 BET 水稀释的硫酸阿托品注射液;PPC:含有 2λ浓度细
菌内毒素的硫酸阿托品注射液
表 3　硫酸阿托品注射液干扰预试验(鲎试剂批号:0410270 ,
λ=0.125 EU·m L-1)
Tab 3　P relimina ry interfe rence test o f at ropine sulfa te injec-
tion(TAL lot No.0410270 ,λ=0.125 EU·m L-1)
样品批号 样品质量浓度/mg·mL-1
0.5 0.25 0.125 0.062 5 0.03125 0.016 0.008 NC PC
山东华信
040402
NPC
PPC
--
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++
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浙江瑞新
20040926
NPC
PPC
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新乡市常乐
0610161
NPC
PPC
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天津药业
061228
NPC
PPC
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--
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++
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++
--
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注:NPC:用 BET 水稀释的硫酸阿托品注射液;PPC:含有 2λ浓度细
菌内毒素的硫酸阿托品注射液
表 4　硫酸阿托品注射液的干扰试验(EU·m L-1)
Tab 4 　Interference test of a tropine sulfate injection(EU·
mL-1)
鲎试剂批号
/λ=0.25 样品
内毒素浓度
0.5 0.25 0.125 0.06 NC Es Et
0512072 水溶液 ++++ ++++ ---- ---- -- 0.25
贵州光正
0611162
++++ ++++ ---- ---- -- 0.25
上海禾丰
061205
++++ ++++ ---- ---- -- 0.25
海南制药
060201
++++++++ ---- ---- -- 0.25
0602240 水溶液 ++++++++ ---- ---- -- 0.25
贵州光正
0611162
++++++++ ---- ---- -- 0.25
上海禾丰
061205
++++ ++++ ---- ---- -- 0.25
海南制药
060201
++++ ++++ ---- ---- -- 0.25
[作者简介] 唐芳 ,男 ,硕士 ,主管药师 ,电话:0731-5292092 , E-m ail:tangfang542@126.com
　　正式干扰试验结果表明:3 批硫酸阿托品注射液质量浓
度为0.01 g·L-1 , 用 2 个厂家鲎试剂 , 灵敏度均为0.25 EU·
mL-1进行试验 , 结果 ES 均在0.5 ～ 2.0λ范围之内 , Et 均在
0.5 ～ 2.0 ES 之间 , 符合药典规定 ,确认无干扰。
2.5　样品细菌内毒素检查　按中国药典 2005 年版[ 2] 细菌
内毒素检查法 ,对 19 个生产厂家共 38 批次硫酸阿托品注射
液进行细菌内毒素检查(样品稀释至0.01 g·L-1 , 鲎试剂灵敏
度0.25 EU·mL-1 , 批号 0512072), 结果均符合规定。
3　讨论
由预干扰试验结果可知 , 硫酸阿托品注射液稀释至质量
浓度为0.25 g·L-1后与 2 个厂家 2 个灵敏度的鲎试剂反应均
无抑制性干扰 ,为了使预干扰试验覆盖面广 ,共选择 7个厂家
7 批次样品进行试验。正式干扰试验用质量浓度为0.01 g·L-1
样品 ,用 2 个厂家的鲎试剂 ,结果 Es 均在 0.5 ～ 2.0λ范围之
内, Et均在/ Et 均在0.5 ～ 2.0 ES 之间 , 确认无干扰影响。对
19个厂家共 38 批次硫酸阿托品注射液依法检验(中国药典
2005 年版[ 2]附录细菌内毒素检查法),结果均符合规定。
实验结果证实 ,硫酸阿托品注射液细菌内毒素限值确定
为 50 EU·mg-1 , 可应用鲎试剂进行细菌内毒素法检查。因
此为提高该药品质量标准 , 更有效的控制药品质量 , 建议硫
酸阿托品注射液增加细菌内毒素检查项。
参考文献:
[ 1] 　陈新谦 ,金有豫 ,汤光.新编药物学[ M] .16版北京:人民卫生出
版社 , 2007:336.
[ 2] 　中国药典.二部[ S] .2005:附录 85-88.
[ 3] 　国家药典委员会.临床用药须知 ,化学药和生物制品卷[ S] .
2005:286.
[收稿日期] 2007-11-19
齐墩果酸滴丸的质量控制
唐芳 ,徐虹 ,赵绪元 ,李焕德　(中南大学湘雅二医院临
床药学研究室 ,湖南 长沙 410011)
[ 摘要] 　目的:制定齐墩果酸滴丸的质量标准。方法:采用
薄层色谱法对齐墩果酸进行鉴别;采用高效液相色谱法测定
齐墩果酸含量 , 色谱柱为 Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6
mm , 5 μm), 波长 210 nm , 流动相为乙腈-0.5%的冰醋酸
(90 ︰10), 流速1.0 m L·min-1 , 柱温 30 ℃。结果:高效液相
色谱法的线性范围为 0.005 48～ 0.131 g·L-1 ;R2为0.999 8。
滴丸中齐墩果酸的平均回收率为101.27%, RSD 为0.99%(n
=5)。结论:该方法简便 、快速 、准确 , 可作为齐墩果酸滴丸
的质量控制方法。
[ 关键词] 　齐墩果酸;滴丸;高效液相色谱法;质量控制
[ 中图分类号] R927　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213
(2008)16-1416-03
　　齐墩果酸(o leanolic acid , OA), 又名庆四素 , 五环三萜类
化合物 ,为白色结晶性粉末 , 无臭 、无味 ,对酸碱不稳定 , 难溶
于水 ,可溶于乙醚 、氯仿 、丙酮 、甲醇 、乙醇等有机溶剂。临床
上现有的 OA 的制剂主要用于治疗急性黄疸型和慢性中毒
·1416· 中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 16期 Chin H osp Pharm J , 2008 Aug , Vol 28 , No.16
型肝炎并作为抗癌辅助药物[ 1-2] 。由于 OA 的脂溶性极强 ,
故现有制剂的溶出度相对较低。为提高 OA 制剂的生物利
用度 ,本实验将其制备成滴丸 , 并对滴丸的质量标准进行了
研究[ 3-4] 。
1　材料
HP1100 系列高效液相色谱仪(四元泵 , DAD 紫外检测
器 ,手动进样 , HP 化学工作站(H PCH EM));齐墩果酸对照
品(中国药品生物制品检定所 , 批号 709-9803);齐墩果酸原
料(长沙九芝堂制药厂 , 批号 20040306);齐墩果酸滴丸(中
南大学湘雅二医院药剂科 , 批号 20070318 , 20070319 ,
20070320);PEG 6000;PEG 4000;聚山梨酯 80;轻质液状石
蜡油;乙腈 、甲醇均为色谱纯 ,其余试剂均为分析纯。
2　处方及制备
2.1　处方　PEG 4000 8.5 g;PEG 6000 18.5 g;聚山梨酯-
80 1.5 g;OA 1.5 g;共制 1 000 粒。
2.2　制备　按照处方称取 PEG 4000 、PEG 6000、聚山梨酯-
80 等辅料研匀 ,加热融化 ,将齐墩果酸粉末加至已融化的基
质中 ,充分搅拌均匀 , 倒入滴丸装置中 ,将温度控制在 75 ～ 80
℃,滴入已冷却的甲基硅油(温度控制在 10 ～ 15 ℃)中 ,成型
后取出 ,用干滤纸吸去表面的甲基硅油 , 室温下自然干燥后
即得。
3　鉴别
3.1　对照品溶液的制备　精密称取在 110 ℃干燥至恒重的
齐墩果酸对照品13.71 mg 于 50 mL 量瓶中 , 加甲醇至刻度 ,
配成 1 mL 中约有0.274 mg 主药的储备液 , 备用;取储备液
10 mL , 置于 50 mL 量瓶中 ,用甲醇定容 , 经微孔滤膜滤过后
得到每 1 m L溶液中含有0.054 8 mg 的对照品溶液[ 4] 。
3.2　齐墩果酸滴丸供试品溶液的制备　取 4 粒齐墩果酸滴
丸 ,精密称量 , 捣碎 ,加入适量甲醇溶解 ,超声 ,得到澄清溶液
后 ,用甲醇定容至 100 m L , 滤过即得齐墩果酸滴丸供试品溶
液。
3.3　齐墩果酸原料供试品溶液的制备　精密称取齐墩果酸
原料137.5 mg ,加入适量甲醇溶解 , 超声 , 得到澄清溶液后 ,
用甲醇定容至 25 mL ,滤过 , 精密量取 1 m L 至 100 mL 量瓶
中 ,用甲醇定容 , 即得齐墩果酸滴丸原料供试品溶液。
3.4　阴性样品溶液的制备　按参考文献处方给出的比例 ,
加入除主药外的辅料 ,加热混溶后 , 加入滴丸制备仪 , 按齐墩
果酸滴丸制备方法制备 , 再称取与供试品相应的量 , 加甲醇
溶解 ,余按“ 3.2”项下操作 ,得阴性样品溶液。
3.5　鉴别　精密吸取供试品溶液 、对照品溶液 2 μL , 分别点
样于同一硅胶 G 薄层板上 , 以环己烷-丙酮-醋酸乙酯(5∶2∶
1)为展开剂 ,展开 、取出 、晾干 、喷以 10%硫酸乙醇溶液 , 在
100 ℃加热至斑点显色清晰 , 即在与对照品色谱相应的位置
上 ,显相同紫红色的斑点 , 结果见图 1。
4　含量测定
4.1　色谱条件　色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6
mm , 5 μm),波长:210 nm ,流动相:乙腈-0.5%的冰醋酸(90∶
10),流速:1.0 m L·min-1 , 柱温:30 ℃, 以齐墩果酸色谱峰计
算理论塔板数为 50 370。
4.2　线性范围　精密量取齐墩果酸对照品储备液(0.274 g
·L-1)0.5 , 1.0 , 2.0 , 4.0 , 12.0 mL 分别置 25 mL 量瓶中 ,加甲
醇稀释至刻度 ,摇匀 , 各取 20 μL 进样 , 记录谱图 , 测得峰面
积(A)与浓度(C)的线性方程为 A=1 907.6C-1.20 , R2 =
0.999 8。结果表明 , 其齐墩果酸在0.005 48～ 0.131 g·L-1范
围内呈良好的线性关系。
图 1　齐墩果酸各种样品溶液薄层色谱图
1 、2 、3-滴丸样品溶液;4-对照品溶液;5 、6-原料溶液;7-阴性样品溶液
Fig 1　T LC chromatatogram s of the reference and sample
1 、2 、3-sample of dropping pi lls;4-referen ce;5 、6-sample of raw mate-
rial;7-negat ive sample
4.3　加样回收率　取已知含量的同一齐墩果酸滴丸样品
(批号 20070318)4 粒各 6 份 , 分别精密加入对照品储备液
(0.274 g·L-1)20 mL ,定容至 100 m L , 按供试品溶液制备法
制备 ,照上述色谱条件测定 , 按以上公式计算回收率 , 结果见
表 1。
表 1　回收率试验结果(n=6)
Tab 1　Results of recover y(n=6)
编号 样品/m g
加入量
/mg
测得量
/m g
回收率
/ %
平均回收率
/ %
RSD
/ %
1 6.11 5.48 11.70 102.01
2 6.11 5.48 11.78 101.64
3 6.11 5.48 11.60 100.08 101.27 0.99
4 6.11 5.48 11.85 102.24
5 6.11 5.48 11.67 100.69
6 6.11 5.48 11.70 100.95
4.4　精密度试验　精密吸取同一对照品溶液 20 μL , 注入高
效液相色谱仪 ,按照上述确定的色谱条件 ,重复测定 6 次 ,记
录峰面积 ,主成份峰的峰面积积分值的 RSD 为1.34%。结
果表明 ,仪器整个检测系统的精密度良好。
4.5　稳定性试验　精密吸取同一样品溶液 , 分别在 0 , 2 , 4 ,
6 , 8 h 进样 ,记录主成份峰面积 ,结果 5 次测定的峰面积积分
值的 RSD为1.52%。说明供试品溶液在 8 h 内稳定性好。
4.6　重复性试验　取同一样品(批号 20070318)5 粒 , 按
“ 2.2”项下操作 ,齐墩果酸平均含量为每粒1.51 mg , RSD为
1.2%,表明该方法的重复性良好。
4.7　检测限 、定量限的确定　以信噪比为 3∶1或2∶1时相应
浓度或注入仪器的量确定为检测限;以信噪比为10∶1时相应
浓度或注入的量确定为定量限。测定结果为检测限为
0.009 37 g·L-1 , 定量限为0.018 47 g·L-1 。
4.8　含量测定　分别精密吸取对照品溶液 、供试品溶液及
阴性样品溶液各 20 μL ,每种溶液进样 3 次 , 在上述色谱条件
下进行分析 ,以排除空白干扰。记录色谱图(见图 2),通过峰
面积计算 OA 的含量 , 结果见表 2。
以上结果根据外标一点法计算得到。测定的齐墩果酸
的含量与标识含量相比 ,为108.74%, 在 90%～ 110%之间。
5　杂质限量检查
因为齐墩果酸是一个末端吸收的物质 , 稀释 100 倍后 ,
在紫外的吸收不强 , 所以不采用主成分自身对照法 , 而采用
峰面积归一化法。按含量测定 , 配制对照品溶液和供试品 、
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阴性样品溶液;色谱条件不变 , 但保留时间为原来的 2 倍 ,分
别进样后 ,记录图谱(见图 3)。杂质峰面积之和应小于主峰
面积的 1%, 结果表 3。
图 2　齐墩果酸高效液相色谱图
A.对照品;B.供试品;C.阴性样品溶液;1-齐墩果酸
Fig 2　HPLC ch romatatogram s of oleanolic acid
A.reference subs tance;B.sam ple;C.negative sam ple;1-oleanolic acid
表 2　齐墩果酸滴丸样品测定结果(n=3)
Tab 2　Content determina tion of sample(n=3)
批号 OA 含量/mg/丸 平均值/mg/丸 RSD/ %
20070318 1.54
20070319 1.52 1.52 0.85
20070320 1.51
图 3　齐墩果酸 HPLC 图
A.原料样品;B.供试品;C.阴性样品溶液;1-齐墩果酸
Fig 3　HPLC ch romatatogram s of oleanolic acid
A.raw material sample;B.sam ple;C.negative sample;1-oleanolic
acid
表 3　齐墩果酸滴丸杂质限量检查结果(n=3)
Tab 3 　Content determina tion results o f im purities in the
pills(n=3)
批号 杂质峰面积 主峰面积 杂质含量/ %
20070318 64.56 126.61 0.51
20070319 63.61 127.22 0.50
20070320 62.20 126.94 0.49
6　讨论
齐墩果酸性质较稳定 ,因此薄层色谱法可作为滴丸的定
性鉴别方法 ,并在相应的位置上得到了清晰的斑点。
流动相开始采用文献报道的乙腈-甲醇=(85∶15), 峰形
不好 ,拖尾明显;考虑到齐墩果酸是一个弱酸性物质 , 加入适
量的醋酸以降低流动相的 pH 值 , 可以增大分配系数 , 所以
本实验选择用0.5%醋酸溶液代替水溶液 ,图谱分析结果表
明 ,保留时间适中 , 分离效果好。
齐墩果酸为难溶于水的药物 ,其低溶出度影响其生物利
用度 ,而通过固体分散技术将其制成滴丸 , 可显著提高其生
物利用度[ 5] ;对滴丸进行质量标准研究 , 采用高效液相色谱
法测定齐墩果酸含量及滴丸中的杂质含量 ,可以很好地对其
质量进行控制 ,与原来片剂 、胶囊剂的质量标准相比较 ,质量
标准进一步完善。
[作者简介] 江丽 ,女 ,硕士 ,药师 ,电话:13914711259 , E-mail:jiangli718@yahoo.com.cn
参考文献:
[ 1] 　田丽婷 ,马龙 ,堵年生.齐墩果酸的药理作用研究概况[ J] .中国
中药杂志 , 2002 , 27(12):884-886.
[ 2] 　向大雄 ,陶昱斐 ,王峰 ,等.齐墩果酸固体分散体形成和增溶机
制研究[ J] .中草药 , 2002 , 33(4):311-313.
[ 3] 　徐成坤 ,唐芳 ,冯裕.HPLC测定齐墩果酸滴丸中齐墩果酸的含
量[ J] .中南药学 , 2005 , 3(2):80-81.
[ 4] 　唐芳 ,杨绍华 ,刘家稳 , 等.齐墩果酸的制备及其体外溶出度研
究[ J] .中南药学 , 2005 , 3(6):352-354.
[ 5] 　唐芳 ,郭歆 ,李焕德.Beagle犬血浆中齐墩果酸浓度的测定[ J] .
中国药学杂志 , 2007 , 42(12):926-928.
[收稿日期] 2007-12-04
高效液相色谱法测定复方黄芩胶囊中
黄芩苷的含量
江丽 ,申国庆 ,龚春燕　(中国医学科学院 中国协和医科
大学皮肤病研究所药剂科 ,江苏 南京 210042)
[ 摘要] 　目的:建立高效液相色谱法测定复方黄芩胶囊中黄
芩苷的含量。 方法:采用 Wate rs symme try C18色谱柱(250
mm×4.6 mm , 5 μm), 流动相为甲醇-0.4%磷酸(50∶50),检
测波长 280 nm ,柱温 30 ℃。结果:黄芩苷在 10～ 80 mg·L-1
范围内有良好线性关系(r=0.999 8), 平均加样回收率为
101.82%, 精密度良好(RSD为 1.39%)。结论:本方法测定
复方黄芩胶囊中黄芩苷的含量 , 方法简便 、准确 , 结果稳定 ,
可为复方黄芩胶囊的质量评价提供科学依据。
[ 关键词] 　复方黄芩胶囊;黄芩苷;高效液相色谱法
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
5213(2008)16-1418-02
　　痤疮是一种多因素引起的毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮
肤病 ,主要发生于青春期男女。目前认为痤疮的发生主要与
性激素水平改变 、皮脂分泌过多 、毛囊口上皮角化过度 、毛囊
内痤疮短棒菌苗的增殖及遗传 、血液黏度改变等有关 , 其中
性激素水平改变被认为是最主要的因素。复方黄芩胶囊是
由我院传统中药汤剂改变剂型制得 ,由黄芩 、丹参 、当归 、枇
杷叶 、蒲公英等中药组成 ,具有抗菌消炎 、活血消肿 、调节内
分泌等作用。经多年临床研究表明 ,复方黄芩胶囊是一种治
疗痤疮较好的药物。黄芩苷为该药主药黄芩的主要成分 ,本
实验利用高效液相色谱法对黄芩苷进行了含量测定[ 1-2] , 为
复方黄芩胶囊的质量标准提供依据。
1　材料
Water s 1525高效液相色谱系统 , Wate rs 2487 紫外检测
器 ,Wate rs Breeze色谱数据工作站;黄芩苷对照品(中国药品
生物制品检定所 ,批号 110715-200514);复方黄芩胶囊(本院
自制制剂 , 委托江苏南京中山制药厂加工 , 批号 060715 ,
060822 , 061010);甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯;水为
注射用水。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　对照品溶液　精密称取 60 ℃干燥至恒重的黄芩苷
对照品 5 mg ,置于 100 mL 量瓶中 ,加入适量甲醇使之溶解 ,
·1418· 中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 16期 Chin H osp Pharm J , 2008 Aug , Vol 28 , No.16