全 文 ：文章编号:1008 —9632(1999)04—0031 —02
螺旋藻中 β —胡萝卜素的含量测定
郭宏炳1 ,钟镜金2 ,苏子仁2
(1.广东医学院附属医院药剂科 ,湛江 524001;　2.广州中医药大学 ,广州 510407)
摘　要:本文实验选用石油醚提取 ,采用柱层析净化 ,分光光度法测定其含量 ,方法简便灵敏 ,重现性好 ,结果
可靠 。
关键词:螺旋藻;β—胡萝卜素;柱层析;分光光度法;含量
中图分类号:Q946·6　　　　　文献标识码:B
　　螺旋藻是一种新兴的食疗药物 ,β —胡萝卜素是其主
要活性成分之一 。本品来源于颤藻科(Oscillatoniaceae)
螺旋藻属(Spirulina)水生植物的干燥全体。据文献报
道[ 1] ,螺旋藻中含有大量的胡萝卜素 ,蛋白质 ,维生素
B12 ,可吸收铁等成份 ,具有很高的药用及营养价值 ,被联
合国粮油组织推荐为“二十一世纪最优秀的食品” 。β —
胡萝卜素具有防癌 ,预防白内障 ,口腔及食道溃疡 ,减少
化疗和放疗引起的毒副作用等功能。目前 ,国内有多家
企业进行螺旋藻的开发利用 ,并已有产品投放市场 。为
了有效评价螺旋藻的质量 ,本文选择 β—胡萝卜素进行
含量测定 。
1　仪器 、药品及试剂
图 1　不同提取方法的样品吸收图谱
日立 200 —10型紫外 ———可见分光光度计 ,中性氧
化铝(层析用 ,上海五四化学试剂厂),石油醚 、甲醇等化
学试剂均为分析纯 , β —胡萝卜素(Merk公司)。
2　方法与结果
2.1　样品提取条件试验
2.1.1　提取方法的选择:取螺旋藻 0.1g ,分别采用石油
醚 40ml浸提 ,石油醚浸提液用氧化铝吸附以及石油醚浸
提过氧化铝柱等三种方法提取螺旋藻中的 β—胡萝卜
素 。提取液分别用日立 200—10型紫外可见分光光度计
进行扫描测定(见图 1)。结果显示 ,采用石油醚提取过
氧化铝柱的方法 ,可排除其它成分的干扰 ,样品的吸收图
谱与 β—胡萝卜素吸收图谱相一致 ,经薄层检测 ,样品显
示一个与 β—胡萝卜素对应的斑点 。
2.1.2　提取条件的确定:精密称取螺旋藻 0.1g 各 5份 ,
其中三份分别 50ml干燥的碘量瓶中 ,加甲醇———石油醚
(1∶2)15ml ,放置 3h后 ,分别超声处理 2 、3 、4分钟后 ,滤
过 ,滤液备用。另两份分别用甲醇———石油醚(1∶2)
15ml回流提取 2次和浸提 24h ,滤过 ,滤液备用。
五份样品溶液 ,经水洗 ,石油醚萃取 ,过氧化铝柱等
操作 ,在 450nm处测定吸收度 ,结果如表 1。
表 1　不同提取条件的测定值
提　取 浸提 3h 后超声 回流 浸提
方　法 2′　　　3′　　　4′ 提取 24h
测定值(A) 0.730　0.745　0.744 0.670 0.615
结果显示 ,浸提 3h后 ,用超声处理的样品测定数值
最高 ,故选用此法提取 。
2.2　方法稳定性试验:取样品 、β—胡萝卜素对照溶液 ,
在室温下进行不同时间测定其吸收度 ,结果测至 24h 内
依然稳定。
2.3　标准曲线制绘:精密称取 β—胡萝卜素 3.4mg ,用
少量氯仿溶解 ,并用石油醚定容至 200.00ml ,准确吸取
此标准溶液 0.20 、0.40 、0.60 、0.80 、1.00ml分别置 5ml
容量瓶中 ,用石油醚稀释至刻度 。以石油醚为空白 ,照分
光光度法[ 3] 于波长 450nm 处测定 ,以浓度 C 为横坐标 ,
吸收度 A为纵坐标 ,经回归分析 ,得回归方程 c=4.277A
-0.179 , r=0.9999。
2.4　样品的测定:精密称取螺旋藻 0.1g ,置 50ml干燥
的碘量瓶中 ,加甲醇———石油醚(1∶2)15ml。摇匀 ,放置
3h ,超声处理 3min ,滤过 。滤渣用石油醚反复洗涤至无
色 ,合并滤液 。滤液置分液漏斗中 ,加水 25ml ,抽提 ,待
分层后分取石油醚液 ,水层用石油醚反复抽提至无色。
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第 16卷第 4期
1999年 8月 　　　　　　　　　　　　
生　物　学　杂　志
JOU RNAL OF BIOLOGY
　　　　　　　　　　　　VO1.16　NO .4
August ,1999
合并石油醚液 , 60℃水浴挥发石油醚至约 10ml ,注入氧
化铝柱(氧化铝 8g ,柱直径 1cm),用石油醚洗脱 ,收集黄
色洗脱液置于 50ml容量瓶中 ,用石油醚加至刻度 ,摇匀 ,
在 450nm 波长处测定吸收度。用回归方程求算样品的
含量 ,结果如表 2 。
表 2　螺旋藻 β —胡萝卜素含量测定结果
批　号 测定值(mg%) X±SD
931212 47.1 48.2 51.7 47.7±0.55
940211 52.3 53.0 51.7 52.3±0.65
940212 46.7 46.8 44.1 45.9±1.53
940206 42.0 44.4 44.3 44.2 43.7±1.15
940209 46.5 47.3 44.2 45.5 45.9±1.34
940215 48.4 45.5 47.6 45.1 46.7±1.60
940208 44.9 43.1 47.3 43.6 44.7±1.88
940214 45.7 46.7 43.3 44.4 45.0±1.49
940213 49.4 47.2 51.3 45.6 48.4±2.50
940207 44.8 44.2 42.1 43.5 43.7±1.16
2.5　回收率试验:精密称取 940209 批螺旋藻约 0.1g7
份 ,分别置于 50ml干燥的碘量瓶中 ,精密加入约 100ug
的 β—胡萝卜素标准溶液 ,依样品测定 ,方法进行测定 ,
结果如表 3。
表 3　回收率试验结果
编
号
样品量
(g)
样品中的
含量(ug)
加入量
(ug)
测得量
(ug)
回收率
(%)
X±SD
(%)
CV
(%)
1 0.1010 46.3 112.9 151.0 94.8
2 0.0984 45.1 112.9 148.3 93.9
3 0.1008 46.2 112.9 152.8 96.0
4 0.0996 45.7 112.9 152.3 96.0 95.9±1.37
5 0.0947 43.5 85 126.2 98.2 1.43
6 0.0969 44.5 85 125.2 96.7
7 0.1010 46.4 85 125.8 95.7
3　讨论
3.1　螺旋藻含有丰富的蛋白质 ,氨基酸等水溶性成分 ,
营养价值极高[ 1] 。此外尚含有丰富的 β—胡萝卜素 、叶
黄素 、叶绿素等脂溶性成分。其中 β—胡萝卜素是维生
素 A原 ,是人体发育 、表皮组织生长分化 ,视觉机能 ,生
殖等生理作用不可缺少的一类化合物 ,具有延缓衰老等
药理作用 ,是螺旋藻中主要活性成分之一。
3.2　螺旋藻中 β—胡萝卜素 、叶黄素 、叶绿素等脂溶性
成分 ,可用石油醚等非极性有机溶媒提取 ,而氧化铝对各
成分的收附能力不同 ,可采用过氧化铝柱 ,用石油醚洗脱
β —胡萝卜素 ,其它脂溶性成分不易洗脱 ,从而达到分离
的目的 。
3.3　采用氧化铝柱层析———分光光度法测定 β —胡萝
卜素的含量 ,具有线性关系好 ,可排除其它脂溶性成分的
干扰 ,稳定 、灵敏 、简便的优点 ,适用于海藻类 β—胡萝卜
素的含量测定 ,较三氯化锑比色法的操作步骤简便。
3.4　β —胡萝卜素是一个含不饱和双键的共轭烯类化合
物 ,在空气中遇光易氧化变质 。因此 ,测定时 ,采用超声
处理而减少抽提时间 ,样品处理应注意连续操作 ,避免放
置时氧化 ,引起含量降低 ,据报道[ 3] ,β —胡萝卜素在空气
中放置 6周 ,含量下降 25%以上。
参考文献:
[ 1]杨娜.海洋药物[ M].1986 , 19(3)54.
[ 2] 张利奋编译.国际饮料分析方法[ M] .中国轻工业出版社 ,
1992 , 154—157.
[ 3]于信令等编译.食品添加剂检验方法[ M].1992 , 395—398.
(上接第 35页)
保护法》的任务是保护 、拯救珍贵 、濒危野生动物 ,保护 、
发展和合理利用野生动物资源;保护方法有禁止非法猎
捕和破坏 ,划定自然保护区等多种;违反该法 ,未构成犯
罪的 ,应给予行政处罚;构成犯罪的 ,应当依刑法追究刑
事责任。该法共 5章 42条。
3.2　专题讲座法
结合与保护生物多样性有关的活动 ,如“植树节” 、
“爱鸟周” 、“野生动物保护宣传月” 、“环境日”和“地球日”
等 ,邀请当地保护生物多样性的执法部门的专家来校讲
座 ,如林业部门的关于《中华人民共和国森林法》 、《中华
人民共和国草原法》的讲座;畜牧部门的关于《中华人民
共和国动物防疫法》 、《中华人民共和国野生动物保护法》
的讲座;渔政部门的关于《中华人民共和国渔业法》、《中
华人民共和国海洋环境法》的讲座等 。因为他们大都是
某一部门或某一类保护生物多样性法律 、法规的执行者 ,
具有丰富的法律知识和实践经验 ,所以他们的讲座能使
学生将所学的法律知识同实际联系起来 ,起到巩固 、提高
学生保护生物多样性法律意识的效果 。
3.3　指导学生自我培养法
根据学生不同的认识水平和个性心理特征 ,通过举
办宣传保护生物多样性法律 、法规的各种活动 ,使学生在
亲自参与活动过程中获取保护生物多样性的法律知识 ,
提高自己的法律意识。如让初中学生观看我国打击走
私 、贩卖珍贵野生动植物及其制品的犯罪活动的纪录片 ,
他们除了对司法人员同犯罪分子作斗争的惊心动魄的场
景难以忘怀之外 ,还会产生这样一个简单的法律意识 ,即
破坏和贩卖国家保护的动植物是犯法的行为 ,会受到国
家的严厉惩罚 。对于高中学生来说 ,采用竞赛和论文评
比方式能十分有效地促进他们自我提高保护生物多样性
的法律意识。此外 ,通过举办墙报 、宣传活动和参观调查
等都是指导学生自我培养保护生物多样性法律意识的有
效途径 。
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第 16卷第 4期
1999年 8月 　　　　　　　　　　　　
生　物　学　杂　志
JOU RNAL OF BIOLOGY
　　　　　　　　　　　　VO1.16　NO .4
August ,1999