全 文 ：海洋科学/2000年/第 24卷/第 3期16
螺旋藻多糖是螺旋藻的重要生物学活性成分 ,
1991年刘力生等证明它对腹水型肝癌细胞及肉瘤
180有杀伤抑制作用[ 1 ] ;1996年日本科学家证明它有
抗病毒及免疫力提高作用 。本研究用热水浸提法提取
螺旋藻多糖及多糖蛋白 , 并测定它对肺癌细胞 , 人白
血病淋巴细胞及胃癌细胞的杀伤抑制作用 。
1 材料及方法
1.1 样品及试剂来源
钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)、极大螺旋藻(S .
maxium)及螺旋藻干粉由云南程海宏源生物技术公司
提供 , 部分藻粉由本实验室自制 。昆明种小鼠 , 重
30 ～ 40 g ,由昆明医学院提供 。胃癌细胞 、肺癌细胞及
人白血病淋巴细胞 (HL-60)由中科院昆明动物所提
供 。RPMI Medium 1640为GIBCOBRI公司产品 。电泳
纯牛血清白蛋白(Bovine serum albumin ,BSA)购自北京
红兴化学试剂分装厂 。胰酶 、胎牛血清 (Fetal bovine
serum , FBS)购自卫生部上海生物制品研究所 。
1.2 螺旋藻培养
钝顶螺旋藻及极大螺旋藻接种到 Zarrouk氏培养
基内 , 5 000 lx光照强度条件下 , 25 ℃通气搅拌培养 ,
至 OD值达 0.8 ～ 1.0 h , 用细纱网过滤收集得新鲜螺
旋藻藻泥 ,干燥得螺旋藻粉 。
1.3 螺旋藻多糖 、多糖蛋白制备及分析
热水抽提法制备藻多糖:藻粉用 80 ℃水抽提 4
h ,真空浓缩 ,酒精沉淀 ,用 Sevag法洗脱蛋白质 ,乙醇-
丙酮法洗涤 , 冷冻干燥后得藻多糖粗品 , 过 DEAE纤
维素柱和 Sephedex G-200 , 滤液透析浓缩 , 冷冻干燥得
螺旋藻多糖精品 。
盐析法制备藻多糖蛋白:去离子水洗涤藻粉 , 除
去表面的无机盐及杂质 , 用甲醇和乙醇抽滤去脂肪及
色素等 ,用 0.2%NaCl-0.1%NaHCO3 液 90 ℃抽提 2 h ,
抽提液用 75%乙醇沉淀 , 过滤 、洗涤沉淀 , 干燥后得
藻多糖蛋白干粉 。
Lowry 法测定蛋白质含量 , 苯酚-硫酸显色反应
测定糖含量[2 ,3 ] 。
1.4 螺旋藻及其多糖 、多糖蛋白提取物对离
体癌细胞的生长抑制试验
将螺旋藻多糖 、多糖蛋白(含蛋白质 17%)、新鲜
藻泥(或干粉)冻融裂解物分别用 pH7.2 PBS液配制
成 1 mg/ml溶液。再用含 10%BSA的 RPMI 1640培养
液稀释成 50 , 150 , 500μg/ml , 经 30 W强度 254 nm紫
外线 20 cm距离照射 4 h灭菌 , 4 ℃冰箱保存备用 , 将
处于对数生长期的胃癌细胞 、肺癌细胞 、人白血病淋
巴细胞经胰酶消化制成细胞悬液 , 分装于 24孔培养
板中 , 使每孔细胞数为 40 000个左右 , 每孔加入上述
含药培养液各 2 ml , 同时设未加药的培养液作为对
照 ,放入 CO2培养箱内 , 37 ℃培养观察 。
2 结果
肺癌细胞 。胃癌细胞在含有螺旋藻多糖 、多糖蛋
收稿日期:1998-12-28;修回日期:1999-10-21
螺旋藻及其多糖 、多糖蛋白提取物对体外癌细胞的抑制作用
INHIBITORY ACTIVITY OF POLYSACCHRIDE AND POLYSAC-
CHRIDE-PROTEIN EXTRACT FROM SPIRULINA PLATENSIS ON
PROLIFERATION OF CANCER CELLS
张以芳 段 刚 刘旭川
(云南农业大学动物科技学院微生物室 昆明 650201)
关键词 螺旋藻 ,多糖 ,多糖蛋白 ,癌细胞
实验与技术
EXPERIMENT＆ TECHNIQUE
Marine Sciences/Vol.24, No.3/2000 17
北太平洋宽吻海豚(Tursiops gilli)属鲸类的一种 ,
鲸类终生生活在海水环境中 ,一旦从宽广的海洋转入
人工饲养环境中 , 受许多客观条件的限制 , 极易发生
各种疾病 ,要想提高成活率 ,把海豚养好 ,必须提高饲
养管理水平。
豚类人工饲养管理的基本条件包括:饵料 、日食
量 、饵料处理 、营养药物补充 、水质管理和必要的检查
制度 。
1 饵料
选择新鲜无病原污染的鱼做饵料 , 是一个重要
的环节 。用做饵料的鱼为新鲜的冷冻沙丁鱼 、鳍鱼 、鲅
鱼等 ,如鱼的新鲜度不好 ,则脂溶性维生素 ,也就是维
生素 A ,D , E含量降低 ,会引起营养失调;冷冻的作用
还在于可杀死鱼体内的寄生虫 。对饵料鱼的选择:(1)
要求眼观鱼体无创伤无细菌污染;(2)大小适宜 ,尤其
是鳍鱼 、鲐鱼 , 如这些鱼体过大 , 脂肪含量高 , 食后造
成消化不良 , 排上浮脂肪便;(3)多刺鱼不喂 , 以免引
起消化不良及附近组织器官的刺伤和脓肿;(4)同时 ,
对每次购进的鱼要做营养分析 , 测定项目为粗蛋白 、
粗脂肪 、灰分 、水分 、总细菌数(见表 1)。
新购回的鱼必须置于 -20 ℃以下的冷库中保
存 , 保存期不超过 6个月 , 鲐鱼类以不超过 3个月为
好 。即使是速冻的鱼 ,长期保存也会形成脂肪的酸化 ,
特别是鳍鱼 、鲐鱼和鱿鱼体内 Scombroid(鳍精蛋白)
收稿日期:1999-05-12;修回日期:1999-07-06
太平洋宽吻海豚的饲养管理
THE FEEDING AND KEEPING OF Tursiops gilli
刘振国
(青岛海豚表演馆 266071)
关键词 太平洋宽吻海豚 ,饲养 ,管理
实验与技术
EXPERIMENT＆ TECHNIQUE
白或藻泥冻融裂解物的 RPMI 1640培养液中培养后 ,
贴壁细胞减少 , 大部分细胞呈悬浮状态 , 随着培养时
间延长 ,细胞内出现空泡 ,并渐解体 。
白血病细胞 HL-60由于不贴壁生长 ,在含有螺旋
藻多糖 、多糖蛋白或藻粉的培养液中培养后 , 开始并
无明显变化 , 但随着培养时间延长 , 细胞形状很快变
得不规则 ,集聚成团 ,并逐渐解体 。
肺癌细胞 、胃癌细胞及白血病细胞在未含药物
的培养液中对照培养时 ,均生长良好 ,无明显变化 。
螺旋藻多糖 、多糖蛋白 、藻粉(或藻泥)对癌细胞
生长抑制效果比较 , 以多糖效果最好 , 多糖蛋白次
之 ,藻粉或新鲜藻泥冻融裂解物效果较差 。
每毫升培养液中含 50 , 150或 500μg药物量间
比较 , 以 500μg大剂量组对 3种离体癌细胞抑制效
果出现早 ,作用最明显 。
参考文献
1 杨志红主编。施普瑞医学论文汇编。北京:海洋出版社 ,
1996。 45～ 241
2 张龙翔、张庭芳、李令嫒主编。生化试验方法和技术(第
2版)。北京:高等教育出版社 , 1997。1～ 140
3 陈 荃主编。生物化学研究技术。北京:中国农业出板
社 , 1995。 1～ 198
(本文编辑:张培新)