全 文 ：正辛醇 /水系统中，药物与溶剂的相互作用为疏水相
互作用，它特别适合于中性分子。离子型药物不太
容易进入油相(水饱和的正辛醇)中，从而使该系统
的应用受到一定的限制。但对于羟基喜树碱而言，
药物分子的疏水性占据了主导地位，所以药物在油 /
水系统中的分配与药物在大鼠小肠中吸收系数表现
出了良好的线性关系。
参考文献:
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齐墩果酸脂质体在大鼠体内药代动力学的研究
陈洪轩1， 牛江秀1， 肖衍宇2， 陈志鹏3， 和 平1， 游国叶1
(1. 河南大学药物研究所，河南 开封 475004;2. 中国药科大学 药学院，江苏 南京 210009;3. 南京中医药
大学 药学院，江苏 南京 210046)
收稿日期:2009-01-25
作者简介:陈洪轩(1952 －)，男，副教授，硕士生导师，从事现代给药系统和制剂新技术研究。Tel:(0378)3880605 E-mail:chenhongxuan52
@ 126. com
关键词:齐墩果酸;脂质体;药代动力学;大鼠
摘要:目的:制备齐墩果酸脂质体，研究齐墩果酸脂质体在大鼠体内的药代动力学。方法:采用乙醇注入-探头超声法制
备齐墩果酸脂质体;大鼠分别尾静脉注射齐墩果酸脂质体和齐墩果酸溶液剂，用反相高效液相色谱法测定不同时间血浆
中齐墩果酸的浓度，采用 3p97 程序计算药代动力学参数，并进行统计学分析。结果:制得的脂质体透射电镜下为圆形或
类圆形的小囊泡，平均粒径为(206. 4 ± 4. 7)nm，包封率为(97. 74 ± 1. 34)%;齐墩果酸脂质体和自制的溶液剂经大鼠尾
静脉注射后，t1 /2α分别为(4. 22 ± 1. 86)和(0. 80 ± 0. 34)min;t1 /2β分别为(33. 59 ± 12. 53)和(15. 65 ± 7. 91)min;AUC 分
别为(240. 13 ± 23. 62)和(168. 31 ± 18. 47)μg /(mL·min)，两种制剂的 t1 /2β 和 AUC0-t经方差分析后均存在显著性差异
(P < 0. 05)，齐墩果酸脂质体显著增加了齐墩果酸的 AUC，延长了其在血液循环中的时间。结论:制备的齐墩果酸脂质体
包封率较高，粒度均匀;与非脂质体相比，齐墩果酸脂质体静脉注射给药后，药代动力学参数发生了明显的改变。
中图分类号:R969. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2010)04-0569-04
Pharmacokinetics of oleanolic acid liposomes in rats
CHEN Hong-xuan1， NIU Jiang-xiu1， XIAO Yan-yu2， CHEN Zhi-peng3， HE Ping1， YOU Guo-ye1
(1. Institute of Chinese Materia Medica of Henan University，Kaifeng 475004，Henan，China;2. China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，
Jiangsu，China;3. Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210046，Jiangsu，China)
KEY WORDS:oleanolic acid;liposomes;pharmacokinetics;rat
ABSTRACT:AIM:To study the pharmacokinetics of oleanolic acid liposomes in rats. METHODS:Oleanolic
acid liposomes were prepared by ethanol injection-sonication;The pharmaceutical properties including morphology，
encapsulation efficiency，particle size，zeta potential were determined. Rats were injected with oleanolic acid lipo-
somes and oleanolic acid solution via the tail，respectively. The plasma concentrations of sample in rats were assayed
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by RP-HPLC. The pharmacokinetic parameters were computered by 3P97 program package. RESULTS:Oleanolic
acid liposomes showed almost spherical，the mean diametre was (206. 4 ± 4. 7)nm. The encapsulation efficiency of
oleanolic acid liposomes could be more than 90% based on orthogonal design，and no haemolyticus existed. The
plasma concentration-time curves of the oleanolic acid liposomes conformed to a two-compartment model. T1 /2β of
oleanolic acid liposomes was (33. 59 ± 12. 53)min，AUC was (240. 13 ± 23. 62) (μg /mL·min)，obviously
higher than that of the control preparation. CONCLUSION:The oleanolic acid liposomes with high entrapment ef-
ficiency and even size has a good pharmacokinetic parameters by comparison with non-liposomes.
齐墩果酸(oleanolic acid，OA)为一种五环三萜
类化合物，以游离体和配糖体的形式广泛分布于青
叶胆、女贞子等双子叶植物的 60 个科约 190 种植物
中 ［1］。OA具有多种药理作用:抗炎、抗肿瘤、降血
脂和血糖、强心、抗心律失常、抗高血压等［2 － 7］。20
世纪 80 年代的研究发现，OA 可使变性坏死的肝组
织恢复正常，减轻丙氨酸活力下降，肝组织炎症反应
减弱，血种丙种球蛋白下降，并能促进干细胞再生，
使坏死区迅速修复［8］。临床上 OA制剂主要是口服
制剂，用于治疗急性黄疸型和慢性中毒型肝炎，并作
为抗癌辅助药物，且毒性低副作用少［9］。但是由于
OA的水不溶性及溶出速度很慢、口服生物利用度
差，限制其在临床上的应用。故而为了使药物快速
起效且提高治疗效果，有必要对其进行静脉注射剂
的开发。本实验成功地将 OA 制成脂质体，并对其
进行了结构表征，大鼠药动学研究表明所制得的
OA脂质体具有一定的缓释作用，为下一步的临床
前研究提供基础支持。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 ZFQ-85A 型旋转蒸发器(上海电子管
十一厂);JY92 2D 探头超声仪(宁波新芝科器研究
所);KQ-5200 DB 型数控超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司);METTLER-AE200 METTLER 电
子天平(瑞士 Mettler 公司);H-7000 型透射电镜仪
(日本 Hitachi 公司);Zetasizer 3000HS 激光粒度分
析仪(Malvern 公司);高效液相色谱仪(SPD-6A 紫
外检测器、LC-5A泵、7125 进样阀);WH-1 微型旋涡
混合仪(上海泸西分析仪器厂);LG16-W 高速离心
机(北京医用离心机厂)。
1. 2 药品及试剂 OA 原料药(含量为 98. 5%，吉
林省医药工业研究所);注射用大豆磷脂(纯度 >
92%，上海太伟药业有限公司，批号:060411);胆固
醇(中国医药集团);甲醇(色谱纯，南京化学试剂一
厂);Sephadex G-50 (Sweden);吐温 － 80(上海达众
化公有限公司);其它药品、试剂均为分析纯。
1. 3 动物 Wistar 大鼠，♂性，体重 180 ～ 220 g，由
河南省动物实验中心提供。
2 实验方法
2. 1 OA脂质体的制备 采用乙醇注入-探头超声
法制备 OA脂质体［10］。定量称取大豆磷脂、胆固醇
和 OA溶于适量乙醇中，将制得的类脂溶液缓慢匀
速注入 45℃恒温的磷酸盐缓冲溶液中，继续恒温搅
拌除去乙醇，得到 OA脂质体混悬液，探头超声使粒
径到达要求。
2. 2 OA脂质体包封率的测定 本试验采用 Sepha-
dexG-50 葡聚糖凝胶柱色谱法测定包封率:精密吸
取 OA脂质体混悬液 0. 5 mL，置于 SephadexG-50 柱
(15 mm ×170 mm)，先用蒸馏水洗脱脂质体，再用
含有 0. 2% Tween-80 的 10%乙醇洗脱游离药物。收
集含有脂质体的部分，精密吸取该液体 1 mL 置 5
mL量瓶，用甲醇溶解定容，HPLC 测定峰面积，根据
标准曲线方程:C = 2. 904 9 × 10 －4A + 0. 126 9(R =
0. 999 8)，计算最终包裹在脂质体中的 OA 浓度
(C)。再精密吸取未过柱脂质体 0. 5 mL 置 10 mL
量瓶，用甲醇溶解定容，测定游离的和包裹的总药物
浓度 C总。包封率计算方法如下:包封率 = C /C总 ×
100%。
2. 3 脂质体粒径及其 zeta 电位的测定 用 Zetasi-
zer 3000HS 激光粒度分析仪测定脂质体的 zeta 电
位、平均粒径和多分散系数。
2. 4 脂质体形态的检测 取适量脂质体混悬液于
铜网上，用磷钨酸进行负染置透射电镜下，观察脂质
体的形态。
2. 5 药动学研究
2. 5. 1 血浆样品的处理 精密移取血浆样品 100
μL，置于 1. 5 mL 的塑料离心管中，加入乙腈 100
μL，涡旋 30 s，15 000 r /min 离心 10 min，取上清液
进样 20 μL，记录色谱峰面积。
2. 5. 2 标准曲线的制备 精密称取 10 mg 的 OA，
置于 10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成浓度
为 1 mg /mL 的贮备液，分别移取此溶液适量置 10
mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成 OA 浓度分别
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为 10、25、50、100、200、400、800、1 000 μg /mL 的标
准品溶液，分别精密移取以上各标准品溶液 2 μL至
98 μL的空白血浆中，再加入乙腈 100 μL，按血浆样
品的处理方法操作，得到浓度分别为 0. 10、0. 25、0.
50、1. 00、2. 00、4. 00、8. 00、10. 00 μg /mL 的体内标
准品溶液，按血浆样品的处理方法操作，以峰面积
(A)对浓度(C)作图，得到线性回归方程。
2. 5. 3 方法回收率实验 在空白大鼠血浆中加入
OA标准品溶液，使其浓度分别为 0. 25、2. 00、8. 00
μg /mL，按“血浆样品的处理”操作，计算测得量，与
实际加入量比较，计算回收率。
2. 5. 4 方法精密度试验 制备 0. 25、2. 00、8. 00
μg /mL的 OA 血浆样品，按“血浆样品的处理”操
作，测定日内与日间(3 d内)精密度。
2. 5. 5 OA 脂质体大鼠药动学研究 12 只大鼠随
机分成两组，每组 6 只，均按照 7. 8 mg /kg 的剂量给
药，第一组尾静脉注射 OA脂质体，第二组尾静脉注
射 OA 自配的溶液剂(取 10 mg 的 OA，超声溶于
PEG400 与葡萄糖注射液的混合溶剂中，0. 22 μm滤
膜过滤即得)，给药后分别于 3、5、10、15、30、45、60、
90、120、240 min时间取点，按“血浆样品处理”操作
后进样测定，代入标准曲线计算 OA的血药浓度，血
药浓度 －时间数据经 3p97 药动学计算程序处理。
3 结果
3. 1 脂质体粒径及其 zeta 电位测定 OA 脂质体
平均粒径为(206. 4 ± 4. 7)nm，多分散指数为 0. 186
± 0. 02，zeta电位为 －(21. 5 ± 3. 6)mV (n = 3)。
3. 2 脂质体形态测定 本法制备的 OA 脂质体为
均一、稳定的混悬液，在透射电镜下观察可见圆形或
类圆形的小囊泡，分布比较均一，电镜照片见图 1。
图 1 OA脂质体透射电镜照片
Fig. 1 TEM image of oleanolic acid liposome
3. 3 脂质体包封率的测定 采用葡聚糖凝胶柱层
析法测得包封率为(97. 74 ± 1. 34)%(n = 3)。结果
表明采用乙醇注入法具有较高的包封率，符合药典
规定。
3. 4 大鼠体内的药物动力学实验
3. 4. 1 方法专属性考察 由图 2 可见，在此液相条
件下，血浆中杂质不干扰样品的测定，OA 的保留时
间为 13. 645 min。
图 2 大鼠血浆 HPLC色谱图
A. 空白血浆;B.空白血浆加入 OA;C. 给药 3 min后大鼠血浆
Fig. 2 Typical chromatograms of rat plasma
A. blank plasma B. blank plasma with OA C. rat plasma after 3 min
of injection
3. 4. 2 标准曲线的制备 由试验可得，OA 的浓度
C和峰面积 A 之间有良好的线性关系，标准曲线方
程为 C = 0. 409 2A + 81. 997 9，r = 0. 999 5 (n = 6)，
线性范围 0. 1 ～ 10 μg /mL。低、中、高三种浓度的平
均回收率分别为 107. 25%、99. 40% 和 107. 25%，
低、中、高三种浓度的日内精密度 < 5%，日间精密度
分别为 < 10%，均符合要求，以信噪比(S /N)≥3
计，最低检测限为 0. 02 μg /mL。
3. 4. 3 药动学结果分析 OA 溶液剂和 OA 脂质
体在大鼠体内的血药浓度-时间曲线见图 3。结果
表明大鼠尾静脉注射 OA 溶液剂与 OA 脂质体后两
者在大鼠体内过程均符合权重系数为 1 /C 的二室
模型，药动学参数见表 1。
图 3 OA溶液和脂质体大鼠静脉给药后的血药浓度-
时间曲线图(n =6)
Fig. 3 Mean plasma concentration-time curve after olean-
olic acid solution and liposome intravenous injection
(n =6)
大鼠的体内药动学结果表明，OA 脂质体能在
体内较长时间维持较高的血药浓度，从二者的药代
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动力学参数可知，将 OA 包封于脂质体中能明显改
善其体内药动学，与自制的 OA溶液剂相比，AUC提
高了 1. 43 倍，T1 /2α和 T1 /2β均有所增加。
表 1 OA溶液和脂质体大鼠体内的药动学参数(n =6)
Fig. 1 The parameter of in vivo pharmacokinetics of
OA solution and liposome in rat (n =6)
参数 单位 齐墩果酸溶液 齐墩果酸脂质体
A μg·mL －1 45. 59 ± 30. 82 9. 518 ± 7. 53
α min －1 0. 86 ± 0. 50 0. 16 ± 0. 09
B μg·mL －1 5. 10 ± 2. 74 3. 761 ± . 96
β min －1 0. 04 ± 0. 02 0. 02 ± 0. 01
Vc μg·μg － 1·mL 19. 72 ± 9. 15 50. 98 ± 23. 11
t1 /2α min 0. 80 ± 0. 34 4. 22 ± 1. 86*
t1 /2β min 15. 65 ± 7. 91 33. 59 ± 12. 53*
k21 min － 1 0. 13 ± 0. 09 0. 06 ± 0. 02*
k10 min － 1 0. 30 ± 0. 18 0. 05 ± 0. 03*
k12 min － 1 0. 48 ± 0. 26 0. 07 ± 0. 03*
AUC μg·mL －1·min 168. 31 ± 18. 47 240. 13 ± 23. 62*
CLs μg·min －1·μg － 1·mL 5. 94 ± 3. 14 2. 819 ± 1. 57*
* P < 0. 05
4 讨论
脂质体的制备方法很多，有薄膜分散法、乙醇注
入法、逆相蒸发法、冻融法等。本实验成功地采用乙
醇注入法制备了 OA脂质体，结果表明，采用乙醇注
入法制得的脂质体为淡蓝色略透明的混悬液，粒径
分布均匀，包封率高达(97. 74 ± 1. 34)%，粒径为
(206. 4 ± 4. 7)nm，制剂无溶血作用，适合静脉注
射;粒径大小是影响脂质体在体内分布和命运的一
个重要因素，作者采用超声过滤法控制粒径在
(206. 4 ± 4. 7)nm，该粒径范围内的脂质体易被巨
噬细胞吞噬，靶向到肝、脾等网状内皮系统丰富的器
官，使 OA脂质体进入体循环后携带药物进入肝组
织的几率增加，提高药物的疗效。
由于 OA强疏水性，造成脂质体包封率测定的
困难。本研究采用葡聚糖凝胶柱层析法分离 OA脂
质体与游离 OA，试验中发现，当 OA 脂质体用蒸馏
水洗脱时，脂质体被完全洗脱，但游离 OA不能从葡
聚糖凝胶柱上洗脱下来。因此尝试采用二级洗脱的
柱层析法，即先用蒸馏水洗脱脂质体，再用第二种洗
脱液洗脱游离药物。作者曾尝试分别用 0. 5%
Tween-80 溶液、20%乙醇溶液、含有 0. 2% Tween-80
的 10%乙醇溶液作为洗脱液来洗脱游离药物，结果
三者均有洗脱能力，但 0. 5% Tween-80 溶液洗脱游
离药物后，进行 HPLC分析时发现，高浓度的 Tween-
80 对含量分析有较大的干扰;20%的乙醇溶液对葡
聚糖凝胶有较强的脱水作用，每次做完后须将凝胶
柱拆下来用蒸馏水浸泡恢复，所以操作比较复杂;实
验中发现含有 0. 2% Tween-80 的 10%乙醇溶液能较
好的洗脱游离药物，不会使葡聚糖凝胶产生脱水作
用，且不影响 OA的含量分析。最终选择含有 0. 2%
Tween-80 的 10%乙醇溶液洗脱游离药物，使脂质体
与游离药物能达到良好的分离效果。
本研究建立了 HPLC测定大鼠血浆中 OA 的含
量，与 HPLC-MS法［11］相比，该法降低了研究成本，
且分析速度快。应用本方法，研究了大鼠尾静脉注
射 OA脂质体后，其血浆中的药物浓度，由大鼠体内
药代动力学测定结果表明，以脂质体作为 OA 的载
体制备静脉注射制剂，与自制的 OA 溶液剂相比，
t1 /2α、t1 /2β和 AUC均有所增加。
本研究用一种简单的方法制备了具有多重优点
的 OA 脂质体注射剂，为 OA 临床用药提供一种高
疗效的制剂品种。
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