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黄瓜子不同炮制品中化学成分的对比



全 文 :·药品检验· 中国医药导报 2014 年 7 月第 11 卷第 20 期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 20 July 2014
[基金项目] 吉林省卫生厅科研课题(编号 2009S012)。
[作者简介] 祝洪宇(1989.9-),女,吉林德惠人,长春中医药
大学 2012级中药学专业在读硕士研究生。
[通讯作者] 陈新(1965.5-),女,吉林通化人,教授,长春中医
药大学药学院教研室主任;研究方向:中药有效成分与应用
开发研究。
黄瓜子,异名哈利苏,为葫芦科植物黄瓜 Cucumis
sativus L.的干燥成熟种子。 黄瓜子具有润肠清肺、接
骨止痛和舒筋活络的功效,临床上常用于治疗劳伤咳
嗽、骨折和跌打损伤之证[1]。在民间早已有用黄瓜子治
疗骨科疾病的方法,且广泛用于接骨壮骨及日常补
钙。 黄瓜子中含有丰富的脂肪油,生食具有滑肠的作
用。 除特殊情况外,临床应用黄瓜子大多为黄瓜子的
炮制品。 目前对黄瓜子炮制方法的研究报道较少,根
据传统中药炮制理论“逢子必炒”的原则,现在仍采用
传统的清炒法炮制黄瓜子。本次试验运用微波炮制法
对黄瓜子进行炮制,通过对比生品及两种炮制品中钙
磷比、氨基酸及脂肪油的含量,比较炮制方法对黄瓜
子中化学成分的影响。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
FAD04B 型电子分析天平(1/10000),LXJ-IB 型
低速大容量多管离心机,Spectrumlab752S 型紫外-可
见分光光度计,电阻炉,GZX-9240 型数显鼓风干燥
箱,AS20500A 型超声波清洗仪 ,HH-S 型恒温水浴
锅;精氨酸对照品、亮氨酸对照品、谷氨酸对照品及亚
油酸对照品均购自中国生物制品研究所,蒸馏水、去
离子水、其他试剂均为化学基准试剂或分析纯。
1.2 方法
1.2.1黄瓜子样品的炮制
黄瓜子购于吉林农业大学种子公司,经长春中医
药大学药学院中药鉴定教研室鉴定为葫芦科黄瓜属
黄瓜 Cucumis sativus L.的干燥成熟种子。 黄瓜子的不
同炮制品均为自制。
黄瓜子不同炮制品中化学成分的对比
祝洪宇 1 隋 莹 1 宋 宁 1 张洪长 1 纪 绪 2 陈 新 1
1.长春中医药大学药学院,吉林长春 130117;2.长春市生物制品研究所有限责任公司,吉林长春 130000
[摘要] 目的 通过对黄瓜子不同炮制品中化学成分的对比分析,研究不同炮制方法对黄瓜子中化学成分的影响。
方法 分别用清炒法和微波炮制法对黄瓜子进行炮制,比较炮制品和生品中钙磷比、氨基酸及脂肪油含量的异
同。 结果 黄瓜子生品钙磷比为 2.79∶1,黄瓜子清炒品钙磷比为 2.45∶1,黄瓜子微波制品钙磷比为 2.26∶1;黄瓜子
微波制品的氨基酸含量及脂肪油含量高于清炒品和生品。 结论 用微波法对黄瓜子进行炮制可提高黄瓜子的利
用率。
[关键词] 黄瓜子炮制品;钙磷比;氨基酸;脂肪油
[中图分类号] R932 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2014)07(b)-0106-04
Comparative analysis on chemical components of Cucumber in different
processed products
ZHU Hongyu1 SUI Ying1 SONG Ning1 ZHANG Hongchang1 JI Xu2 CHEN Xin1
1.College of Pharmacy, Changchun University of Traditional Chinese Medicine, Jilin Province, Changchun 130117,
China; 2.Changchun Institute of Biological Products Co.,LTD., Jilin Province, Changchun 130000, China
[Abstract] Objective To analyze comparatively of chemical constituents in different processed products of Cucumber
seed, in order to study the effects of different processing methods on chemical composition of Cucumber. Methods
Fried method and microwave processing method were processed on Cucumber seed, and the similarities and differences
of Calcium to Phosphate ratio, amino acid and fatty oil content between raw and processed products were compared.
Results The Calcium to Phosphorus ratio of crude Cucumber seed was 2.79∶1, the Calcium to Phosphorus ratio of Cu-
cumber seed fried products was 2.45∶1, the Calcium to Phosphorus ratio in microwave products of Cucumber was 2.26∶
1. The content of amino acids and fatty oil content in Cucumber seed microwave products was higher than the fried
products and health products. Conclusion For processing of Cucumber with microwave method can improve the utiliza-
tion rate of Cucumber fruit.
[Key words] Cucumber processed products; Calcium to Phosphorus ratio; Amino acid; Fatty oil
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中国医药导报 2014 年 7月第 11卷第 20期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 20 July 2014
·药品检验·
1.2.1.1 黄瓜子生品 夏、秋季采收成熟的果实,剖开,
取出种子,洗净,晒干。
1.2.1.2 黄瓜子清炒品 取黄瓜子生品 500 g,置炒锅内,
用文火炒至黄瓜子种皮鼓起且颜色加深,有噼啪声且
伴有香气溢出时,取出,放凉。 计算得率。
1.2.1.3 黄瓜子微波炮制品 取黄瓜子生品 500 g,分
次置于微波炉内,中等火力加热 4 min,取出,放凉。计
算得率。
1.2.2 黄瓜子样品钙和磷的测定
1.2.2.1 供试试剂的制备 ①混合酸消化液:分别取硝
酸和高氯酸,按体积比 4∶1的比例混合均匀,即得。②甲
基橙指示剂:取甲基橙 0.1 g,加水 100 mL 使溶解,即
得。变色范围:pH 3.2~4.4(红→黄)。③乙酸溶液:取乙
酸 2 mL,加水稀释至 10 mL,摇匀,即得。 ④氨水溶
液:取氨水 2 mL,加水稀释至 10 mL,摇匀,即得。⑤4%
草酸铵水溶液 :取草酸铵 4 g,加水溶解并稀释至
100 mL,即得。 ⑥1 mol/L 硫酸溶液:取浓硫酸 60 mL
缓缓注入适量水中,冷却至室温,加水稀释至 1000 mL,
摇匀,即得。⑦0.02 mol/L 高锰酸钾标准溶液[3]:A.高锰
酸钾标准溶液的配制:取高锰酸钾 3.2 g,精密称定,
溶于 1000 mL 水中,盖上表面皿,煮沸 15 min,密塞,
静置 1周后,用垂熔玻璃滤器滤过,即得。 B.高锰酸钾
标准溶液的标定:取在 105℃干燥至恒重的基准草酸
钠 0.2 g,精密称定,加水 250 mL 与浓硫酸 10 mL,搅
拌使溶解,自滴定管中迅速加入高锰酸钾标准溶液
25 mL(边加边振摇,以避免产生沉淀),待褪色后,加
热至 65℃,继续滴定至溶液显微红色并保持 30 s不褪
色;当滴定结束时,溶液温度应不低于 55℃,每 1 毫升
高锰酸钾滴定液(0.02 mol/L)相当于 6.70 mg 的草酸
钠。根据本液的消耗量与草酸钠的用量,算出高锰酸钾
滴定液的浓度。 ⑧15%硫酸溶液:取 15 mL 浓硫酸缓
慢加入到 80 mL水中混匀,冷却后用水稀释至 100 mL。
⑨钼酸铵溶液:取钼酸铵 5 g,精密称定,用 15%硫酸
溶液溶解并稀释至 100 mL,摇匀,即得。 ⑩亚硫酸钠
溶液:取亚硫酸钠 10 g,精密称定,置 50 mL 量瓶中,
加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。 11对二苯酚溶
液:取对二苯酚 0.5 g,精密称定,置 100 mL 量瓶中,
加水 50 mL 使溶解,并加入 1 滴浓硫酸,加水稀释至
刻度,摇匀,即得。 12磷标准储备液(100 μg/mL):取
在105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾 0.43 g,精密称定,
置 1000 mL 量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即
得。 13磷标准使用液(10 μg/mL):精密量取磷标准储
备液 10 mL,置于 100 mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇
匀,即得。
1.2.2.2 消化液的制备 分别取上述 3 种黄瓜子样品,
粉碎,过 60目筛。 各取样品粉末 1 g,精密称定,分别置
250 mL 烧杯中,加少量去离子水湿润后,加入 25 mL
混合酸消化液,置电炉上加热消化至无色透明,加 25 mL
去离子水,加热除去多余的硝酸。 待烧杯中的液体接
近 5~6 mL 时,取下,放至室温,加 20 mL 去离子水,
并转移至 100 mL量瓶中,加去离子水稀释至刻度,摇
匀,即得。
1.2.2.3 黄瓜子样品中钙含量的测定[2-10] 精密移取上述
3 种样品的消化液各 5 mL,分别置 15 mL 离心管中,
依次加入 1 滴甲基橙指示剂、1 mL 4%的草酸铵水溶
液及 0.5 mL 乙酸溶液,加氨水溶液调至微黄色,再用
乙酸溶液调节溶液至红色, 静置 1 h, 使沉淀全部析
出,离心 20 min(转速为 3500 r/min),倾去上清液,用
滤纸吸干残余溶液,加 4 mL 15%硫酸溶液溶解沉淀,
并用 50 mL 去离子水清洗并转移至 250 mL 三角烧
瓶中,摇匀,置电磁搅拌器上加热至 75~85℃,使沉淀
溶解,用标定过的高锰酸钾标准溶液滴定至溶液呈微
红色,溶液 30 s内不褪色为终点,记录高锰酸钾标准溶
液的消耗量,具体公式为WCa=(
5
2 ×C×V×M)/(ms×
V1
V2 ),
其中 W:样品中的钙含量,mg/g;C:高锰酸钾标准溶液
的浓度,mol/L;V:高锰酸钾滴定液消耗体积,mL;M:
为 Ca的相对原子质量,g/mol;V1: 用于测定样品溶液
体积,mL;V2:样品溶液定容总体积,mL;ms:样品的质
量,g。
1.2.2.4 黄瓜子样品中磷含量的测定 [11-12] ①磷标准曲
线的制备:精密量取磷标准使用液 0.5、1.0、2.0、3.0、
4.0、5.0 mL,分别置于 20 mL 具塞试管中,加入 2 mL
钼酸铵溶液,摇匀并静置 10 s,再依次加入 1 mL 亚硫
酸钠溶液和 1 mL对二苯酚溶液,摇匀,加水稀释至刻
度,混匀后静置 0.5 h,在 660 nm 波长下测定吸光度,
以磷含量为横坐标,吸光度为纵坐标进行线性回归。
②样品溶液中磷含量的测定:精密量取上述 3 种样品
消化液各 10 mL,分别置于 100 mL 量瓶中,加水稀释
至刻度,摇匀,精密量取上述溶液 2 mL,置 20 mL 具
塞试管中,其余操作步骤同“磷标准曲线的制备”项下
的制备方法。 根据测出的吸光度计算磷含量,具体公
式为 X=CV1/mV2,其中 X:样品中磷含量,mg/g;C:由
回归方程计算得的样品测定液中磷的含量,mg;V1:样
品消化液定容体积,mL;V2:测定用样品消化液的体
积,mL;m:样品质量,g。 经测定,磷元素在磷含量 5~
50 μg 范围内成线性关系,线性关系良好,回归方程:
y=0.0114x-0.0108,r=0.9998,其中 y 为吸光度,x 为磷
含量(μg),结果见图 1。
1.2.3 黄瓜子样品中氨基酸的薄层层析研究
取上述 3种黄瓜子样品粉末各 2 g,精密称定,分
别置具塞锥形瓶中,加 8 倍量的蒸馏水浸泡 30 min,
超声提取 20 min。 过滤,滤液置恒温水浴锅上水浴蒸
干,加 80%乙醇溶解,过滤,制成 5 mL的供试品溶液。
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·药品检验· 中国医药导报 2014 年 7 月第 11 卷第 20 期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 20 July 2014
取精氨酸对照品、亮氨酸对照品、谷氨酸对照品精密
称定,分别加 80%乙醇制成每 1毫升含精氨酸 10 μg,每
1毫升含亮氨酸 20 μg 和每 1 毫升含谷氨酸 20 μg 的
对照品溶液。精密吸取 3种供试品溶液及 3种对照品
溶液各 5 μL,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以正丁
醇-冰醋酸-水(3.5∶1∶1)为展开剂,展开;以 0.2%的茚
三酮乙醇溶液为显色剂,在 110℃下加热 10 min。
1.2.4 黄瓜子样品中脂肪油的研究
1.2.4.1 脂肪油的含量测定 取上述 3 种黄瓜子样品
粉末各 5 g,精密称定,分别置于索氏提取器中,以乙
醚为提取溶剂,加热回流提取 8 h,至脂肪油提尽,收
集提取液,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上低
温蒸干,蒸干后,将蒸发皿置烘箱中 100℃干燥 1 h,
移置干燥器中,冷却 30 min,精密称定,计算,即得。
1.2.4.2 黄瓜子样品中脂肪类成分的薄层层析研究
取上述 3 种黄瓜子样品的脂肪油各 0.5 g,精密称定,
分别置 10 mL 量瓶中,加石油醚溶解并稀释至刻度,
摇匀,作为供试品溶液。取亚油酸对照品,加石油醚溶
解制成每 1毫升含有亚油酸 1 mg的溶液,作为对照品
溶液。精密吸取 3种供试品溶液与对照品溶液各 2 μL,
点于同一硅胶 G 薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯-甲
酸(8.5∶1.5∶0.03)为展开剂,展距为 15 cm,以 5%的磷
钼酸乙醇溶液为显色剂,于 100℃下加热 5 min。
2 结果
2.1 黄瓜子炮制品得率
实验结果见表 1。
表 1 黄瓜子炮制品情况统计
2.2黄瓜子样品中钙和磷的含量
按照上述测定钙和磷的方法,分别测定 3 种黄瓜
子样品中的钙和磷,进行回收率试验,并计算钙磷比,
结果见表 2。 实验结果表明,炮制后,黄瓜子中钙含量
较生品略微降低,磷含量有所提高。
黄瓜子生品
黄瓜子清炒品
黄瓜子微波制品
500.0
500.0
500.0
500.0
473.5
486.0
100.0
94.7
97.2
长卵圆形,种皮微黄,瓤白色
长卵圆形,种皮焦黄鼓起,瓤
微黄色
长卵圆形,种皮焦黄鼓起,瓤
微黄色
样品
原质量
(g)
炮制后
(g)
得率
(%)
性状
图 1 磷标准曲线
黄瓜子生品
黄瓜子清炒品
黄瓜子微波制品
37.25
34.84
33.77
0.61
0.46
0.87
97.97~100.12
98.57~100.06
99.13~100.18
13.34
14.21
14.91
1.14
0.28
0.93
98.29~100.58
99.43~100.31
98.76~101.11
2.79∶1
2.45∶1
2.26∶1
样品 钙含量(mg/g) 钙含量 RSD(%) 回收率(%) 磷含量(mg/g) 磷含量 RSD(%) 回收率(%) 钙磷比
表 2 黄瓜子样品中钙和磷的含量(n = 5)
2.3黄瓜子样品中氨基酸薄层层半定量研究
按照上述氨基酸的测定方法进行试验,结果见图
2。由图 2可知,微波制品斑点面积最大,颜色最深,清
炒品次之,生品斑点最小,颜色最浅,表明氨基酸的含
量黄瓜子微波制品和清炒品均高于生品。
2.4 黄瓜子样品中脂肪油的研究
2.4.1 黄瓜子样品中脂肪油的含量测定
按照上述脂肪油方法进行试验,结果见表 3。 实
验结果表明,黄瓜子微波制品的脂肪油含量最高,清
炒品次之,生品含量最低。
2.4.2 黄瓜子样品中脂肪类成分薄层层析定量研究
按照上述的实验方法进行试验,结果见图 3。 结
果表明,黄瓜子炮制品与生品的色谱行为基本一致,黄
瓜子微波炮制品的亚油酸斑点颜色最深, 面积最大,
斑点最清晰。
3 讨论
从实验结果可以看出,不同的炮制方法对黄瓜子
中的化学成分有不同程度的影响。人体中的牙齿和骨
骼主要是由钙和磷以盐的形式构成,钙和磷是一对具
有协同作用的矿物元素,磷能有效促进人体对钙的吸
收,但是过量的磷则会干扰钙的吸收,使钙大量流失,
导致骨质疏松和蛀牙。 经过炮制,黄瓜子中的钙元素
含量升高,磷含量降低。黄瓜子生品的钙磷比为 2.79∶1,
黄瓜子清炒品的钙磷比为 2.45∶1,而黄瓜子微波制
品的钙磷比为 2.26∶1,最接近人体骨骼钙磷比,为临
床应用黄瓜子治疗骨质疏松提供了理论依据。与生品
相比较,两种炮制品的氨基酸、脂肪油含量均有提高。
微波炮制的黄瓜子与炒品相比,药材的炮制得率高,
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
10 20 30 40 50 60
磷含量(μg)



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中国医药导报 2014 年 7月第 11卷第 20期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 20 July 2014
·药品检验·
表 3 黄瓜子样品中脂肪油的含量(n = 3)
注:“*”折算含量=含量×得率
黄瓜子生品
黄瓜子清炒品
黄瓜子微波制品
25.86
30.51
33.79
25.86
28.89
32.85
0.93
0.26
0.31
样品 含量(%) 折算含量(%)* RSD(%)
损失小, 且氨基酸含量及脂肪油含量均高于清炒品。
微波炮制法是利用微波能量集中,选择性高,穿透力
强等特点,使药材本身的水分子的发生震动,产生热
能进而达到炮制的目的。
本次实验针对黄瓜子不同炮制品的化学成分进
行了简单的对比分析,通过实验可知,用微波炮制法
炮制的黄瓜子,各项指标均高于传统的清炒法,其原
因可能是微波炮制法炮制的黄瓜子,受热均匀,温度
稳定,使有效成分含量提高,且利用微波穿透力强的
特点,提高破壁率,有利于有效成分的溶出 [13-14]。 微波
炮制法作为一种新兴的炮制方法,在近年来的各项研
究中被广泛应用。许多研究已证实,合理的炮制方法可
以提高药物疗效,降低药物毒性,与传统炮制方法相
比较,用微波法炮制药材,可以提高药材利用率,节省能
源,简单快捷无污染,但是作为新的炮制方法,在安全
性方面还需要进一步的长期研究,以确保对人体无害。
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(收稿日期:2014-03-20 本文编辑:卫 轲)
Ⅰ:亮氨酸对照品;Ⅱ:谷氨酸对照品;Ⅲ:精氨酸对照品;Ⅳ:黄瓜子
微波制品;Ⅴ:黄瓜子清炒品;Ⅵ:黄瓜子生品
图 2 黄瓜子样品中氨基酸的薄层色谱图
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
Ⅰ:亚油酸对照品;Ⅱ:黄瓜子微波制品;Ⅲ:黄瓜子清炒品;Ⅳ:黄瓜
子生品
图 3 黄瓜子不同炮制品脂肪类成分薄层色谱图
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
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