全 文 ：岗梅根化学成份定性鉴别及其方法的探讨
实验中心 王宁生 冯美蓉 赵 萍 欧卫平
提要 : 本文为探讨中药岗梅根化学成份的定性鉴别方法 , 用各种溶剂时岗梅根所含 化学成份进行分离 、
预 试 。 结果表 明 : 岗梅根所含 生物脸可能是其主要有效 成份 . 同时对岗梅根所含生物硷进行提取 , 并 对 其
氛仿 液进行薄层层析 、 . 纸 电泳分析和荧光分析 . 认为在衬 生药岗梅根化学成分进行分 离、 预试 的基础上 ,
采用薄层层析 、 电泳和荧光分析技术衬生药岗梅根进行定性鉴别 , 结果比较准确 , 且适合我国国情 。
关健词 : 岗梅 /分析 生物检类 /分离和提 纯
光谱刚 定法 , 荧光 中药鉴 定学
色谱法 , 薄层 色谱法 , 纸层
岗梅根为冬青科植物梅叶冬青 〔I le x
a s P r e l l a ( H O O K
一 e 七 A r n . ) C h a m P e X
B e成 h 〕的根 。 主要产于广东 、 广西 。 其性味
苦寒 , 主治功用为清热解毒 、 生津活血 , 治
热病 、 燥渴 、 热泻 、 咳血 、 喉痛等 。 临床报
导 岗梅根还可以防治各种感染 `’ 〕。
本研究在对 岗梅根成份作预 试 的 基 础
上 , 按中药的性味功效类型 , 来探讨生药岗
梅根的定性研究方法 。
一 、 成份预试
( 一 ) 生药来源 : 岗梅根 由中药鉴定教
研室鉴定和提供 。
( 二 ) 岗梅根成份预试样品的制备 :
乙醇提取液 : 岗梅根碎片以 95 肠乙醇水
浴上回流 1小时 , 过滤 , 滤液备用 。
水提取液 : 岗悔根碎片于 60 ℃水浴加热
1 小时 , 过滤 , 滤液备用 。
石油醚提取液 : 岗梅根碎片 加 石 油 醚
( 6 0一 9 。℃ ) 放置 3 小时 ( 不时振摇 ) , 过
滤 , 滤液挥干 , 对残留物进行检测 。
( 三 ) 预试结果 : 岗梅根 中可能含有生
物硷 、 衡体 、 皂式等。 从成份预试及岗梅根
在临床上的主治功效来看 , 所含生物硷可能
是共主要有效成份 。 因此 , 确定对其所含生
物硷作分离和定性鉴别 。
二 、 岗梅根 中总生物硷的提取
收稿 日期 : 1 99 0年 1 1月 30日 。
岗梅根片 20 克 , 加 9 5肠乙醇 160 毫升回
流 2 次 ( 每次 2 小时 ) , 合并乙醇液 , 水洛
上浓缩成浸膏 。 加 5 肠H CI 150 毫升 , 搅拌浸
提 , 过滤 。 滤液加乙醚振摇 , 分离出水相 ,
在水相中加 N a ZC O 3调至 p H I 。 , 再以氯仿提
取 , 分离出氯仿层供分析用 。
三 、 岗梅根抓仿液薄层层析
( 一 ) 层析板 : 硅胶 G (M e r k )加 0 . 4 呱
N a O H湿法铺板 , 厚度 0 . s m m , 凉干 , 1 0 5 cC
活化 1小时。
( 二 ) 展开剂 : 环己烷 : 氯仿 : 丙酮 =
5 : 3 : 0
.
5
( 三 ) 展距 : 垂直上行展开 10 c m 。
( 四 ) 检侧和显色 :
① U V 3 6 5 n m灯下观察 。
②碘化秘钾试剂 。
( 五 ) 结果 : 岗梅根氯仿液 以 毛细 管
( 5声l ) 点样 , 展开 , 结果见图 1。 展开后 ,
挥干溶剂在 U V 36 5 n m 灯下观察到两个明显
的荧光斑点 A 、 B , 两斑点 fR 值分别为 。 . 65 和
0
.
3 9 , 荧光强度A > B ; 碘化钞钾试剂显色 ,
A点呈桔红色 (生物硷 ) , B点不 显 色 。 以
相同条件点样 3 次 , 展开结果均可重复。
四 、 岗梅根氛仿液纸电泳分析
( 一 ) 电泳仪 : L K B 2 1 1 7 型水平式 电
泳仪 ( 瑞典 ) 。
广 州中医学院学报 1 991年第 8卷第 1期
( 二 ) 电泳滤纸 : 2 5 x 3 . s e m ( M u n -k
t e l l瑞典 )
( 三 ) 电泳液 : 3m o l / L ( 3N ) 醋酸 。
( 四 ) 点样 :于滤纸条中央点样 (条状和
点状 ) 1邸 l , 风筒吹干 。然后把滤纸条两端浸
人 电泳液 , 待湿至距样品约 c4 m处 , 取出 ,
于水平方 向拉直 , 使电泳液向中间样品处扩
散 , 直到两侧电泳液都接触到样品 , 使样品
湿润后 , 将此滤纸条夹在干滤纸中轻压 , 吸
去多余 的电泳液 。
( 五 ) 电泳 : 将点样后的滤纸条平放于
电泳仪的支架上 , 两端下垂浸入电泳液中平
衡 20 分钟 , 接通电源 , 在 15 ℃的恒温槽中 ,
分别于 2 5 0V 电泳 2 、 5 、 6小时 。
( 六 ) 检测和显色 : 将电泳 2 、 5 、 6小
时的滤纸条于 40 ℃烘干 。 ①U V 3 6 5 n m灯下
观察 。 ②碘化秘钾试剂喷雾显色 。
( 七 ) 结果
①电泳后烘干滤纸于 U V 3 6 5 n m 灯下观
察 , 在负极区有荧光区带 。
②碘化韧钾试剂喷雾 , 在负极区均可见
到与荧光区带相应 的位置有桔红色的显色区
带 , 且随电泳时间延长显色区带偏向负极 。
但泳动值 ( 加样点到显色区带中心之距离 )
不大 。 ( 图 2 )
用于薄层和电泳分析的样品是经过溶剂
提取和精制的 , 所以薄层和 电泳后对碘化秘
钾产生桔红色显色反应的斑点即为生物硷 。
五 、 肖梅根抓仿液的荧光分析
薄层层析和电泳结果均发现有荧光斑点
和荧光区带 。 为此 , 取岗梅根氯仿液作荧光
分析 。
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图2 岗梅根氯仿液的纸电泳图
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图 1 岗梅根氯仿液的薄层层析图 图 3 岗梅根氯仿液的激发光谱和发射光谱
(一 )仪器 , M P万,一 6 型荧光分光光度
计联有 75 0 0计算机数据处理站 ( P E美国 ) 。
(二 ) 岗梅根氯仿液以氯仿稀释 , 制成
浓度合适的荧光分析样品 。
( 三 ) 设激发狭缝为s n m , 发射狭缝为
3 n m
, 分别作激发和发射光谱扫描 (图 3 ) 。
六 、 讨论
( 一 ) 对一些化学成份尚未有系统研究
或尚未有分离出某一有效成份的生药 , 如何
进行这类生药的质量评定或作较为合理的定
性鉴别 , 是一个值得研究和探讨 的课题。
按岗梅根的性味 、 功效及化学成份预试
的结果 , 提出以所含总生物碱为定性研究的
对象 , 无论从中医中药理论或化学成份类型
来讲都是合理的 。
中药所含有效成份是中药的物质摹础 ,
而中药的功效是这些物质相互作用的表现形
式 。 因此结合中医药理论 , 以中药的功效 、
性味为依据来研究中药作用 ( 药效 ) 的物质
基础是一种切实可行的方法 。 性味苦寒的清
热解毒药 , 主要功效之一是抑菌 , 可用于各
种感染 , 如黄连素 、 黄柏苦贰 、 苦参碱等都
是清热解毒药中分离出的一些成份 , 虽不能
认为这些成份是原生药全部功效 的 物 质基
础 , 但其是部分功效的物质基础 。 对这些物
质研究的结果 , 既可用来阐明中药作用的一
些原理 , 也可用来鉴别和评价生药的质量 。
( 二 ) 碘化秘钾是生物碱的通用试剂 ,
但其与非生物碱物质如蛋白质 、 氨基酸 、 某
些武 、 糖 、 嘿吟 、 甲基化胺等会产生假阳性反
应而干扰生物碱的检出。 因此实验先采用不
同溶剂对所含生物碱进行分离 , 纯化 , 使薄
层和 电泳后的碘化秘钾显色具有特异性 。
( 三 ) 硅胶本身略带酸性 , 对生物碱吸
附较强 , 当使用中性展开剂 时 , 生 物 碱 的
R f值较小且斑点拖尾 。 因此 , 以 0 . 4呱N a O H
液加人硅胶中铺板 , 层析结果 R f值增大 , 斑
点集中 。
( 四 ) 生药成份分析中 , 纸 电泳也是一
种常用的方法 , 其与其他层析法配合应用 ,
可使成份的分离 、 检测更加精确 、 可靠。 考
虑到生物碱本身带有一定的电荷 , 因此实验
设计了以纸电泳分离岗梅根氯仿液 。 所得结
果 与薄层层析检测的结果相符 。
酸性电泳液中 , 电泳分离生物碱在负极
区的泳动值较小 , 提示所检测的生物碱碱性
较弱 。 有人曾提出用浸硅胶滤纸 ( S l i c a
G le i m rP ge n at de P aP 即 ) 电泳来分离生物
碱等成份 , 其泳动值比普通滤纸大 , 分离效
果会更好肉 。
( 五 ) 薄层及电泳后 , 在 U V 3 6 5 n m 灯
下均能观察到明显的荧光斑点 , 因此对岗梅
根氯仿液又作了激发光谱和发射 (荧光 )光谱
扫描 。 每一药材其所含主又化学成份较为恒
定 , 在相同分析条件下 , 其激发和发射光谱
具有稳定的相似性 。 所以两个光谱图也可作
为岗梅根质量的定性参考标 堆 。 但作为定性
特征鉴别 ,导数光谱图 (原 光谱图关于波长的
微分系数对波长入的函数图 ) 比原光谱图能
提供更多 、更精确的定性定量特征信息 〔” 、 ` ’ 。
有关导数光谱对岗梅根定性鉴别研究另文报
导 。
( 六 ) 在方法学上既要应用先进的分析
技术和合理的分析手段来解决中药鉴别和质
量评价中的问题 , 又要顾及我国的国情 , 选
择一些在商业 、 生产单位易接受的技术 。 因
此研究中采用薄层层析 、 电泳和荧光分析技
术 , 但分析前又以各种溶剂对岗梅根所含化
学成份进行分离 , 以保证结果的正确性 。
参 考 文 献
(功新文丰出版公 司 . 新 编中药大 辞典 . 第二版 . 台北 :
新文丰出版公司 1985 , 3 : 1 718
〔2 ) 桥木庸 平著 . 林 明美等译 . 生 药分析 . 北京 : 人 民卫
生出版 社 1 98 1 : 起 始页
〔3〕A . H . L a , v l℃ n ce e t a l . Ide n t if ic a t j o n o f
A m P h e at 职 i en a n d er l at e d i l lic it dr u g s b y s e e o dn
de
r iv 歌 i v e u lt班 Lv l, o le t s P ec tr o l l飞e t r y . A na l . C h e m .
l胎 2 ; 54 : 2 38 5一2豁 7
〔4〕王宁生 , 等 . 导数光 i普法在益智仁挥发油定性鉴肌
中的应 用 . 广 州中医学院学报 19 90 ; 7 了4 ) : 2 2 5
广州 中医学院学报 1991 年第8卷第1期
了幸如如加如切入
经络与针灸
.人丫.人
、 、 , , 峥峥峥厂
不同针刺手法对脾虚模型兔血糖 、 血脂 、 血钙含量的影响
生化教研室 余佩琪
生理教研室 何慕伦
针灸教研室 杨文辉
朱新 丽 练 美莲
庄礼兴 李艳 .惠
提贾 : 本实验 用捻转补 法和平 补平 泻法针利健康和类脾虚模型 兔的 “ 足三里 穴 ” , 观察针 刺前后血糖 、
血脂 、 血钙的水平 . 结果表明 : 针 利能使健康 兔及类脾虚模型 兔血糖含量升高 ( P < 0 . 01 ), 血清总 胆 固
醉 、 血清钙水平 无 变化 , 又寸上 述三项指标 , 两种手法差异 无显著性 . 针申】衬健康兔血清甘油三 醋影响不 明
显 , 但对高甘 油三 醋 的类脾虚模型 兔有降脂 作用 ( P < 0 . 0 5 ) , 且补法优于平补平泻法 ( P < 0 . 0 5 ) , 符
合 ` 虚则补之 ” 的治则 . 提示 , 针 #.1 效应 可能与针利手法和机体机能状态有关 .
关键词 : 脾虚 /针灸疗法 碳水化合物 /血液 脂肪类 /血液
钙 /血 液 足三里 穴 疾病模型 , 动物
临床实践及动物实验均 已证明针刺能使
血搪 、 血脂等生化指标发生变化 , 但对其变
化与针刺手法 、 机体状态之间的关系尚少报
导 。 我们在进行不同针刺手法研究中发现 ,
当兔在不同机能状态下 , 以不同手 法 针 刺
“ 足三里 ” 时 , 引起的血糖 、 血脂 、 血钙变化
不完全一致 。
本文是 比较捻转补法和捻转平补平泻法
对不同状态 ( 健康和类脾虚模型 ) 的纯种兔
针刺前后血搪 、 血脂 、 血钙变化 , 以探索针
刺手法 、 机体状态对针刺效应的影响 , 为临
床针刺治疗与血搪 、 血脂异常等有关疾病提
供实验依据。
材料和方法
Id e n t if i e a t i o n o f C h e m i e a l C o m P o n e n t s o f
R a d乞x 1 1玄e i s A s P 犷e l la 仑
W a ” g N 乞作 g s h e n g F e 牡 9 M e 主宁o n g
Z h o u 几 n g O u 功 e i P乞牡 g
助切 r a ot r y 晓 n铂 r
A b s t r a e t
R a d乞x 11艺e i s A s P r e不la 召 w 鸽 u s e d as 七h e o a m P l e t o P r o v e i爪 o 七h e q u ia i -
t a t i v e id en 乞i月 e a 七i o n m 就 h o d s b y s e a n n 里n g t h e e n m P on en 七s of 七h e e r u d e d r u g
w i七h c h e m i c a l 犷e a g e nt s a n d i n t h e l i g h七 o f i t o c h a r a c t er i s t i c s a n d a c七i o n s
w i t h t h e 七h o o r l e , o f t r胡 i七i o n a l C h i n e s e m e id e i n e .
K e y w o r d s : I L E X A S P R E L L A / a n a l y s i s
A L K A L O I D S / i s o l a t i o n a n d Pu r l f i e a t i o n
C H R O M A T O G R A P H Y
, T H I N L A Y E R
C H R O M A T O G R A P H Y
,
P A P E R
S P E C T R O M E T R Y
,
F L U O R E S C E N C E
P H A R M A C O L O G IC A L I D E N T IF OI A T工O N , T C O
收稿 日期: 1990年11月22日。