全 文 ：江西农业大学学报 2015，37(5) :914 － 919 http:/ / xuebao． jxau． edu． cn
Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis DOI:10． 13836 / j． jjau． 2015139
朱波，华金渭，刘昆，等．珍稀药材三叶青种质资源遗传多样性的 ISSＲ分析［J］．江西农业大学学报，2015，37(5) :914 －919．
珍稀药材三叶青种质资源
遗传多样性的 ISSＲ分析
朱 波1，2，华金渭1* ，刘 昆1，吉庆勇1，吴剑锋3，齐 川3
(1．浙江省丽水市农业科学研究院，浙江 丽水 323000;2．浙江中医药大学，浙江 杭州 310053;3．浙江省丽水市中
药材产业发展中心，浙江 丽水 323000)
摘要:利用 ISSＲ分子标记，对三叶青全国主分布区 24 份种质资源的遗传多样性与亲缘关系进行了研究。结果
显示:(1)从 101 个引物里筛选出 22 个能扩增出清晰具多态性的引物，共扩增出条带 169 条，片段大小在 450 ～
2 200 bp，其中多态性条带 77 条，多态性比例为 46． 7%。(2)NTSYSpc2． 10e软件分析显示，供试三叶青种质资
源遗传多样性较一般，相似系数在 0． 77 ～ 0． 99，浙江庆元种质与广西钟山种质亲缘关系最远。(3)UPGMA 法
聚类分析显示，24 份样品被分为 4 大类，浙江种质全部聚在第Ⅰ类，第Ⅱ类以江西、广西、湖北、湖南等种质为
主，湖南怀化与广西钟山为第Ⅲ类，贵州种质单独聚为第Ⅳ类。研究表明，ISSＲ分子标记适用于三叶青的遗传
多样性和亲缘关系分析，研究成果首次从分子水平为合理引种、驯化、保护和利用三叶青野生资源提供了重要
的参考依据和数据支持。
关键词:三叶青;种质资源;遗传多样性;ISSＲ
中图分类号:S567． 23 + 9 文献标志码:A 文章编号:1000 － 2286(2015)05 － 0914 － 06
ISSＲ Analysis of Genetic Diversity of Tetrastigma hemsleyanum，
a Ｒare Chinese Medicinal Herb
ZHU Bo1，2，HUA Jin-wei1* ，LIU Kun1，JI Qing-yong1，WU Jian-feng3，QI Chuan3
(1． Lishui Academy of Agricultural Sciences，Lishui 323000，China;2． Zhejiang Chinese Medical Univer-
sity，Hangzhou 310053，China;3． Lishui Development Center of Chinese Medical Herbs Industry，Lishui
323000，China)
Abstract:Genetic diversity and relationship of 24 germplasms from Tetrastigma hemsleyanum were ana-
lyzed by ISSＲ． The results were as follows:(1)22 primers which could amplify distinct and polymorphic bands
were selected from 101 ones，169 bands (77 polymorphic ones)were amplified whose sizes ranged from 450 －
2 200 bp，the ratio of polymorphic bands was 46． 7% ．(2)There was a certain genetic diversity among 24 germ-
plasms from Tetrastigma hemsleyanum analyzed by NTsys2． 10e，the range of similarity coefficient was from 0． 77
to 0． 99． Besides，there was the farthest genetic relationship between NO． 2 and NO． 18 germplasms．(3)24 sam-
ples were divided into 4 groups by UPGMA:all Zhejiang samples were clustered in groupⅠ，groupⅡwas based on
Jiangxi，Guangxi，Hubei and Hunan germplasms，NO． 4 and NO． 18 were in groupⅢ，and the Guizhou
收稿日期:2014 － 12 － 26 修回日期:2015 － 03 － 20
基金项目:国家自然科学基金项目(81303305)和浙江省丽水市科技计划项目(20120304，2011NZH0204)
作者简介:朱波(1986—) ，男，博士生，主要从事中药材育种、化学分析与分子鉴定研究，E-mail:aurora0119@ 163．
com;* 通信作者:华金渭，研究员，E-mail:hjwls@ 126． com。
第 5 期 朱波等:珍稀药材三叶青种质资源遗传多样性的 ISSＲ分析
germplasm was in the Ⅳ group individually． The results indicated that ISSＲ could be used to analyze genetic
diversity and relationship in Tetrastigma hemsleyanum． The conclusion firstly offered valuable references and
data at the molecular level for introduction，acclimation，protection and utilization of Tetrastigma hemsleyanum
wild resources．
Key words:Tetrastigma hemsleyanum;germplasm resource;genetic diversity;ISSＲ
三叶青是民间珍稀中药材，又名金线吊葫芦、石老鼠、蛇附子、石猴子、石抱子、拦山虎、雷胆子、破石
珠、土经丸，原植物为葡萄科(Vitaceae)崖爬藤属(Tetrastigma planch)植物三叶崖爬藤(Tetrastigma hems-
leyanum Diels et Gilg) ，块根或全草入药，主要分布于我国浙江、湖北、湖南、江西、重庆、四川、广东、福
建、广西、贵州等地，具有清热解毒，祛风化痰，活血止痛的功能，临床主要用于治疗高热惊厥、腹痛、肺
炎、哮喘、肝炎、肿瘤等症［1-4］。目前三叶青的研究报道主要集中于生药形态学、组织培养、化学成分、药
理及临床应用等［5-10］，而三叶青种质资源遗传多样性研究鲜有报道。
ISSＲ(inter-simple sequence repeat)分子标记即微卫星间 DNA多态性，是由 Zietkiewicz等［11］于 1994
年提出创建的分子标记技术，该技术稳定性好，多态性高，实验操作简便且快速，还可以揭示基因组水平
的某些特征，且呈孟德尔式遗传，该技术一经问世就被广泛用于遗传多样性分析、品种分子鉴定和系统
发生关系等研究［12-18］。本试验收集全国三叶青主产区种质资源 24 份，提取基因组 DNA，筛选引物进行
ISSＲ-PCＲ扩增，分析三叶青种质资源遗传多样性，以期为三叶青遗传图谱构建与分子辅助选育新品种
提供参考。
1 材料与方法
1． 1 供试材料
2012 年 12 月至 2013 年 11 月，收集浙江、江西、福建、广西、湖南、湖北等三叶青主分布区种质资源
24 份，除湖南怀化种质为人工栽培种质外，其余 23 份均为野生种质资源(表 1) ，全部种植于浙江省丽
水市农业科学研究院中药材资源圃，原植物由浙江农林大学斯金平教授鉴定为葡萄科植物三叶崖爬藤
(Tetrastigma hemsleyanum) ，2014 年 6 月，选取不同种源三叶青新鲜叶片，每份样品随机选取 10 个单株，
洗净晾干，待用。
表 1 供试三叶青编号与种源地
Tab． 1 Numbers and provenances of Tetrastigma hemsleyanum
编号
Number
种源地
Provenance
叶片形状
Character
of leaves
叶片颜色
Color of
leaves
茎形状
Character
of stems
编号
Number
种源地
Provenance
叶片形状
Character
of leaves
叶片颜色
color of
leaves
茎形状
Character
of stems
1 浙江遂昌 叶小，较圆 深 茎细，圆形 13 重庆梁平 叶大，尖 浅 茎粗，方形
2 浙江庆元 叶小，较尖 深 茎细，圆形 14 广西天峨 叶大，尖 浅 茎粗，方形
3 贵州种质 叶大，较圆 较深 茎粗，方形 15 湖南泸溪 叶小，较尖 较深 茎细，圆形
4 湖南怀化 叶大，圆 浅 茎粗，方形 16 湖南汝城 叶小，较圆 较深 茎细，圆形
5 浙江黄岩 叶小，较尖 较深 茎细，圆形 17 江西弋阳-Ⅰ 叶大，尖 浅 茎粗，方形
6 浙江景宁 叶小，较尖 较深 茎细，圆形 18 广西钟山 叶大，尖 浅 茎粗，方形
7 浙江泰顺 叶小，尖 较深 茎细，圆形 19 湖北咸丰 叶小，较尖 较深 茎细，圆形
8 浙江青田 叶小，尖 深 茎细，圆形 20 福建建阳 叶小，较圆 较深 茎细，圆形
9 江西宜黄 叶大，尖 浅 茎粗，方形 21 广西乐业 叶大，尖 浅 茎粗，方形
10 江西瑞金 叶大，较尖 较浅 茎粗，方形 22 江西弋阳-Ⅱ 叶大，尖 浅 茎粗，方形
11 重庆綦江 叶小，较尖 较深 茎细，圆形 23 浙江莲都-Ⅰ 叶小，较尖 深 茎细，圆形
12 广西田林 叶大，尖 浅 茎粗，方形 24 浙江莲都-Ⅱ 叶小，较尖 深 茎细，圆形
519
江 西 农 业 大 学 学 报 第 37 卷
1． 2 仪器和试剂
1． 2． 1 仪器 5424Ｒ型高速离心机(德国 Eppendorf 公司) ，nexus SX1 型 PCＲ 扩增仪(德国 Eppendorf
公司) ，Milli-Q Academic型超纯水仪(美国 Millipore 公司) ，BIO-BEST 凝胶成像系统(美国 SIM 公司) ，
SpectraMax PLUS384 型连续波长酶标仪(美国MD公司) ，DYY-8C型电泳仪(北京六一仪器厂) ，AＲ2140
型分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司) ，HH-4 型数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司) ，
GＲ60DA型自动压力蒸汽灭菌锅(厦门致微仪器有限公司)。
1． 2． 2 试剂 十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、十二烷基硫酸钠(SDS)、乙二胺四乙酸二钠(Na2 ED-
TA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、三羟甲基氨基甲烷(Tris-base)、β-巯基乙醇、硼酸、氯仿、无水乙醇、异丙
醇、氯化钠、琼脂糖、异硫氰酸胍、异戊醇、浓盐酸、DNA Marker、Taq 聚合酶、dNTPs 等试剂购自天根生化
科技(北京)有限公司与百维生物(上海)科技有限公司，ISSＲ引物购自美国 Invitrogen公司。
1． 3 试验方法
1． 3． 1 基因组 DNA的提取 参照顾红雅等［19］的方法并加以改进，本试验所用 DNA以混合 DNA样品
代表种质 DNA样品，具体步骤如下:①将 1 mL CTAB 提取液(2% CTAB，2% PVP，100 mmol /L Tris-HCl
(pH8． 0) ，25 mmol /L EDTA，2． 0 mol /L NaCl)加入到 2 mL离心管中，65 ℃水浴 30 min 预热;②预热期
间，取 1 ～ 2 g样品置于研钵中，加入适量 PVP，液氮中研磨至粉末;③将适量粉末迅速转入盛有 1． 2 mL
TNE(100 mmol /L Tris-HCl pH 8． 0，20 mmol /L EDTA，0． 25 mol /L NaCl，2% β-巯基乙醇)的离心管中，充
分震荡混匀，65 ℃水浴 10 min，期间摇晃 2 次，室温10 000 r /min 离心 10 min，去上清;④加入预热好的
CTAB 提取液 1 mL，混匀 65 ℃水浴 40 min，期间颠倒混匀 3 ～ 5 次，12 000 r /min离心 10 min;⑤取上清，
加入等体积氯仿-异戊醇(V∶ V = 24∶ 1) ，充分颠倒混匀，10 000 r /min 离心 10 min，取上清，重复 1 次;⑥
加入等体积异丙醇，轻缓颠倒混匀，－ 20 ℃冰箱放置 30 min，12 000 r /min离心 10 min，弃上清;⑦加入 1
mL体积分数 70%乙醇漂洗 2 次;⑧室温下微干，加入 30 ～ 50 μL TE缓冲液;⑨加入终浓度为20 μg /mL
的 ＲNaseA，37 ℃水浴 30 min。
1． 3． 2 引物筛选与体系优化 在 24个样品中挑选 3个样品进行正交试验体系优化与引物筛选。从 101
个引物中筛选出扩增条带清晰、多态性好和反应稳定的 22 个引物(表 2) ，对 24 份三叶青样品进行 ISSＲ-
PCＲ扩增。正交试验优化的扩增体系与循环参数如下:20 μL 反应体系中，Taq 酶用量 0． 5 U，模版 DNA
20 ng，dNTPs 0． 20 mmol /L，引物0． 4 μmol /L，2 μL 10 × Buffer缓冲液(Mg2 +浓度1． 5 mmol /L) ;PCＲ扩增程
序为:94 ℃ 4 min;94 ℃变性 30 s，48 ～52 ℃复性 45 s，72 ℃延伸 2 min，35个循环;72 ℃延伸7 min，4 ℃保
存。
1． 4 数据统计与分析
根据分子标记在相同电泳迁移率(相同分子量片段)条带的有无统计得到所有位点的二元数据，有
DNA扩增带记为 1，无带记为 0。利用 NTSYSpc2． 10e 软件计算样品之间的遗传距离和相似系数，根据
遗传距离用 UPGMA法(Unweighted pair group mean average)聚类分析，构建系统树。
2 结果与分析
2． 1 扩增产物的多态性分析
筛选的 22 个引物对 24 份样品进行 ISSＲ扩增，共扩增出条带 169 条，其中多态性条带 77 条，平均
多态性比例为 46． 7%，单条引物扩增总带数 5 ～ 11 条，平均扩增 7． 7 条，扩增多态性条带 2 ～ 5 条，平均
扩增 3． 5 条，详见表 2。扩增出的 DNA 片段集中在 450 ～ 2 200 bp，其中，多态性比例最多的引物为
P27，达到 66． 7%，最低的为引物 P2，P6 与 Xp31，均为 33． 3%(表 2、图 1)。
2． 2 相似系数分析
利用 NTsys2． 10e 软件分析得到 24 份样品间的遗传相似系数矩阵，遗传相似系数越大表明样品间
亲缘关系最近。结果表明:供试三叶青种质资源相似系数值在 0． 77 ～ 0． 99(表 3) ，亲缘关系最近为浙
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第 5 期 朱波等:珍稀药材三叶青种质资源遗传多样性的 ISSＲ分析
江莲都-Ⅰ与浙江莲都-Ⅱ种质，相似系数最小存在于浙江庆元种质与广西钟山种质之间。
表 2 供试 ISSＲ引物及 PCＲ扩增的多态性
Tab． 2 Primers selected and polymorphic bands amplified by PCＲ
引物名称
Name of primer
引物序列
Sequence
总扩增带数
Total bands
多态性条带数
Polymorphic bands
多态性比例 /%
Ｒatio of polymorphic bands
P1 TGCACACACACAC 11 4 36． 4
P2 GTGACACACACACAC 9 3 33． 3
P4 GGATGCAACACACACACAC 8 4 50． 0
P10 GAGAGAGAGAGAGAGAC 9 4 44． 4
P12 AGAGAGAGAGAGAGAGGC 5 3 60． 0
P13 TCTCTCTCTCTCTCTCCG 10 5 50． 0
P14 ACACACACACACACACCG 6 3 50． 0
P16 TGTGTGTGTGTGTGTGGA 9 3 33． 3
P17 ACACACACACACACAC 7 4 57． 1
P18 ACACACACACACACACC 5 2 40． 0
P19 ACACACACACACACACCT 5 3 60． 0
P20 ACACACACACACACACCTG 5 3 60． 0
P21 AGCAGCAGCAGCAGCAGCG 9 4 44． 4
P25 GAGAGAGAGAGAGAGACC 11 5 45． 5
P26 CACCACACACACACACA 6 3 50． 0
P27 GTATGTATGTATGTATGG 6 4 66． 7
Xp13 AGGAGGAGGAGGAGGAGG 9 4 44． 4
Xp14 CTCTCTCTCTCTCTCTT 10 5 50． 0
Xp25 GAGAGAGAGAGAGAGAYC 8 3 37． 5
Xp31 CTCTCTCTCTCTCTCTＲG 6 2 33． 3
Xp50 AAAGAAAGAAAGAAAG 8 3 37． 5
Xp70 GGCAAAGGCAAAGGCAAA 7 3 42． 9
图 1 引物 xp14 对不同种源三叶青 ISSＲ扩增图(箭头所指多态性位点)
Fig． 1 Bands amplified by ISSＲ under xp14 primer (the arrow pointing polymorphic locus)
2． 3 聚类分析
利用 UPGMA法对 24 份三叶青种质资源样品进行聚类分析，建立聚类分支树状(图 2)。供试材
料以相似系数 0． 847 为分类界限，将 24 份三叶青种质资源分成 4 类:第Ⅰ类有 10 个种质，分别为 1、
2、5、6、7、8、10、11、23 和 24，本类以浙江种质为主，8 份浙江种质全部归于此类，此外还包括江西瑞
金与重庆綦江种质。从相似系数看，浙江种质较明显区别于其他省份种质，其中江西瑞金种质为人
工栽培种质，其种源地来自浙江，故归属此类;第Ⅱ类有 11 个种质，分别为 9、12、13、14、15、16、17、
19、20、21 和 22，本类以江西、广西、湖北、湖南种质为主，大部分上述来源种质聚在一起;第Ⅲ类有 2
个种质，分别为湖南怀化与广西钟山，湖南怀化种质非野生资源，其种源地有待进一步考察;第Ⅳ类
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江 西 农 业 大 学 学 报 第 37 卷
仅有一个种质，为贵州种质。
表 3 ISSＲ标记的 24 份种质资源间的相似系数
Tab． 3 Similarity coefficient of 24 germplasm resources by ISSＲ
编号
Number
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
1
2 0． 93
3 0． 81 0． 84
4 0． 82 0． 81 0． 80
5 0． 88 0． 85 0． 82 0． 89
6 0． 90 0． 86 0． 81 0． 88 0． 93
7 0． 90 0． 88 0． 81 0． 86 0． 88 0． 92
8 0． 95 0． 90 0． 82 0． 83 0． 89 0． 93 0． 91
9 0． 88 0． 85 0． 80 0． 83 0． 89 0． 90 0． 86 0． 89
10 0． 94 0． 90 0． 81 0． 82 0． 90 0． 90 0． 89 0． 97 0． 90
11 0． 90 0． 86 0． 81 0． 86 0． 91 0． 92 0． 90 0． 93 0． 88 0． 92
12 0． 87 0． 84 0． 81 0． 86 0． 88 0． 87 0． 85 0． 86 0． 86 0． 89 0． 90
13 0． 87 0． 84 0． 79 0． 84 0． 88 0． 85 0． 81 0． 84 0． 82 0． 85 0． 87 0． 87
14 0． 88 0． 87 0． 80 0． 85 0． 87 0． 88 0． 84 0． 87 0． 85 0． 88 0． 86 0． 86 0． 91
15 0． 88 0． 83 0． 78 0． 83 0． 89 0． 91 0． 84 0． 89 0． 85 0． 88 0． 88 0． 88 0． 86 0． 89
16 0． 88 0． 85 0． 82 0． 81 0． 83 0． 90 0． 86 0． 90 0． 90 0． 88 0． 88 0． 84 0． 78 0． 83 0． 85
17 0． 88 0． 83 0． 82 0． 81 0． 85 0． 86 0． 84 0． 90 0． 81 0． 90 0． 90 0． 86 0． 88 0． 87 0． 87 0． 83
18 0． 82 0． 77 0． 82 0． 85 0． 87 0． 86 0． 86 0． 85 0． 85 0． 84 0． 86 0． 80 0． 80 0． 79 0． 83 0． 81 0． 83
19 0． 89 0． 84 0． 85 0． 86 0． 90 0． 90 0． 85 0． 86 0． 84 0． 87 0． 85 0． 87 0． 87 0． 88 0． 90 0． 80 0． 88 0． 84
20 0． 86 0． 81 0． 84 0． 85 0． 89 0． 90 0． 84 0． 87 0． 90 0． 88 0． 88 0． 88 0． 86 0． 87 0． 87 0． 90 0． 87 0． 83 0． 88
21 0． 85 0． 84 0． 81 0． 86 0． 88 0． 89 0． 85 0． 88 0． 82 0． 87 0． 89 0． 85 0． 85 0． 86 0． 86 0． 82 0． 88 0． 84 0． 87 0． 86
22 0． 87 0． 84 0． 83 0． 84 0． 86 0． 90 0． 87 0． 88 0． 86 0． 85 0． 90 0． 87 0． 83 0． 84 0． 86 0． 88 0． 88 0． 82 0． 87 0． 90 0． 90
23 0． 92 0． 88 0． 83 0． 82 0． 88 0． 90 0． 87 0． 93 0． 86 0． 92 0． 92 0． 87 0． 87 0． 88 0． 90 0． 88 0． 93 0． 86 0． 87 0． 88 0． 87 0． 90
24 0． 91 0． 87 0． 82 0． 83 0． 89 0． 91 0． 88 0． 94 0． 87 0． 93 0． 93 0． 88 0． 88 0． 89 0． 90 0． 89 0． 92 0． 87 0． 86 0． 89 0． 88 0． 90 0． 99
图 2 三叶青种质资源聚类图
Fig． 2 Dendrogram of 24 Tetrastigma hemsleyanum germplasms
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第 5 期 朱波等:珍稀药材三叶青种质资源遗传多样性的 ISSＲ分析
3 讨 论
种质资源遗传多样性分析是研究物种起源进化、发现新的基因资源、改良现有育种材料的基础
性工作。分子标记是从 DNA水平上揭示品种及种群间差异性和相关性的有效工具之一，可以用来
确定样本材料之间的遗传多样性和亲缘关系，通过聚类分析可以划分出优势种群，提高自然种群优
势的应用效率，对种质资源保护和新品种选育具有重要意义［20］。ISSＲ 分子标记技术结合了 ＲAPD
标记和 SSＲ标记的优点，在同一水平上，更具可靠性、重复性高，被广泛应用于植物种内遗传多样性
的研究［17］。由于三叶青遗传背景复杂和遗传基础理论研究薄弱，加之生长周期长和收集种质数目
的增多，采用传统的分析方法和形态指标难以有效区分种质，更无法在较短时间内研究种质资源的
遗传多样性和种质间的亲缘关系。本试验在收集全国主产区三叶青种质资源的基础上，开展 ISSＲ
分子标记研究，分析三叶青种质资源的多样性与种质间的亲缘关系，以期为三叶青种质资源遗传结
构与构建核心种质资源库奠定基础。
从 ISSＲ-PCＲ扩增结果看，24 份三叶青种质资源平均多态性比例为 46． 7%，表明三叶青种质资源存
在一定的遗传多样性，但相比和志娇［17］、杨美玲［21］等报道的多态性比例较低，原因可能是本试验所取
材料均为一个种，属于种内变异，相比种间或居群间变异小，其次可能浙江种质占到了所有种质的三分
之一，且江西瑞金种质的种源地也是来自浙江，种源地组成较单一的原因所致。从相似系数看种质间亲
缘关系，亲缘关系最近为浙江莲都-Ⅰ与浙江莲都-Ⅱ种质，表明浙江莲都-Ⅰ与浙江莲都-Ⅱ种质确为浙
江莲都本地野生种质，来源于同一种源地。亲缘关系最远的为浙江庆元种质与广西钟山种质，浙江庆元
位于浙江西南部，广西钟山位于广西东北部，均属于长江中下游地区，此地区以丘陵地形为主，包括江南
丘陵、浙闽丘陵与两广丘陵，浙江庆元与广西钟山分属浙闽丘陵与两广丘陵，丘陵地形以山地居多，生物
群落分布复杂多样，加之庆元百山祖地区为国家级自然保护区，复杂的地形地貌可能影响了种群间的基
因交流，这可能是浙江庆元与广西钟山种质亲缘关系较远的主要原因。从地理位置与相似系数看，种质
资源间亲缘关系的远近不全由地理距离决定，生态气候、地形地貌、海拔经纬度、群落分布等自然因素及
人类活动等社会因素均会对三叶青种质资源基因交流产生影响，从而影响亲缘关系。
用 UPGMA法将 24 份三叶青种质资源分成 4 大类，第Ⅰ类以浙江种质为主，第Ⅱ类以江西、广西、
湖北、湖南种质为主，第Ⅲ类包括湖南怀化与广西钟山 2 个种质，调查发现，湖南怀化种质非野生资源，
推测其种源地可能位于广西与湖南交界处，但最终种源地还需综合生物学特性、农艺性状、化学成分等
试验确定;第Ⅳ类仅有一个种质，为贵州种质，此种质种源地已知位于黔西南地区，此地区位于云贵高原
境内，海拔、经纬度、生态气候等因子区别于其他 23 份种质，这可能是贵州种质单独聚类的原因。
综上所述，ISSＲ分子标记适用于三叶青种质资源遗传多样性与亲缘关系分析，全国主产区 24 份三
叶青种质资源表现出一定的遗传多样性，为三叶青品种改良奠定了一定的遗传基础。植物的农艺性状
为基因表达与环境互作共同作用的表现，浙江三叶青表现均表现出茎细，圆形的形态特征，而其他种质
茎较粗且为方形，结果显示可以进行下一步农艺性状、化学成分等指标与特异性 DNA 片段的相关性研
究，最终实现通过克隆目标基因控制药材性状的目的。通过相似系数分析了三叶青种质间的亲缘关系，
同时通过遗传聚类了解三叶青遗传变异在地理上的分布格局对于制定科学的保护策略并促进其开发利
用具有极为重要的作用。
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